이는 6개월 간의 관찰 연구입니다. 포함되는 환자는 천식의 가능한 진단 또는 확립된 진단으로 의뢰된 환자입니다. 천식 미생물군집과 질병 특성, 중증도 및 치료 반응의 연관성을 살펴볼 것입니다.

1차(0월) 대면 방문

• 동의하면 연구 ID가 할당되고 기본 인구통계 정보가 수집됩니다.
• 표적 증상 이력, 악화 빈도 및 병원 입원을 포함하기 위해 표준화된 병력이 사용됩니다.
• 이전의 모든 천식 치료에 대한 검토와 마찬가지로 자세한 동반병력을 수집합니다. 검증된 증상 설문지는 연구 방문 중에 작성됩니다.
• 모든 참가자에게는 전자 PEFR 모니터가 제공됩니다.
• 흡입 요법을 진행 중이거나 예정된 환자에게는 전자 준수 모니터가 제공됩니다.
• 기관지 확장제 가역성과 함께 폐활량 측정, 임펄스 진동 측정, 호기 산화질소 분획을 포함한 폐 기능 테스트가 수행됩니다.
• 샘플 수집에는 혈액, 구강 세정액, 비인두 면봉 채취물, 호기 응축물, 대변 및 유도된 객담이 포함됩니다.
• 환자의 하위 집합은 하부 기도 샘플링을 위한 기관지경 검사에 동의합니다.

2,3,4차(1,2,3월) 대면 방문

• 모든 치료 변경 사항을 검토하면서 증상에 대한 자세한 병력을 검토하게 됩니다.
• 검증된 증상 설문지는 연구 방문 중에 작성됩니다.
• 지난달의 PEFR 및 준수 장치 데이터가 수집되고 필요한 경우 새 모니터와 장치가 제공됩니다.
• 위와 같은 방법으로 폐기능검사를 실시합니다.
• 검체 채취에는 위와 같이 혈액, 구강 세정액, 비인두 면봉 채취, EBC, 대변 및 유도 객담이 포함됩니다.

5차 방문(6개월) 대면

• 모든 치료 변경 사항을 검토하면서 증상에 대한 자세한 병력을 검토하게 됩니다. - 연구 방문 중에 검증된 증상 설문지가 작성됩니다.
• 지난달의 PEFR 및 준수 장치 데이터가 수집되고 필요한 경우 새 모니터와 장치가 제공됩니다.
• 위와 같은 방법으로 폐기능검사를 실시합니다.
• 샘플 수집에는 혈액, 구강 세정액, 비인두 면봉 채취, EBC, 대변 및 유도 객담이 포함됩니다.
• VISIT 1에서 기관지경 검사를 받은 환자의 일부는 해당 샘플 수집을 위해 다시 기관지경 검사를 받게 됩니다.

절차:

설문지:

이전에 표시된 연구 방문 중에 검증된 증상 설문지가 작성됩니다. 천식 조절 테스트는 천식 조절의 적절성과 자발적으로 또는 치료에 대한 반응으로 발생할 수 있는 천식 조절의 변화를 측정합니다. GERD-Q와 SNOT-22는 일반적인 천식 동반 질환인 위식도 역류 질환과 부비동 질환의 존재와 중증도를 확립하며, 이는 삶의 질, 증상 조절 및 치료 반응에 영향을 미칠 수 있습니다.

조사:

폐 기능 테스트에는 폐활량 측정, 임펄스 진동 측정(IOS), 최대 호기 유량(PEFR) 측정이 포함됩니다. 천식 진료소에서 일상적으로 측정되는 확립된 바이오마커인 호기 산화질소(FeNO)의 비율도 측정됩니다.

생체 시료:

멸균 식염수, 비인두 면봉, 구강 린스/객담 용기 및 기관지경을 포함한 환경 오염을 검사하기 위해 샘플링 및 보관 장비에서 배경 샘플을 채취합니다.

혈액 검사는 정맥 절개술과 단일 바늘 통과를 통해 이루어집니다. 채혈된 총 혈액량은 연구 목적으로 소아 환자에게 사용되는 최소 허용량입니다. 최대 총 샘플량은 50ml/10 티스푼입니다.

인간 미생물군집 프로젝트 절차 매뉴얼에 따라 표준화된 절차를 사용하여 경구 샘플을 수집합니다. 연구 참가자는 15mL의 멸균 생리식염수로 1분 동안 입을 헹구고(가글/가글) 입의 내용물을 50mL 원심분리 튜브에 뱉어냅니다. 샘플은 처리될 때까지 얼음 위에 차갑게 보관해야 합니다.

비인두 면봉을 각 콧구멍에 몇 초 동안 삽입하여 채취합니다.

유도된 객담은 필요한 경우 고장성 식염수를 사용하여 선택된 환자에서 수집됩니다.

EBC는 정상적인 호흡 중에 성인의 분당 200 마이크로리터를 오염 없이 수집할 수 있는 단방향 호흡 밸브인 RTube를 사용하여 수집됩니다.

대변은 밀봉 가능한 용기에 수집되어 추가 처리를 위해 영하 80도에 보관됩니다.

기관지경 검사는 국소 마취와 함께 적당한 진정 상태에서 시행됩니다. 작은 카메라가 성대를 통과하여 상부 기도와 하부 기도로 전달됩니다. 기관지 폐포 세척액(BAL)의 경우 총 60ml의 생리식염수를 폐엽에 주입하고 분석을 위해 회수액을 수집합니다. 내피 브러싱(EB)은 기관지경을 통해 작은 브러시를 도입하여 기도 벽을 부드럽게 브러싱하여 형태학적 및 기능적 연구를 위한 분석을 위한 상피 세포를 수집하는 것을 포함합니다.

샘플 처리:

샘플은 RCSI에서 처리 및 저장됩니다. 모두 수집되면 사용 가능한 샘플은 미생물군유전체 및 숙주 전사체 프로파일링을 위해 처리되기 위해 뉴욕 대학 병원(협력자 Leopoldo Segal 박사용)으로 전송됩니다.

혈액 샘플은 전체 혈구 수, 면역글로불린 E 및 공기알레르겐 민감성을 검사하기 위해 처리됩니다. 또한 혈액은 숙주 면역 프로파일링을 위해 처리됩니다.

백그라운드 컨트롤, 경구 린스, 비인두 면봉 채취, EBC, 유도된 가래 및 대변 샘플은 미생물군집에 대해 처리됩니다. EBC와 유도된 가래도 숙주 면역 프로파일링을 위해 처리됩니다.

기관지경 검사 코호트에서 수집된 모든 샘플은 미생물군유전체 분석을 거칩니다. 또한 BAL 샘플에 대한 숙주 면역 프로파일링을 수행할 것입니다. 기관지 브러쉬는 숙주 전사체 분석을 위해 처리됩니다.

• 숙주 면역 프로파일링: 샘플의 사이토카인 분석은 Luminex multiplex를 통해 수행됩니다.
• 16S rRNA 유전자 시퀀싱(미생물군유전체): 핵산 추출, 16S rRNA 유전자 증폭, 정제가 수행되며 시퀀싱은 MiSeq 플랫폼(Illumina)에서 수행됩니다. 이 데이터는 QIIME(Quantitative Insights Into Microbial Ecology)을 통해 분석됩니다.
• 대량 RNAseq(숙주 트랜스시프톰): Hi-seq/Illumina 플랫폼을 사용하여 기관지 브러싱(EB)으로 얻은 기관지 상피 세포에 대해 RNAseq를 수행합니다. 서열은 hg19 앙상블 참조 게놈에 대해 정렬되고, 후속 유전자 계산은 featureCounts를 사용하여 수행되며 차등 유전자 발현은 조정된 p값이 0.05 미만인 DESeq2 패키지를 사용하여 계산됩니다. 독창성 경로 분석(IPA)은 최고의 생물학적 기능을 식별하는 데 사용됩니다. 유전자는 Ensembl ID에 매핑되고 이어서 KEGG 경로에 매핑됩니다. 또한 CIBERSORT와 같은 면역학적 프로파일링을 확립하기 위해 고안된 분석적 접근 방식을 사용할 것입니다.