노인 커뮤니티 거주자에 대한 감독 운동 훈련 효과

설계 3차 진료 병원의 기관 검토 위원회가 연구를 승인했습니다(IRB 번호: 201602058A3C502 및 NCT04839796). 2021년 5월부터 11월까지 노인에 대한 운동 요법의 효과에 대한 평가자 및 대상자 맹검 연구가 포함된 무작위 통제 시험이 수행되었습니다. 모든 과목은 실험 절차를 이해한 후 정보에 입각한 동의를 제공했습니다. 그런 다음 참가자는 컴퓨터 생성 숨겨진 할당 일정을 사용하여 병원 또는 가정 운동 훈련(HET) 그룹에서 24개 세션 동안 중등도 연속 훈련(MICT)에서 30분 동안 감독 운동 훈련(SET)을 받도록 무작위로 할당되었습니다. 맹검 평가자가 무작위 배정 전과 운동 훈련을 마친 후 데이터를 수집했습니다.

참가자 지역 사회 병원에 인접하여 거주하는 55세 이상의 지역 사회 거주 개인을 조사했습니다. 미니 정신 상태 검사(MMSE) 점수 > 24 및 음의 요추 및 하지 퇴행성 관절 장애를 가진 노인을 모집했습니다. 이전 연구에서 언급한 불안정한 임상양상을 보인 자, 즉 Asian Working Group for Sarcopenia의 권고에 따라 진단된 근육감소증은 본 연구의 대상자가 아니었다. 또한 ACSM(American College of Sports Medicine)에서 제안한 에어로빅 활동에 절대 금기 사항이 있는 개인도 제외했습니다. SF-36(Medical Outcomes Study Short Form 36)의 기준선 신체 구성 요소 점수(PCS) 및 정신 구성 요소 점수(MCS)를 사용하여 삶의 질(QoL)을 평가했으며 모집 후 24주 후에 재평가했습니다. 포함된 참가자의 기본 인구통계학적 특성 및 임상 정보를 주의 깊게 기록했습니다.

운동 훈련 모든 피험자는 스마트 워치(WDI08, WisDat Inc., Taichung, Taiwan)를 착용하고 하루에 최소 8000보(stp/d)를 걷도록 지시받았습니다. 8000 stp/d 외에도 SET 참가자는 8일 동안 우리 병원에서 자전거 에르고미터(Ergoselect 150P, ergoline GmbH, Bitz, Germany)에서 30분 동안 감독된 MICT(최대 예상 HR의 70%)의 24개 세션을 받았습니다. -주 기간. 모든 대상자는 모집 후 첫 8주 동안 전화 및 앱을 통해 매주 >=8000 stp/d를 복용하도록 상기시켰습니다. MICT를 완료한 후 SET 참가자는 추가 16주 동안 >=8000 stp/d를 복용하도록 지시받았습니다. HET 참가자는 24주 후속 조치 기간 동안 8000 stp/d를 복용하도록 지시 받았습니다. 후반 16주 동안, >=8000 stp/d 복용 지시는 모든 피험자에게 상기되지 않았습니다. 운동 훈련은 ACSM 가이드라인에 따라 운동 중 증상/징후가 있을 때 종료하였다.20 체력 측정 손목에 차는 스마트워치(WDI08, Wisdat Inc., Taichung, Taiwan)는 과목별 일일 걸음 수와 에너지 소모량을 기록하고, 과목별 평균 걸음 수와 하루 에너지 소모량(Kcal)을 기록했다. 일주일은 24주 후속 조치 기간 동안 지역사회에서 일주일 동안 평균 일일 걸음 수와 에너지 소비량을 나타냅니다.

종아리 둘레(Calf_circ)는 양쪽 다리에서 가장 큰 Calf_circ를 평균하여 구했습니다. 지능형 움직임 분석(eFitHealth, uCare Medical Electronics, Co. Ltd., Miaoli, Taiwan) 대화형 음성 및 3D 깊이 이미지 가이드를 사용하여 2분 걸음 수, 5회 기립 지속 시간 및 의자 앉기 및 앉기 -도달 거리(보충 자료 1). 위의 각 테스트는 VO2max(eV O2max), 하지 근력 및 유연성을 각각 추정하는 데 사용되었습니다.21 총체수분량(TBW), 무기질량, 단백질량(Prot), 제지방량(LBM), 골격근량(SKM), 체지방량(BFM), 기초대사량(BMR) 등 체성분을 측정하였다. 다중 주파수 생체 임피던스 분석 (Inbody 720, Inbody Co., Ltd., CA, USA). 위의 측정은 최초 방문 전, 8주 후 및 24주 후에 문서화되었습니다.

RNA 추출 모집 시, 최초 방문으로부터 8주 및 24주에 각 피험자로부터 전혈 10ml를 채혈하여 3.2% 시트르산나트륨이 들어 있는 튜브에 넣었습니다. 샘플을 360xg에서 15분 동안 원심분리하고, 상층액을 실온 25℃에서 20분 동안 2400xg에서 추가로 원심분리하여 혈장 혈소판 수를 2.5×10^8/ml 미만으로 유지했습니다. 400 microL의 처리된 혈장을 2mL 에펜도르프(Eppendorf corp. 독일 함부르크) 1200 microL TRIzol(ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) 및 5 microL miR-39(5x10^-15 mol/microL), C. elegans 및 2 microg의 외인성 대조군과 혼합 (혈장 내 10 microg/mL) 효모 RNA(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 실온에서 15분 동안. 또 다른 320 microL 클로로포름을 첨가하고 5분 동안 실온에 두었습니다. 표본을 12000 xg에서 15분 동안 4℃에서 원심분리하고 300 microL 무색 유체층을 흡입하여 -80℃에서 밤새 900 microL 얼음 100% 에탄올과 혼합했습니다. 준비된 검체를 Direct-zol 컬럼(Direct-zol RNA Miniprep, Zymo Research corp., Irvine, CA, USA)에 넣고 12000 xg에서 30초간 원심분리하였다. 그런 다음 컬럼을 새로운 수집 튜브로 옮기고 400 microL RNA 세척 완충액과 혼합한 후 12000 xg에서 30초 동안 원심분리했습니다. 80 microL의 DNase I reaction mix(DNase I 효소 5 microL + DNA 분해 완충액 75 microL)를 RNA 세척 완충액을 버린 후 튜브에 첨가하고 실온에서 15분 동안 배양했습니다. 추가 400 microL 사전 세척 완충액을 튜브에 넣고 12000 xg에서 30초 동안 원심분리했습니다. 그런 다음 컬럼을 새로운 1.5 mL RNase-free 튜브로 옮기고 실온에서 2분 동안 80 microL nuclease-free water로 처리했습니다. 준비된 샘플을 12000 xg에서 2분 동안 원심분리하여 RNA 용액을 용출시켰다.

위의 세 가지 다른 시간에서 miR-21, miR-126, miR-146a 및 miR-222 수준을 분석했습니다. 혈장 microRNA 수준을 평가하기 위해 RT-qPCR 시스템(T100TM Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories Inc., Berkeley, CA, USA)을 사용하여 1단계 실시간 정량 중합효소 연쇄 반응(RT-qPCR)을 수행했습니다. 총 RNA 추출 100ng, TaqMan 마스터 믹스(ThermoFisher) 10μL, 뉴클레아제 없는 물 5.8μL, 범용 프로브 라이브러리 0.2μL(10μM), 0.1μL RNase 억제제, 자체 제작한 1μL 정방향 프라이머 및 1μL의 혼합물 miR-39, miR-126 및 miR-146a용 microL 역방향 프라이머와 2 microL cDNA 주형을 얼음 위에서 만들었습니다. 모든 반응은 48-웰 플레이트에서 95°C에서 3분 동안 인큐베이션한 다음, 95°C에서 5초, 60°C에서 10초, 72°C에서 1초의 40주기를 수행했습니다. 외인성 대조군으로서 1차 C. elegans miR-39(C-miR-39)에 대한 자가 구축 정방향 및 역방향 프라이머 서열. 인간 miR-126(miR-126) 및 miR-146a(miR-146a)(보충 표 1)는 외인성 대조군에 의해 정규화되었으며 후속 조치 동안 microRNA 수준 발현을 결정하는 데 사용되었습니다.

miRCURY LNA SYBR Green PCR 키트(Qiagen)를 사용하여 인간 miR-21(miR-21) 및 miR-222(miR-222)를 결정했습니다. 뉴클레아제가 없는 물에서 4 microL 5X miRCURY RT SYBR Green Reaction Buffer, 2 microL 10X miRCURY RT Wnzyme Mix 및 14 microL의 100 ng 총 RNA 추출 혼합물을 48-웰 플레이트에서 42°C에서 60분 동안 배양하고 95°C에서 cDNA를 생성합니다. Qiagen에서 구입한 2 microL C-miR-39(또는 miR-21/ 또는 miR-222) 프라이머, 10 microL miRCURY SYBR Green Master Mix, 2 microL nuclease-free water 및 6 microL 5X 생성 cDNA 템플릿을 포함하는 혼합물을 95°C에서 2분, 95°C에서 10초, 56°C에서 60초의 40주기. has-miR-21 및 hsa-miR-222는 C-miR-39에 의해 정규화되었으며 후속 조치 동안 microRNA 수준 발현을 결정하는 데 사용되었습니다.

염증 활동의 측정 300 microL의 혈청을 1:2 비율로 희석했습니다. 웰당 50μL의 준비된 샘플과 교정기를 검정 플레이트에 이중으로 로드했습니다(Multiplex Human Cytokine Panel 1, Boster Biological Technology, Pleasanton, CA, USA). 항체를 포함하는 각 웰은 IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-10 및 TNFα를 포획했습니다. 결합되지 않은 단백질을 씻어낸 후 biotinylated 분석물 특정 항체를 포함하는 혼합물을 추가합니다. biotinylated 항체는 각각의 특정 배열된 분석물에 대한 샌드위치를 ​​완성했습니다. 결합되지 않은 비오티닐화 항체를 씻어낸 후, SHRP(streptavidin horseradish peroxidase)를 첨가합니다. 추가 세척 후 어레이의 각 위치에 남아 있는 SHRP의 양은 위의 초기 캡처된 사이토카인의 양에 비례합니다. 배열의 각 위치에서 접합된 효소의 양은 화학발광 기질을 추가하여 측정됩니다.

통계 분석 데이터는 평균(95% CI) 또는 n(%)으로 표시됩니다. 두 그룹 간의 연속 및 명목 매개변수의 차이는 각각 Student-t 및 카이제곱 검정으로 추정했습니다. 반복 측정 ANOVA는 각 그룹의 세 시점에서 측정된 연속 매개 변수의 차이를 분석하기 위해 수행되었습니다. Pearson 상관관계는 체력과 miRNA 사이의 관계를 찾기 위해 수행되었습니다. 0.05 미만의 p 값을 통계적 유의성으로 간주했습니다.