Terapia skojarzona Używająca Cellcept i Rebif w RRMS

Przebadanych zostanie łącznie 30 pacjentów, po piętnastu w każdym ramieniu. Nie można było przeprowadzić analizy proporcjonalnej w celu oszacowania wielkości próby, ponieważ odsetek pacjentów MxA-dodatnich po 1 roku w ramieniu leczenia produktem Rebif® jest nieznany. Niemniej jednak wielkość próby 15 pacjentów na ramię pozwoli na wykrycie odpowiedniej różnicy między leczonymi grupami, jak opisano poniżej:

Dla celów tego badania osoba niebędąca producentem MxA zostanie oznaczona jako „niepowodzenie leczenia” niezależnie od stanu klinicznego. Definicja osoby nieprodukującej MxA to pacjent, który produkuje przez 1 rok leczenia; Transkrypty MxA na poziomie SD 2 poniżej jego średniej wartości wyjściowej przy wejściu. Odpowiednio, pacjenci zostaną porównani z ich własną początkową odpowiedzią na Rebif® na początku badania. W poniższych przykładach do porównań wykorzystany zostanie odsetek nieproducentów MxA w każdej grupie.

Pod koniec 1 roku częstość występowania przeciwciał neutralizujących u pacjentów otrzymujących Rebif® 44 mikrogramy podskórnie raz na dobę wynosi około 20%. Do celów obliczenia wielkości próby wybrano odsetek 40% (0,4) dla pacjentów nie produkujących MxA w ramieniu Rebif®, ponieważ odsetek pacjentów, którzy nie produkują MxA po 1 roku, jest wyższy niż odsetek, który wykazuje przeciwciała neutralizujące. Innymi słowy, mechanizmy inne niż przeciwciała neutralizujące są podstawą braku odpowiedzi na interferon u większości pacjentów, ważnego zjawiska, które jest tracone do wykrycia, jeśli skupia się wyłącznie na przeciwciałach neutralizujących. Zakładając, że kombinacja będzie skuteczna w utrzymaniu aktywności biologicznej interferonu przez 1 rok u większości lub wszystkich pacjentów, można zidentyfikować następujące scenariusze.

Pacjenci zostaną losowo przydzieleni do grupy otrzymującej produkt Rebif z preparatem CellCept lub bez niego. Proces randomizacji będzie wykorzystywał program komputerowy zaprojektowany specjalnie do randomizacji pacjentów. Pacjenci będą mieli równe szanse losowego przydzielenia do grupy otrzymującej Rebif z terapią CellCept lub bez niej.

Każdy uczestnik musi spełniać następujące kryteria kwalifikacyjne (tj. wszystkie kryteria włączenia, a nie kryteria wykluczenia) przed włączeniem do badania:

Kryteria przyjęcia

• Mężczyźni i kobiety kwalifikujący się klinicznie do terapii interferonem, w tym rozpoznanie nawracającego stwardnienia rozsianego (zgodnie z kryteriami MacDonalda, poprawionymi w 2005 r.) lub pacjenci z rozpoznaniem klinicznie izolowanego zespołu.
• Pacjenci muszą być w wieku od 18 do 65 lat włącznie
• Uczestnicy muszą mieć odpowiednie funkcje poznawcze, aby zrozumieć i podpisać zgodę zatwierdzoną przez IRB przed wykonaniem jakichkolwiek procedur specyficznych dla badania.

Kryteria wyłączenia

• Kobiety w ciąży lub karmiące piersią oraz kobiety w wieku rozrodczym (tj. niesterylne chirurgicznie lub co najmniej dwa lata po menopauzie), które pozostają w aktywnych stosunkach heteroseksualnych i nie przeszły histerektomii ani obustronnego wycięcia jajników oraz nie stosują jednej z następujących metod kontroli urodzeń: podwiązanie jajowodów, wszczepiana wkładka antykoncepcyjna, doustna, plastry lub iniekcyjne środki antykoncepcyjne, metoda barierowa lub aktywność seksualna ograniczona do partnera po wazektomii zostaną wykluczone z tego badania ze względu na potencjalne ryzyko dla nienarodzonego płodu i/lub karmionego niemowlęcia.
• Tester ma klinicznie istotne nieprawidłowe wartości laboratoryjne. Nieprawidłową wartość definiuje się jako wartość laboratoryjną CTCAE w wersji 3.0, stopień 2 lub gorszą, uznaną przez głównego badacza za istotną klinicznie.
• Pacjent otrzymał kortykosteroidy w ciągu 30 dni przed wizytą przesiewową.
• Podmiot otrzymał cyklofosfamid lub mitoksantron.
• Pacjent otrzymywał Imuran lub metotreksat w ciągu ostatnich 3 miesięcy.
• Uczestnik ma jakąkolwiek chorobę lub historię choroby, która mogłaby zakłócić interpretację wyników badania lub prowadzenie badania zgodnie z ustaleniami badacza. Może to obejmować inne choroby autoimmunologiczne, nowotwory w wywiadzie, niekontrolowane nadciśnienie tętnicze, zespoły mielodysplastyczne i wszelkie inne niekontrolowane choroby serca, wątroby, nerek lub płuc w wywiadzie, które badacz uzna za istotne klinicznie.
• Uczestnik uczestniczy lub brał udział w innym badaniu klinicznym lub otrzymał inną eksperymentalną terapię w ciągu ostatnich 90 dni.

Podstawowe miary skuteczności:

• Analiza odsetka pacjentów, którzy są producentami MxA, w grupie otrzymującej Rebif® z CellCept®, w porównaniu do odsetka pacjentów przyjmujących sam Rebif®, którzy są producentami MxA.
• Porównanie średnich poziomów MxA w grupie Rebif® z CellCept® do samego Rebif®.

Hipoteza zerowa jest taka, że ​​nie będzie żadnej różnicy między dwiema grupami leczenia pod względem poziomów mRNA dla MxA. Alternatywna hipoteza jest taka, że ​​grupa leczona będzie miała utrzymujący się wysoki poziom mRNA w porównaniu z grupą leczoną wyłącznie Rebif®.

Wtórne miary skuteczności

• Stan kliniczny, w tym liczba i nasilenie zaostrzeń klinicznych, nasilenie zaostrzeń, czas do pierwszego i drugiego zaostrzenia, niepełnosprawność mierzona za pomocą rozszerzonej skali stanu niepełnosprawności (EDSS) i złożonej funkcji stwardnienia rozsianego (ang. Multiple Sclerosis Functional Composite, MSFC) oraz stosowanie kortykosteroidów podczas badania trwającego 1 rok .
• Tolerancja na interferon i kliniczne obciążenie chorobą, jak zmierzono za pomocą Indeksu Jakości Życia w Stwardnieniu Rozsianym (MSQLI).
• Przełomowa choroba wykryta przez wzmocnienie zmian gadolinem w MRI na zakończenie badania.
• Całkowite obciążenie chorobą T2 FLAIR w ramieniu leczenia skojarzonego w porównaniu z samym Rebif® na zakończenie badania.

Pomiar MxA

Poziomy MxA u pacjentów zostaną określone przez pomiar względnych ilości mRNA MxA w jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej (PBMC) wyizolowanych z ich krwi. Krew zostanie pobrana do probówek z heparyną bez środków konserwujących, a PBMC zostaną wyizolowane przez wirowanie w gradiencie Ficoll-Histopaque. PBMC zostaną zebrane, przemyte i ustalona zostanie całkowita liczba komórek. Z tych komórek zostanie wyizolowany całkowity RNA. RNA zostanie następnie przekształcone w cDNA w reakcji odwrotnej transkrypcji.

Przeprowadzona zostanie reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) w czasie rzeczywistym w celu ustalenia poziomów aktywacji genu MxA. Podobnie jak w standardowym PCR, startery oligonukleotydowe i cykle temperaturowe są używane do amplifikacji docelowej sekwencji z matrycowego DNA. W przypadku PCR w czasie rzeczywistym do mieszanki dodaje się „sondę” oligonukleotydową. Ta sonda ma wysokoenergetyczny barwnik „reporterowy” na końcu 5' i niskoenergetyczny barwnik „wygaszający” na końcu 3'. Sonda jest zaprojektowana do przyłączania się do określonej części docelowej sekwencji DNA. Gdy sonda jest nienaruszona, bliskość barwnika wygaszającego do barwnika reporterowego tłumi jej naturalną fluorescencję. Gdy polimeraza DNA tworzy kopie matrycowych cząsteczek DNA w mieszaninie, dołączona sonda jest rozszczepiana, a odległość między barwnikami reporterowymi i wygaszającymi zwiększa się, powodując również wzrost emisji fluorescencji przez reporter. Fluorescencja jest mierzona podczas cykli temperaturowych reakcji PCR. Obliczenia są wykonywane na podstawie wykrytej fluorescencji w celu określenia ilości początkowego matrycowego DNA, który był obecny w próbce. Ponieważ niemożliwe jest określenie dokładnej liczby cząsteczek mRNA MxA, od których zaczynała się każda próbka, przeprowadza się PCR w czasie rzeczywistym w celu wykrycia poziomów GAPDH, standardowego genu metabolizmu podstawowego, w każdej próbce, aby można było dokonać porównania między GAPDH i MxA , a względne ilości można określić między różnymi próbkami.

Pomiar T2 FLAIR Całkowite obciążenie T2 FLAIR jest mierzone przez półautomatyczny program komputerowy używany na oddziale radiologii. Oprogramowanie nakreśli wszystkie zmiany w zeskanowanym obszarze. Po sporządzeniu mapy MRI zostaną przejrzane przez dr Erica Bourekasa w celu pomiaru i ilościowego określenia całkowitego obciążenia chorobą.

Szczegółowe procedury badania

Harmonogram leczenia Kwalifikujący się pacjenci zostaną losowo przydzieleni do leczenia z mykofenolanem mofetylu lub bez mykofenolanu mofetylu w dawce 2000 mg dziennie przez 6 miesięcy. Po 4 tygodniach terapii obie grupy otrzymają Rebif® w standardowej dawce 44 mikrogramów SC TIW, po standardowym schemacie miareczkowania dawki. Pacjenci będą oceniani co 3 miesiące przez rok. Całkowity czas badania pacjenta wyniesie jeden rok.

Randomizacja nastąpi podczas wizyty w dniu 0 i będzie wykorzystywać program komputerowy stworzony specjalnie do tego celu. Pacjenci będą mieli 50% szans na otrzymanie CellCept.

Koniec nauki

Jeśli u pacjenta rozwinie się jakikolwiek stan chorobowy, który w opinii badacza może sprawić, że kontynuacja badania będzie dla niego niebezpieczna, pacjent zostanie usunięty z badania i poddany dalszej obserwacji ze względów bezpieczeństwa i rozwiązania każdego zdarzenia. Usunięcie pacjenta z badania będzie oceniane indywidualnie dla każdego przypadku według uznania badacza i zostanie przeprowadzone w celu zapewnienia bezpieczeństwa pacjentów.

Jeśli u pacjenta wystąpią więcej niż 2 zaostrzenia wymagające leczenia kortykosteroidami (od umiarkowanego do ciężkiego) w dowolnym okresie 12 miesięcy lub jeśli pacjent ma potwierdzoną progresję w rozszerzonej skali niepełnosprawności (EDSS) > 2 punkty z zaostrzeniami lub bez zaostrzeń, zostanie to uznane za niepowodzenie leczenia dla odpowiedniej grupy leczenia i zostałby usunięty z badania w celu zastosowania innych opcji leczenia.