Metabolsk tilgjengelighet av metionin i tempeh-chips blant kvinner i fruktbar alder ved bruk av indikator aminosyreoksidasjon (IAAO)-metoden (IAAO)

For den foreløpige studievurderingen vil deltakerne bli pålagt å måle sin kroppsvekt, høyde og hvileenergiforbruk (REE) ved hjelp av indirekte kalorimetri.

Studieprotokollen er en 3-dagers eksperimentell protokoll som består av 2 tilpasningsdager og 1 indikator aminosyreoksidasjon (IAAO) studiedag. For hver 3-dagers eksperimentell protokoll vil deltakerne bli tilbudt enten en referansediett i 3 dager eller en tempeh-diett i 3 dager. For å starte en ny 3-dagers eksperimentell protokoll for samme deltaker, vil det kreves minst 1 ukes intervall for å sikre fullstendig utvasking av sporstoffet.

Under hver tilpasningsperiode vil hver deltaker få 4 like måltider per dag (frokost, lunsj, middag og mellommåltid) som oppfyller 100 % av deres daglige energi- og proteinbehov (Energibehov = Hvileenergiforbruk (REE) × 1,7; Proteinbehov = 1,0 g/kg/dag × kroppsvekt). Måltidene som tilbys vil inkludere en proteinfri formel (påkrevd), proteinfri butterscotch-kjeks (påkrevd), en krystallinsk aminosyreblanding, eller en kombinasjon av den krystallinske aminosyreblandingen med tempeh-chips. Måltidene skal fullføres av deltakerne innen 15 minutter. Et daglig multivitamintilskudd og et 500 mg kolintilskudd vil også bli gitt. I tillegg til vanlig vann, er kun en kopp te eller kaffe uten sukker eller fløte tillatt under tilpasningsdagene.

Under IAAO-studieperioden, etter en nattefaste på 12 timer, vil deltakerne delta på metabolsk laboratorium ved Kolej Tun Syed Nasir (KTSN) i 8 timer. Totalt 9 isonitrogene og isokaloriske timevise måltider vil bli gitt, hvor hvert måltid bidrar med 1/10 av det totale energibehovet (REE × 1,5) og proteinbehovet (1,0 g/kg/dag). Måltidene vil bestå av en proteinfri formel (påkrevd), proteinfri butterscotch-kjeks (påkrevd), og enten en krystallinsk aminosyreblanding eller en kombinasjon av den krystallinske aminosyreblandingen med tempeh-chips. Hvert måltid skal konsumeres innen 15 minutter. De totale måltidene som tilbys vil oppfylle 90 % av deltakernes energi- og proteinbehov. Under eksperimentdagen vil et daglig multivitamintilskudd og 500 mg kolin også bli gitt.

Under de første til fjerde måltidene vil deltakerne kun være pålagt å konsumere de tilbudte måltidene. Fra og med det femte måltidet vil deltakerne motta en konstant oral isotopinnsetting. Fenylalanin, en uunnværlig aminosyre hvis endelige metabolisme produserer karbondioksid, vil bli brukt som sporstoff for å måle oksidasjon. I tillegg vil NaH¹³CO₃ (¹³C-natriumhydrogenkarbonat) administreres som en primeringsdose for å la ¹³CO₂ (karbon-13 merket CO₂) i pusten nå et plateau innen 2-3 timer. En dose på 0,176 mg/kg av NaH¹³CO₃ og 0,66 mg/kg av L-[1-¹³C]fenylalanin vil bli gitt som primeringsisotopen under det femte måltidet. Fra det femte måltidet til det siste måltidet vil 1,2 mg/kg av L-[1-¹³C]fenylalanin bli gitt kontinuerlig. Mengden fenylalanin gitt som sporstoff (unntatt primeringsisotopen) vil bli trukket fra den dietetiske tilførselen for å opprettholde et totalt fenylalanininntak på 30 mg/kg/dag. Totalt 40 mg/kg/dag (160 % av det totale aromatiske aminosyrebehovet) av tyrosin vil også bli gitt for å sikre at ingen merket fenylalanin hydroksyleres for å oppfylle tyrosinbehovet. Etter det femte måltidet vil utåndet karbondioksidproduksjonsrate (VCO₂) bli målt ved hjelp av indirekte kalorimetri i 15 minutter.

For pusteprøveinnsamling vil prøver bli samlet hvert 15. minutt før sporstoffprotokollen initieres (dvs. før det femte måltidet) og hvert 15. minutt etter at isotopisk stabil tilstand er oppnådd (omtrent 2,5 timer etter isotopadministrering) til slutten av studien. Ytterligere pusteprøver vil bli samlet 30 minutter etter slutten av studien. Hver pusteprøve vil bli samlet i triplikat ved bruk av 10 mL ikke-silikonbelagte rør. Anrikingen av ¹³CO₂ i pusten vil bli analysert ved hjelp av en kontinuerlig strøm isotopforhold massespektrometer og uttrykt som atomprosent overskudd (APE) over basislinjen. Andelen ¹³CO₂ (F¹³CO₂) fra L-[1-¹³C]fenylalanin oksidasjon i forhold til mengden administrert vil bli beregnet.

Ved bruk av en lineær blandet effekt regresjonsmodell vil referanse- og test IAAO-responshellingene bli generert fra F¹³CO₂-målinger og deres tilsvarende metionin-inntak, med et felles utgangspunkt for F¹³CO₂-responsen ved basis metionin-inntak. Den metabolske tilgjengeligheten (MA) av metionin i testproteinet vil bli bestemt ved hjelp av helningsforholdsmetoden ved å bruke følgende ligning:

MA (%) = (Testprotein / Referanseprotein) × 100.