Valvotun harjoittelun vaikutukset ikääntyneisiin yhteisön asukkaisiin

Suunnittelu Korkea-asteen sairaalan Institutional Review Board hyväksyi tutkimuksen (IRB-nro: 201602058A3C502 ja NCT04839796). Toukokuusta marraskuuhun 2021 suoritettiin satunnaistettu kontrolloitu koe arvioijan ja koehenkilöiden sokkotutkimuksella harjoitteluohjelmien vaikutuksista ikääntyviin ihmisiin. Kaikki koehenkilöt antoivat tietoisen suostumuksen saatuaan kokeelliset menettelyt. Osallistujat jaettiin sitten satunnaisesti 30 minuutin ohjattuun harjoitteluharjoitteluun (SET) kohtalaisen intensiteetin jatkuvalla harjoittelulla (MICT) 24 istunnon ajan sairaala- tai kotiharjoitteluryhmissä (HET) käyttämällä tietokoneella luotua, piilotettua jakoaikataulua. Sokkoutunut arvioija keräsi tiedot ennen satunnaistamista ja harjoittelun suorittamisen jälkeen.

Osallistujat Tutkittiin yhteisössä asuvia henkilöitä, joiden ikä oli > = 55 vuotta ja jotka asuivat paikallisen sairaalan vieressä. Mukaan otettiin iäkkäät aikuiset, joiden mini-mental state -tutkimuksen (MMSE) pistemäärä oli yli 24 ja joilla oli negatiivinen lanneranka sekä alaraajojen rappeuttava nivelsairaus. Ne, joilla oli aiemmissa tutkimuksissamme mainitut epävakaat kliiniset esitykset tai sarkopenia, joka diagnosoitiin Aasian sarkopeniatyöryhmän suosituksen perusteella, eivät olleet tutkimukseen ehdokkaita. Jätimme pois myös henkilöt, joilla on absoluuttisia vasta-aiheita aerobiseen toimintaan, kuten American College of Sports Medicine (ACSM) ehdotti. Lääketieteellisten tulosten tutkimuksen lyhyen lomakkeen 36 (SF-36) fyysisten komponenttien peruspisteet (PCS) ja henkisten komponenttien pistemäärät (MCS) käytettiin elämänlaadun (QoL) arvioimiseen, ja ne arvioitiin uudelleen 24 viikkoa rekrytoinnin jälkeen. Mukana olevien osallistujien demografiset perustiedot ja kliiniset tiedot tallennettiin huolellisesti.

Harjoitus Kaikkia koehenkilöitä opastettiin käyttämään älykelloa (WDI08, WisDat Inc., Taichung, Taiwan) ja ottamaan vähintään 8000 askelta päivässä (stp/d). 8000 stp/d lisäksi SET-osallistujille tehtiin 24 valvottua MICT-istuntoa (70 % ennustetusta maksimaalisesta sykkeestä) 30 minuutin ajan pyöräergometrillä (Ergoselect 150P, ergoline GmbH, Bitz, Saksa) sairaalassamme 8. -viikon ajanjakso. Kaikkia koehenkilöitä muistutettiin ottamaan >=8000 stp/d joka viikko ensimmäisen 8 viikon aikana rekrytoinnin jälkeen puhelimitse ja sovelluksella. MICT:n suorittamisen jälkeen SET-osallistujia kehotettiin ottamaan >=8000 stp/d vielä 16 viikon ajan. HET-osallistujia ohjeistettiin ottamaan 8000 stp/d 24 viikon seurantajakson aikana. Viimeisen 16 viikon aikana ohjetta ottaa >=8000 stp/d ei muistutettu kaikissa koehenkilöissä. Harjoittelu lopetettiin, kun koehenkilöllä oli ACSM-ohjeen mukaisia ​​oireita/merkkejä harjoituksen aikana.20 Fyysisen kunnon mittaaminen Ranteessa pidettävä älykello (WDI08, Wisdat Inc., Taichung, Taiwan) tallensi jokaisen henkilön päivittäisen askelmäärän ja energiankulutuksen sekä keskimääräisen askelmäärän ja energiankulutuksen (Kcal) päivässä vuonna viikko edusti keskimääräisiä päivittäisiä askeleita ja viikon energiankulutusta yhteisössä 24 viikon seurantajakson aikana.

Pohkeen ympärysmitta (Calf_circ) saatiin laskemalla keskiarvo kahdenvälisten jalkojen suurimmasta Calf_circ:stä. Älykäs liikeanalyysi (eFitHealth, uCare Medical Electronics, Co. Ltd., Miaoli, Taiwan), jossa käytetään interaktiivisia ääniä ja 3D-syvyyskuvaoppaita arvioimaan 2 minuutin askelnumeroa, 5-kertaisen istumisesta seisomaan kestoa sekä tuolin istuma- ja istuma-ajoja. - ulottuvuusetäisyys (lisätiedot 1). Kutakin yllä olevasta testistä käytettiin arvioimaan vastaavasti VO2max (eV O2max), alaraajojen lihasvoimaa ja joustavuutta.21 Mitattiin kehon koostumus, mukaan lukien kokonaisvesi (TBW), kivennäisaineosuus, proteiinimäärä (Prot), vähärasvainen ruumiinmassa (LBM), luustolihasmassa (SKM), kehon rasvamassa (BFM) ja perusaineenvaihduntanopeus (BMR). monitaajuisella bioimpedanssianalyysillä (Inbody 720, Inbody Co., Ltd., CA, USA). Yllä olevat mittaukset dokumentoitiin ennen ensimmäistä käyntiä, 8 viikkoa sen jälkeen ja 24 viikkoa ensimmäisen käynnin jälkeen.

RNA-uutto Verinäyte 10 ml kokoverta jokaiselta koehenkilöltä rekrytoinnin yhteydessä, 8 viikon ja 24 viikon kuluttua ensimmäisestä käynnistä, laitettiin putkeen, joka sisälsi 3,2 % natriumsitraattia. Näytteitä sentrifugoitiin sitten nopeudella 360 x g 15 minuuttia, ja supernatanttia sentrifugoitiin edelleen 2400 x g:llä 20 minuuttia huoneenlämpötilassa 25 ℃ plasman verihiutaleiden määrän pitämiseksi alle 2,5 x 10 ^ 8/ml. 400 mikrolitraa käsiteltyä plasmaa laitettiin 2 ml:n eppendorfiin (Eppendorf corp. Hampuri, Saksa) sekoitetaan 1200 mikrolitraan TRIzolia (ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) ja 5 mikrolitraan miR-39:ää (5x10^-15 mol/mikroL), eksogeenistä kontrollia, C. elegansia sekä 2 mikrogrammaa (10 mikrog/ml plasmassa) hiivan RNA:ta (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 15 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Toinen 320 mikrolitra kloroformia lisättiin ja asetettiin huoneenlämpötilaan 5 minuutiksi. Näyte sentrifugoitiin 12 000 x g 15 minuuttia 4 ℃:ssa ja 300 mikrolitraa väritöntä nestekerrosta imettiin sekoittumaan 900 mikrolitraan jääkylmää 100 % etanolia yön yli -80 ℃:ssa. Valmistettu näyte laitettiin Direct-zol-kolonniin (Direct-zol RNA Miniprep, Zymo Research corp., Irvine, CA, USA) ja sentrifugoitiin sitten 12 000 xg:ssä 30 sekuntia. Pylväs siirrettiin sitten uuteen keräysputkeen ja sentrifugoitiin 12 000 xg:llä 30 sekuntia sen jälkeen, kun oli sekoitettu 400 mikrolitralla RNA-pesupuskuria. 80 mikrolitran DNaasi I -reaktioseos (DNaasi I -entsyymi 5 mikrolitraa + DNA-pilkotuspuskuri 75 mikrolitraa) lisättiin putkeen sen jälkeen, kun RNA-pesupuskuri oli poistettu, ja inkuboitiin huoneenlämpötilassa 15 minuuttia. Lisää 400 mikrolitraa esipesupuskuria lisättiin putkeen ja sentrifugoitiin 12 000 xg:llä 30 sekuntia. Pylväs siirrettiin sitten uuteen 1,5 ml:n RNaasi-vapaaseen putkeen ja käsiteltiin 80 mikrolitralla nukleaasivapaata vettä huoneenlämpötilassa 2 minuutin ajan. Valmistettua näytettä sentrifugoitiin 12 000 x g:ssä 2 minuuttia RNA-liuoksen eluoimiseksi.

Plasman mikroRNA-tasojen miR-21-, miR-126-, miR-146a- ja miR-222-tasojen kvantifiointi kolmella edellä mainitulla eri hetkellä analysoitiin. Yksivaiheinen reaaliaikainen kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio (RT-qPCR) suoritettiin käyttämällä RT-qPCR-järjestelmää (T100TM Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories Inc., Berkeley, CA, USA) plasman mikroRNA-tasojen arvioimiseksi. Seos, jossa on 100 ng RNA:n kokonaisuuttoa, 10 mikrolitraa TaqMan master -sekoitusta (ThermoFisher), 5,8 mikrolitraa nukleaasivapaata vettä, 0,2 mikrolitraa yleistä koetinkirjastoa 21 (10 mikroM), 0,1 mikrolitraa RNaasi-inhibiittoria, itse rakennettuja 1 mikrolitraa eteenpäin suunnattuja alukkeita ja 1 mikrolitraa. microL käänteisalukkeet miR-39:lle, miR-126:lle ja miR-146a:lle ja 2 mikrolitran cDNA-templaatti luotiin jäälle. Kaikkia reaktioita inkuboitiin 48-kuoppaisella levyllä 95 °C:ssa 3 minuuttia, minkä jälkeen seurasi 40 sykliä 95 °C:ssa 5 sekuntia, 60 °C:ssa 10 sekuntia ja 72 °C:ssa 1 sekunti. Itse konstruoidut eteenpäin ja käänteiset alukesekvenssit primaariselle C. elegans miR-39:lle (C-miR-39) eksogeenisenä kontrollina. Ihmisen miR-126 (miR-126) ja miR-146a (miR-146a) (lisätaulukko 1) normalisoitiin eksogeenisellä kontrollilla ja niitä käytettiin mikroRNA-tasojen ilmentymien määrittämiseen seurannan aikana.

miRCURY LNA SYBR Green PCR -pakkausta (Qiagen) käytettiin ihmisen miR-21:n (miR-21) ja miR-222:n (miR-222) määrittämiseen. Seosta, jossa oli 4 mikrolitraa 5X miRCURY RT SYBR vihreää reaktiopuskuria, 2 mikrolitraa 10X miRCURY RT Wnzyme Mixiä ja 14 mikrolitraa 100 ng:n kokonais-RNA-uutosta nukleaasivapaassa vedessä, inkuboitiin 48-kuoppaisella levyllä 42 °C:ssa 60 minuuttia ja sen jälkeen 95 °C cDNA:n muodostamiseksi. Seosta, joka sisälsi 2 mikrolitraa Qiagenilta ostettua C-miR-39- (tai miR-21/ tai miR-222) aluketta, 10 mikrolitraa miRCURY SYBR Green Master Mixiä, 2 mikrolitraa nukleaasivapaata vettä ja 6 mikrolitraa 5X tuotettua cDNA-templaattia, inkuboitiin klo. 95 °C 2 minuutin ajan, jota seuraa 40 sykliä 95 °C 10 sekuntia ja 56 °C 60 sekuntia. has-miR-21 ja hsa-miR-222 normalisoitiin C-miR-39:llä, ja niitä käytettiin mikroRNA-tasojen ilmentymien määrittämiseen seurannan aikana.

Tulehdusaktiivisuuden määrittäminen 300 mikrolitraa seerumia laimennettiin suhteessa 1:2. Ladattiin 50 mikrolitraa valmistettuja näytteitä kuoppaa kohti ja kalibraattoreita kahtena kappaleena määrityslevylle (Multiplex Human Cytokine Panel 1, Boster Biological Technology, Pleasanton, CA, USA). Jokainen kuoppa, joka sisälsi vasta-aineita, vangitsi IL-1a:n, IL-1p:n, IL-6:n, IL-10:n ja TNFa:n. Seos, joka sisältää biotinyloituja analyyttispesifisiä vasta-aineita, lisätään sen jälkeen, kun kaikki sitoutumaton proteiini on pesty pois. Biotinyloidut vasta-aineet täydensivät kerrosta jokaiselle spesifiselle järjestetylle analyytille. Sitoutumattoman biotinyloidun vasta-aineen pesemisen jälkeen lisätään streptavidiinipiparjuuriperoksidaasi (SHRP). Lisäpesun jälkeen SHRP:n määrä, joka jää jokaiseen ryhmän sijaintiin, on verrannollinen edellä mainittujen alun perin siepattujen sytokiinien määrään. Konjugoidun entsyymin määrä ryhmän kussakin kohdassa mitataan lisäämällä kemiluminesoivaa substraattia.

Tilastollinen analyysi Tiedot esitetään keskiarvona (95 % CI) tai n (%). Jatkuvien ja nimellisten parametrien erot ja erot näiden kahden ryhmän välillä arvioitiin Student-t- ja chi-neliötesteillä, vastaavasti. Toistuva mittaus-ANOVA suoritettiin jatkuvien parametrien erojen analysoimiseksi kolmena ajankohtana kussakin ryhmässä. Pearson-korrelaatio suoritettiin fyysisen kunnon ja miRNA:iden välisen suhteen löytämiseksi. P-arvoa alle 0,05 pidettiin tilastollisena merkitsevyytenä.