Este es un estudio observacional de 6 meses. Los pacientes incluidos serán aquellos remitidos con un posible diagnóstico o un diagnóstico establecido de asma. Analizará la asociación entre el microbioma del asma y las características de la enfermedad, la gravedad y la respuesta al tratamiento.

VISITA 1 (Mes 0) PRESENCIAL

• Una vez autorizado, se le asignará una identificación del estudio y se tomará información demográfica básica.
• Se tomará un historial médico estandarizado que incluya el historial de síntomas objetivo, la frecuencia de exacerbaciones y las admisiones hospitalarias.
• Se tomará un historial detallado de comorbilidades, así como una revisión de todos los tratamientos previos para el asma. Se completarán cuestionarios de síntomas validados durante las visitas del estudio.
• Todos los participantes recibirán un monitor PEFR electrónico.
• Los pacientes que reciben o planean recibir terapia inhalada recibirán un monitor de cumplimiento electrónico.
• Se realizarán pruebas de función pulmonar que incluyen espirometría, oscilometría de impulso, fracción de óxido nítrico exhalado junto con la reversibilidad del broncodilatador.
• La recolección de muestras incluirá sangre, enjuague bucal, hisopo nasofaríngeo, condensado del aliento exhalado, heces y esputo inducido.
• Un subconjunto de pacientes recibirá su consentimiento para la broncoscopia para muestreo de las vías respiratorias inferiores.

VISITA 2,3, 4 (Mes 1,2, 3) CARA A CARA

• Se tomará un historial detallado de los síntomas y una revisión de todos los cambios en el tratamiento.
• Se completarán cuestionarios de síntomas validados durante las visitas del estudio.
• Se recopilarán los datos del PEFR y de los dispositivos de cumplimiento del mes anterior y se proporcionarán nuevos monitores y dispositivos cuando sea necesario.
• Las pruebas de función pulmonar se realizarán como se indicó anteriormente.
• La recolección de muestras incluirá sangre, enjuague bucal, hisopo nasofaríngeo, EBC, heces y esputo inducido como se indicó anteriormente.

VISITA 5 (Mes 6) PRESENCIAL

• Se tomará un historial detallado de los síntomas y una revisión de todos los cambios en el tratamiento. - Se completarán cuestionarios de síntomas validados durante las visitas del estudio.
• Se recopilarán los datos del PEFR y de los dispositivos de cumplimiento del mes anterior y se proporcionarán nuevos monitores y dispositivos cuando sea necesario.
• Las pruebas de función pulmonar se realizarán como se indicó anteriormente.
• La recolección de muestras incluirá sangre, enjuague bucal, hisopo nasofaríngeo, EBC, heces y esputo inducido.
• A un subconjunto de pacientes a los que se les realizó una broncoscopia en la VISITA 1 se les realizará nuevamente una broncoscopia para la recolección de muestras correspondiente.

PROCEDIMIENTOS:

Cuestionarios:

Los cuestionarios de síntomas validados se completarán durante las visitas de estudio indicadas anteriormente. La prueba de control del asma mide la idoneidad del control del asma y el cambio en el control del asma que puede ocurrir espontáneamente o en respuesta al tratamiento. El GERD-Q y el SNOT-22 establecen la presencia y gravedad de la enfermedad por reflujo gastroesofágico y la enfermedad de los senos nasales comorbilidades, ambas comorbilidades comunes del asma, que pueden afectar la calidad de vida, el control de los síntomas y la respuesta al tratamiento.

Investigaciones:

Las pruebas de función pulmonar incluirán espirometría, oscilometría de impulso (IOS) y medición del índice de flujo espiratorio máximo (PEFR). También se medirá la fracción de óxido nítrico exhalado (FeNO), un biomarcador establecido que se mide de forma rutinaria en las clínicas de asma.

Biomuestras:

Se tomarán muestras de fondo del equipo de muestreo y almacenamiento para examinar la contaminación ambiental, incluida solución salina estéril, hisopo nasofaríngeo, enjuague bucal/recipiente para esputo y el broncoscopio.

Los análisis de sangre se extraerán mediante flebotomía y una sola pasada con aguja. La cantidad total de volumen de sangre extraída será el volumen mínimo aceptable utilizado en pacientes pediátricos con fines de investigación. El volumen total máximo de muestra es de 50 ml/10 cucharaditas.

Las muestras orales se recolectarán mediante un procedimiento estandarizado de acuerdo con el Manual de Procedimientos del Proyecto Microbioma Humano. Los participantes del estudio se enjuagarán la boca (harán buches o harán gárgaras) con 15 ml de solución salina normal estéril durante 1 minuto y expectorarán el contenido de la boca en un tubo de centrífuga de 50 ml. La muestra debe mantenerse fría en hielo hasta su procesamiento.

Se recogerá un hisopo nasofaríngeo insertado en cada fosa nasal durante varios segundos.

El esputo inducido se recolectará en pacientes seleccionados utilizando solución salina hipertónica cuando sea necesario.

EBC se recolectará utilizando RTube, una válvula de respiración unidireccional que permite la recolección libre de contaminantes de 200 microlitros por minuto en adultos durante la respiración normal.

Las heces se recogerán en un recipiente sellable y se almacenarán a -80ºC para su posterior procesamiento.

La broncoscopia se realizará bajo sedación moderada con anestesia tópica. Se pasa una pequeña cámara a través de las cuerdas vocales hasta las vías respiratorias superiores y luego inferiores. Para un lavado broncoalveolar (BAL), se instilará un total de 60 ml de solución salina normal en un lóbulo pulmonar y se recogerá el retorno para su análisis. Un cepillado endotelial (CE) implica la introducción de un pequeño cepillo a través del broncoscopio para cepillar suavemente las paredes de las vías respiratorias y recolectar células epiteliales para su análisis y estudios morfológicos y funcionales.

PROCESAMIENTO DE MUESTRA:

Las muestras se procesarán y almacenarán en RCSI. Una vez recolectadas todas, las muestras disponibles se transferirán a los hospitales de la Universidad de Nueva York (para nuestro colaborador, el Dr. Leopoldo Segal), para ser procesadas para el perfil del microbioma y del transcriptoma del huésped.

Se procesarán muestras de sangre para hemograma completo, inmunoglobulina E y sensibilidad a aeroalérgenos. Además, la sangre se procesará para determinar el perfil inmunológico del huésped.

Se procesarán muestras de control de fondo, enjuague bucal, hisopo nasofaríngeo, EBC, esputo inducido y heces para microbioma. El EBC y el esputo inducido también se procesarán para el perfil inmunológico del huésped.

De la cohorte de broncoscopia, todas las muestras recolectadas se someterán a un análisis de microbioma. También realizaremos perfiles inmunológicos del huésped en muestras de BAL. Se procesarán cepillos endobronquiales para el análisis del transcriptoma del huésped.

• Perfil inmunológico del huésped: el análisis de citocinas de las muestras se realizará mediante Luminex multiplex
• Secuenciación del gen 16S rRNA (microbioma): se realizará extracción de ácido nucleico, amplificación y purificación del gen 16S rRNA y la secuenciación se realizará en una plataforma MiSeq (Illumina). Estos datos se analizarán con Quantitative Insights Into Microbial Ecology (QIIME).
• RNAseq a granel (transciptoma del huésped): RNAseq se realizará en células epiteliales bronquiales obtenidas mediante cepillado bronquial (EB), utilizando la plataforma Hi-seq /Illumina. Las secuencias se alinearán con el genoma de referencia del conjunto hg19, el recuento de genes posterior se realizará utilizando featureCounts y la expresión genética diferencial se calculará utilizando el paquete DESeq2 con un valor p ajustado <0,05. Se utilizará el análisis de la vía del ingenio (IPA) para identificar las principales funciones biológicas. Los genes se asignarán a los ID de Ensembl y, posteriormente, a las vías KEGG. También utilizaremos enfoques analíticos diseñados para establecer un perfil inmunológico como CIBERSORT.