신경모세포종의 종양형성에서 방향족 탄화수소 수용체의 역할 및 MYCN 발현과의 관계

신경모세포종(NB)은 유아기의 가장 흔한 악성 종양입니다. NB 환자의 약 60%가 임상적으로 IV기 질환으로 진단되고 5년 생존율이 30% 이하로 예후가 매우 나쁩니다. NB의 분자 마커는 종양 행동에 큰 영향을 미칩니다. MYCN 증폭은 NB 환자의 불량한 결과를 예측하는 가장 잘 알려진 마커입니다. 그러나 MYCN이 NB 셀 동작에 미치는 영향은 아직 알려지지 않았습니다. 우리의 예비 연구에서 우리는 MYCN 증폭이 있는 10개의 NB 종양과 정상적인 MYCN 복제 수를 가진 10개의 차등 유전자 발현에 대한 게놈 차원의 분석을 수행했습니다. 우리는 방향족 탄화수소 수용체(AHR)가 MYCN 발현과 역으로 상관관계가 있음을 발견했습니다. 이 관계는 83개의 NB 종양 샘플에서 확인되었습니다. 또한, NB 종양의 면역염색에 의한 양성 AHR 발현은 유리한 예후를 예측하였다. 이러한 일련의 증거는 AHR이 MYCN 발현과 관련될 뿐만 아니라 NB의 종양 형성에 중요한 역할을 한다는 것을 보여줍니다. 따라서 이 프로젝트에서는 AHR과 MYCN의 관계를 더 연구하는 것을 목표로 합니다. 또한, NB의 종양 형성에서 AHR의 가능한 역할이 명확해질 것입니다. 구체적으로 다음 세 가지 목표를 가진 3개년 프로젝트를 제안합니다.

목표 I. AHR과 MYCN 발현 사이의 분자 관계를 결정합니다. AHR은 E2F1 발현을 억제하는 것으로 나타났습니다. E2F1은 반대로 MYCN의 발현을 상향 조절하는 것으로 밝혀졌습니다. 예비 마이크로 어레이 연구에서 E2F1 표현이 MYCN 발현과 양의 상관 관계가 있지만 AHR 발현과는 반비례 관계가 있음을 발견했습니다. 따라서 NB 세포는 AHR 발현 벡터 또는 AHR siRNA로 형질감염된 다음, AHR이 E2F1을 통해 MYCN 발현을 조절할 수 있는지 명확히 하기 위해 관련 E2F1 및 MYCN 발현을 검사합니다. 또한, MYCN에 대한 AHR의 영향이 E2F1에 의존하는지 여부를 결정하기 위해 E2F1 수준도 조작됩니다. 또한, NB 종양 샘플에서 E2F1 발현을 검사하여 생체 내 역할을 명확히 할 것입니다.

목표 II. NB 셀 동작에 대한 AHR 발현의 영향을 결정합니다. 여러 NB 세포주에서 기준선 AHR 발현 수준을 조사할 것이다. 그런 다음 AHR은 NB 세포에서 유전자 형질감염에 의해 과발현됩니다. AHR 과발현 후 세포 증식, 이동 및 분화를 평가한다. 또한 정상 뉴런 세포의 AHR 발현도 검사하고 AHR의 하향 조절이 암 발병으로 이어질 수 있는지 여부를 siRNA에 의해 억제합니다.

목표 III. AHR이 NB에 대한 유전자 치료의 표적이 될 수 있는지 확인합니다. AHR 유전자 형질감염 전후에 정상 MYCN 또는 MYCN 증폭을 갖는 NB 세포를 누드 마우스에 접종하여 생체내 NB 세포 거동에 대한 AHR 발현의 효과를 입증하였다. 그런 다음 AHR을 야생형 NB 종양에 형질감염시켜 종양 성장이 AHR 발현에 의해 억제될 수 있는지 확인합니다. 그런 다음 야생형 종양 및 AHR로 형질감염된 종양을 마이크로어레이 분석하여 차등 AHR 발현과 함께 유전자 발현 변화를 평가하기 위해 인간 종양 데이터 세트와 비교합니다. 전체적으로 우리의 연구는 AHR과 MYCN 사이의 관계를 확립할 뿐만 아니라 NB의 종양 형성에서 AHR-MYCN 상호 작용의 기능적 역할을 묘사할 수 있게 합니다.