Effets de l'entraînement physique supervisé sur les personnes âgées de la communauté

Conception Le comité d'examen institutionnel d'un hôpital de soins tertiaires a approuvé l'étude (numéro IRB : 201602058A3C502 et NCT04839796). Un essai contrôlé randomisé avec un évaluateur et un sujet en aveugle pour les effets des régimes d'exercice sur les personnes vieillissantes a été réalisé de mai à novembre 2021. Tous les sujets ont donné leur consentement éclairé après avoir compris les procédures expérimentales. Les participants ont ensuite été répartis au hasard pour subir 30 minutes d'entraînement physique supervisé (SET) lors d'un entraînement continu d'intensité modérée (MICT) pendant 24 séances dans les groupes d'entraînement à l'hôpital ou à domicile (HET) à l'aide d'un calendrier d'attribution caché généré par ordinateur. Les données ont été recueillies par un évaluateur en aveugle avant la randomisation et après avoir terminé l'entraînement physique.

Participants Les personnes résidant dans la communauté et âgées de plus de 55 ans, qui vivaient à côté d'un hôpital communautaire, ont été interrogées. Des adultes âgés avec un score au mini-examen de l'état mental (MMSE) > 24 et une colonne lombaire négative ainsi qu'un trouble dégénératif des articulations des membres inférieurs ont été recrutés. Ceux qui avaient des présentations cliniques instables mentionnées dans nos études précédentes, ou une sarcopénie, diagnostiquée sur la base de la recommandation de l'Asian Working Group for Sarcopenia, n'étaient pas candidats à l'étude. Nous avons également exclu les personnes présentant des contre-indications absolues aux activités aérobiques, suggérées par l'American College of Sports Medicine (ACSM). Le score de base de la composante physique (PCS) et les scores de la composante mentale (MCS) du formulaire court 36 de l'étude sur les résultats médicaux (SF-36) ont été utilisés pour évaluer la qualité de vie (QdV) et ont été réévalués 24 semaines après le recrutement. Les caractéristiques démographiques de base et les informations cliniques des participants inclus ont été soigneusement enregistrées.

Entraînement à l'exercice Tous les sujets ont reçu pour instruction de porter une montre intelligente (WDI08, WisDat Inc., Taichung, Taïwan) et de faire au moins 8 000 pas par jour (stp/d). En plus de 8000 stp/j, les participants au SET ont subi 24 séances de MICT supervisé (70 % de la FC maximale prévue) pendant 30 min sur un vélo ergomètre (Ergoselect 150P, ergoline GmbH, Bitz, Allemagne) dans notre hôpital pendant une période de 8 ans. -période d'une semaine. Il a été rappelé à tous les sujets de prendre >= 8000 stp/j chaque semaine pendant les 8 premières semaines après le recrutement par appel téléphonique et application. Après avoir terminé le MICT, les participants au SET ont été invités à prendre> = 8000 stp / j pendant 16 semaines supplémentaires. Les participants au HET ont reçu pour instruction de prendre 8 000 stp/j au cours de la période de suivi de 24 semaines. Au cours des 16 dernières semaines, l'instruction de prendre>= 8000 stp/j n'a pas été rappelée à tous les sujets. L'entraînement à l'exercice a été interrompu lorsque le sujet présentait des symptômes/signes pendant l'exercice conformément aux directives de l'ACSM.20 Mesure de la forme physique La montre intelligente portée au poignet (WDI08, Wisdat Inc., Taichung, Taïwan) a enregistré le nombre de pas quotidiens et la dépense énergétique de chaque sujet, ainsi que le nombre moyen de pas et la dépense énergétique (Kcal) par jour dans une semaine représentait la moyenne des pas quotidiens et la dépense énergétique d'une semaine dans la communauté au cours de la période de suivi de 24 semaines.

La circonférence du mollet (Calf_circ) a été obtenue en faisant la moyenne du plus grand Calf_circ dans les jambes bilatérales. Analyse intelligente des mouvements (eFitHealth, uCare Medical Electronics, Co. Ltd., Miaoli, Taïwan) à l'aide de voix interactives et de guides d'images de profondeur 3D pour évaluer le nombre de pas de 2 minutes, la durée assis-debout 5 fois et la chaise assis-et -distance de portée (données supplémentaires 1). Chacun des tests ci-dessus a été utilisé pour estimer la VO2max (eV O2max), la force musculaire des membres inférieurs et la flexibilité, respectivement.21 La composition corporelle, y compris l'eau corporelle totale (TBW), la portion minérale, la quantité de protéines (Prot), la masse corporelle maigre (LBM), la masse musculaire squelettique (SKM), la masse grasse corporelle (BFM) et le taux métabolique basal (BMR) ont été mesurés par analyse de bioimpédance à fréquences multiples (Inbody 720, Inbody Co., Ltd., CA, USA). Les mesures ci-dessus ont été documentées avant, 8 semaines après et 24 semaines après la visite initiale.

Extraction d'ARN Un prélèvement sanguin de 10 ml de sang total de chaque sujet au moment du recrutement, à 8 semaines et à 24 semaines de la visite initiale a été placé dans un tube contenant 3,2 % de citrate de sodium. Les échantillons ont ensuite été centrifugés à 360xg pendant 15 min, le surnageant a ensuite été centrifugé à 2400xg pendant 20 min à température ambiante de 25 ℃ pour maintenir le nombre de plaquettes plasmatiques inférieur à 2,5 × 10 ^ 8 / ml. Du plasma traité de 400 microL a été placé dans un Eppendorf de 2 mL (Eppendorf corp. Hamburg, Allemagne) à mélanger avec 1200 microL TRIzol (ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) et 5 microL miR-39 (5x10^-15 mol/microL), témoin exogène, de C. elegans ainsi que 2 microg (10 microg/mL dans le plasma) ARN de levure (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) pendant 15 min à température ambiante. Un autre 320 microL de chloroforme a été ajouté et placé à température ambiante pendant 5 min. L'échantillon a été centrifugé à 12000 xg pendant 15 min à 4 ℃ et une couche de fluide incolore de 300 microL a été aspirée pour se mélanger avec 900 microL d'éthanol glacé à 100% pendant une nuit à -80 ℃. L'échantillon préparé a été placé dans la colonne Direct-zol (Direct-zol RNA Miniprep, Zymo Research corp., Irvine, CA, USA) et a ensuite été centrifugé à 12000 xg pendant 30 secondes. La colonne a ensuite été transférée dans un nouveau tube de collecte et a été centrifugée à 12000 xg pendant 30 secondes après mélange avec 400 microL de tampon de lavage d'ARN. Un mélange réactionnel de DNase I de 80 microL (enzyme DNase I 5 microL + tampon de digestion d'ADN 75 microL) a été ajouté au tube après avoir jeté le tampon de lavage d'ARN et a été incubé à température ambiante pendant 15 min. Un tampon de prélavage supplémentaire de 400 microL a été introduit dans le tube et a été centrifugé à 12 000 xg pendant 30 secondes. La colonne a ensuite été transférée dans un nouveau tube sans RNase de 1,5 mL et a été traitée avec 80 microL d'eau sans nucléase à température ambiante pendant 2 minutes. L'échantillon préparé a été centrifugé à 12000 xg pendant 2 min pour éluer la solution d'ARN.

La quantification des niveaux de microARN plasmatiques miR-21, miR-126, miR-146a et miR-222 aux trois moments différents ci-dessus a été analysée. Une réaction en chaîne par polymérase quantitative en temps réel (RT-qPCR) en une étape a été réalisée à l'aide d'un système RT-qPCR (T100TM Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories Inc., Berkeley, CA, USA) pour évaluer les niveaux de microARN plasmatiques. Un mélange de 100 ng d'extraction d'ARN total, 10 microL de mélange maître TaqMan (ThermoFisher), 5,8 microL d'eau sans nucléase, 0,2 microL de bibliothèque de sondes universelles 21 (10 microM), 0,1 microL d'inhibiteur de RNase, des amorces directes auto-construites de 1 microL et 1 Des amorces inverses microL pour miR-39, miR-126 et miR-146a et une matrice d'ADNc de 2 microL ont été créées sur de la glace. Toutes les réactions ont été incubées dans une plaque à 48 puits à 95°C pendant 3 min, suivies de 40 cycles de 95°C pendant 5 sec, 60°C pendant 10 sec et 72°C pendant 1 sec. Séquences d'amorces directes et inverses auto-construites pour le miR-39 primaire de C. elegans (C-miR-39) comme contrôle exogène. Les miR-126 humains (miR-126) et miR-146a (miR-146a) (tableau supplémentaire 1) ont été normalisés par le contrôle exogène et ont été utilisés pour déterminer les expressions des niveaux de microARN au cours du suivi.

Le kit PCR miRCURY LNA SYBR Green (Qiagen) a été utilisé pour déterminer le miR-21 humain (miR-21) et le miR-222 (miR-222). Un mélange de 4 microL 5X miRCURY RT SYBR Green Reaction Buffer, 2 microL 10X miRCURY RT Wnzyme Mix et 14 microL de 100 ng d'extraction d'ARN total dans de l'eau sans nucléase a été incubé dans une plaque de 48 puits à 42°C pendant 60 min et suivi de 95°C pour générer l'ADNc. Un mélange contenant 2 microL d'amorces C-miR-39 (ou miR-21/ ou miR-222) achetées auprès de Qiagen, 10 microL de miRCURY SYBR Green Master Mix, 2 microL d'eau sans nucléase et 6 microL de matrice d'ADNc générée 5X a été incubé à 95°C pendant 2 min, suivi de 40 cycles de 95°C pendant 10 sec et 56°C pendant 60 sec. has-miR-21 et hsa-miR-222 ont été normalisés par le C-miR-39 et ont été utilisés pour déterminer les niveaux d'expression des microARN au cours du suivi.

Détermination de l'activité inflammatoire 300 microL de sérum ont été dilués selon des rapports de 1:2. Chargé 50 microL d'échantillons préparés par puits et calibrateurs en double sur la plaque d'essai (Multiplex Human Cytokine Panel 1, Boster Biological Technology, Pleasanton, CA, USA). Chaque puits contenant des anticorps a capturé IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-10 et TNFα. Un mélange qui contient des anticorps spécifiques de l'analyte biotinylé est ajouté après avoir éliminé toute protéine non liée. Les anticorps biotinylés ont complété le sandwich pour chaque analyte en réseau spécifique. Après lavage de l'anticorps biotinylé non lié, la streptavidine peroxydase de raifort (SHRP) est ajoutée. Après un lavage supplémentaire, la quantité de SHRP restant à chaque emplacement du réseau est proportionnelle à la quantité des cytokines initialement capturées ci-dessus. La quantité d'enzyme conjuguée à chaque emplacement du réseau est mesurée avec l'ajout d'un substrat chimioluminescent.

Analyse statistique Les données sont présentées sous forme de moyenne (IC à 95 %) ou de n (%). Les différences des paramètres continus et nominaux et entre les deux groupes ont été estimées respectivement par les tests t de Student et chi carré. Une ANOVA à mesures répétées a été effectuée pour analyser les différences de paramètres continus mesurés aux trois points dans le temps dans chaque groupe. Une corrélation de Pearson a été réalisée pour trouver la relation entre la forme physique et les miARN. Une valeur de p inférieure à 0,05 a été considérée comme une signification statistique.