Analiza DNA próbek tkanek guza od pacjentów z rakiem jamy ustnej i gardła związanym z wirusem brodawczaka ludzkiego

CELE:

• Analiza ekspresji i mutacji PIK3CA oraz amplifikacji i ekspresji p110α w próbkach tkanki guza od pacjentów z rakiem płaskonabłonkowym (SCC) jamy ustnej i gardła z dodatnim wynikiem wirusa brodawczaka ludzkiego (HPV+) i ujemnym wynikiem wirusa brodawczaka ludzkiego (HPV-).
• Określenie proliferacji i przeżycia po zahamowaniu PI3K w liniach komórkowych SCC jamy ustnej i gardła HPV(+) i HPV(-) oraz w komórkach wykazujących ekspresję E6 i E7 HPV.
• Określenie proliferacji i przeżycia po zahamowaniu PI3K w krótkoterminowych hodowlach próbek tkanek nowotworowych od pacjentów z pierwotnym SCC jamy ustnej i gardła HPV(+) i HPV(-).

ZARYS: Wcześniej pobrane próbki tkanek nowotworowych są analizowane pod kątem DNA HPV poprzez amplifikację PCR i bezpośrednie sekwencjonowanie produktów PCR; ekspresja białka E6 i względna ekspresja PIK3CA metodą qRT-PCR; amplifikacja PIK3CA metodą Southern blotting; mutacja PIK3CA; ekspresja p110α, fosfo-AKT, całkowitego AKT i FOXO1 przez elektroforezę w żelu poliakryloamidowym (PAGE) i immunoblotting; oraz wpływ hamowania PI3K na cykl komórkowy i apoptozę za pomocą cytometrii przepływowej. Badania farmakologiczne przeprowadzono na liniach komórkowych raka płaskonabłonkowego jamy ustnej i gardła oraz krótkoterminowych hodowlach i komórkach wykazujących ekspresję E6 i E7 HPV przy użyciu LY 294002 in vitro w celu analizy odpowiedzi na hamowanie PI3K. Wyniki odpowiedzi na hamowanie PI3K będą skorelowane ze statusem HPV, ekspresją, amplifikacją i mutacją PIK3CA oraz ekspresją p110α.

PRZEWIDYWANA LICZBA: Do tego badania zostanie zebranych łącznie 20 próbek tkanki nowotworowej HPV(+) i 20 HPV(-) od pacjentów.