监督运动训练对老年社区居民的影响

设计 三级医院的机构审查委员会批准了该研究（IRB 号：201602058A3C502 和 NCT04839796）。 从 2021 年 5 月到 2021 年 11 月，进行了一项随机对照试验，由评估者和受试者盲法研究运动方案对老年人的影响。 所有受试者在了解实验程序后都提供了知情同意书。 然后，参与者被随机分配到医院或家庭运动训练 (HET) 组，接受 30 分钟的中等强度连续训练 (MICT) 监督运动训练 (SET)，使用计算机生成的隐蔽分配时间表进行 24 次训练。 在随机化之前和完成运动训练之后，由盲法评估员收集数据。

参与者 居住在社区医院附近且年龄 >=55 岁的社区居民接受了调查。 招募了简易精神状态检查 (MMSE) 评分 > 24 且腰椎为阴性以及下肢退行性关节障碍的老年人。 那些在我们之前的研究中提到的不稳定的临床表现，或者根据亚洲肌肉减少症工作组的建议诊断为肌肉减少症的人，不属于该研究的候选人。 我们还排除了美国运动医学会 (ACSM) 建议的有氧运动绝对禁忌症的个体。 医疗结果研究简表 36 (SF-36) 中的基线身体成分评分 (PCS) 和心理成分评分 (MCS) 用于评估生活质量 (QoL)，并在招募 24 周后重新评估。 仔细记录了纳入参与者的基线人口统计学特征和临床信息。

运动训练 所有受试者都被指示佩戴智能手表（WDI08，WisDat Inc.，台中，台湾）并且每天至少走 8000 步（stp/d）。 除了 8000 stp/d 之外，SET 参与者还在我们医院接受了 24 次有监督的 MICT（最大预测 HR 的 70%）30 分钟，时间为 8 -周期间。 在通过电话和应用程序招募后的前 8 周内，提醒所有受试者每周服用 >=8000 stp/d。 完成 MICT 后，SET 参与者被指示再服用 >=8000 stp/d 16 周。 HET 参与者被指示在 24 周的随访期内每天服用 8000 stp。 在后16周内，所有受试者均未提醒服用>=8000 stp/d的指导。 根据 ACSM 指南，当受试者在运动过程中出现症状/体征时，运动训练终止。 20 体能测量 腕戴式智能手表（WDI08，Wisdat Inc.，台中，台湾）记录了每个受试者每天的步数和能量消耗，以及每天的平均步数和能量消耗（Kcal）一周表示在 24 周的随访期间社区中一周的平均每天步数和能量消耗。

小腿围（Calf_circ）是通过对双侧腿中最大的Calf_circ进行平均得到的。 智能运动分析（eFitHealth，uCare Medical Electronics, Co. Ltd., Miaoli, Taiwan）使用交互式语音和 3D 深度图像指南来评估 2 分钟步数、5 次坐到站持续时间和椅子坐和坐-到达距离（补充数据 1）。 上述每项测试分别用于估计 VO2max (eV O2max)、下肢肌肉力量和柔韧性。 21 测量身体成分，包括全身水分（TBW）、矿物质部分、蛋白质含量（Prot）、瘦体重（LBM）、骨骼肌质量（SKM）、体脂肪量（BFM）和基础代谢率（BMR）通过多频生物阻抗分析（Inbody 720，Inbody Co.，Ltd.，CA，USA）。 以上测量记录在初次就诊前、8 周后和 24 周后。

RNA 提取 在招募、8 周和初次就诊后的 24 周从每位受试者采集 10 ml 全血的血液样本被放置在含有 3.2% 柠檬酸钠的试管中。 然后将样品以360xg离心15分钟，将上清液在25℃室温下以2400xg进一步离心20分钟以保持血浆血小板计数小于2.5×10^8/ml。 将 400 微升处理过的血浆置于 2mL eppendorf (Eppendorf corp. 德国汉堡）与 1200 微升 TRIzol（ThermoFisher Scientific Inc.，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆）和 5 微升 miR-39（5x10^-15 摩尔/微升）、外源对照、线虫以及 2 微克混合（血浆中 10 微克/毫升）酵母 RNA（Invitrogen，卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国）在室温下处理 15 分钟。 加入另外320微升氯仿并在室温下放置5分钟。 将标本在4℃以12000×g离心15分钟，吸取300微升无色液层与900微升冰镇100％乙醇在-80℃下混合过夜。 将准备好的标本放入 Direct-zol 柱（Direct-zol RNA Miniprep，Zymo Research corp.，Irvine，CA，USA），然后以 12000 x g 离心 30 秒。 然后将柱转移到新的收集管中，并在与 400 微升 RNA 洗涤缓冲液混合后以 12000 x g 离心 30 秒。 在丢弃 RNA 洗涤缓冲液后，将 80 微升的 DNase I 反应混合物（DNase I 酶 5 微升 + DNA 消化缓冲液 75 微升）添加到管中，并在室温下孵育 15 分钟。 将额外的 400 微升预洗涤缓冲液引入管中，并以 12000 x g 离心 30 秒。 然后将柱转移到新的 1.5 mL 无 RNase 管中，并在室温下用 80 微升无核酸酶水处理 2 分钟。 将制备的样品以12000xg离心2分钟以洗脱RNA溶液。

分析上述三个不同时间血浆微小RNA水平miR-21、miR-126、miR-146a和miR-222水平的定量。 使用 RT-qPCR 系统（T100TM Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories Inc., Berkeley, CA, USA）进行一步实时定量聚合酶链反应 (RT-qPCR) 以评估血浆 microRNA 水平。 100 ng 总 RNA 提取物、10 μL TaqMan 预混液（ThermoFisher）、5.8 μL 无核酸酶水、0.2 μL 通用探针库 21（10 μM）、0.1 μL RNase 抑制剂、自构建的 1 μL 正向引物和 1 miR-39、miR-126 和 miR-146a 的 microL 反向引物和 2 microL cDNA 模板在冰上创建。 所有反应均在 48 孔板中于 95°C 孵育 3 分钟，然后进行 40 个 95°C 5 秒、60°C 10 秒和 72°C 1 秒的循环。 自构建的初级线虫 miR-39 (C-miR-39) 正向和反向引物序列作为外源对照。 人 miR-126 (miR-126) 和 miR-146a (miR-146a)（补充表 1）通过外源对照进行标准化，并用于确定后续过程中 microRNA 水平的表达。

miRCURY LNA SYBR Green PCR 试剂盒 (Qiagen) 用于测定人 miR-21 (miR-21) 和 miR-222 (miR-222)。 将 4 微升 5X miRCURY RT SYBR Green Reaction Buffer、2 微升 10X miRCURY RT Wnzyme Mix 和 14 微升 100 ng 总 RNA 提取物在无核酸酶水中的混合物在 48 孔板中于 42°C 孵育 60 分钟，然后然后 95°C 生成 cDNA。 将含有 2 微升 C-miR-39（或 miR-21/ 或 miR-222）购自 Qiagen 的引物、10 微升 miRCURY SYBR Green Master Mix、2 微升无核酸酶水和 6 微升 5X 生成的 cDNA 模板的混合物在95°C 2 分钟，然后是 40 个 95°C 10 秒和 56°C 60 秒的循环。 has-miR-21 和 hsa-miR-222 由 C-miR-39 标准化，并用于确定后续过程中 microRNA 水平的表达。

炎症活性的测定 300 微升血清按 1:2 的比例稀释。 将 50 微升准备好的样品和校准器一式两份加载到检测板上（多重人类细胞因子面板 1，博斯特生物技术公司，普莱森顿，加利福尼亚州，美国）。 每个含有抗体的孔都捕获 IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-10 和 TNFα。 洗去任何未结合的蛋白质后，加入含有生物素化分析物特异性抗体的混合物。 生物素化抗体完成了每个特定排列分析物的三明治。 洗去未结合的生物素化抗体后，加入链霉亲和素辣根过氧化物酶 (SHRP)。 额外洗涤后，阵列每个位置上剩余的 SHRP 量与上述最初捕获的细胞因子的量成正比。 通过添加化学发光底物测量阵列每个位置上结合酶的量。

统计分析 数据表示为平均值 (95% CI) 或 n (%)。 连续和名义参数的差异以及两组之间的差异分别通过学生 t 和卡方检验进行估计。 进行重复测量方差分析，分析各组在三个时间点测量的连续参数的差异。 执行皮尔逊相关性以发现身体健康与 miRNA 之间的关系。 小于 0.05 的 p 值被认为具有统计学意义。