DNA-Analyse von Tumorgewebeproben von Patienten mit humanem Papillomavirus-assoziiertem Krebs des Oropharynx

ZIELE:

• Analysieren Sie die PIK3CA-Expression und -Mutation sowie die p110α-Amplifikation und -Expression in Tumorgewebeproben von Patienten mit humanem Papillomavirus-positivem (HPV+) und humanem Papillomavirus-negativem (HPV-) Plattenepithelkarzinom (SCC) des Oropharynx.
• Bestimmen Sie die Proliferation und das Überleben nach PI3K-Hemmung in HPV(+)- und HPV(-)-Oropharynx-SCC-Zelllinien und in HPV E6- und E7-exprimierenden Zellen.
• Bestimmen Sie die Proliferation und das Überleben nach PI3K-Hemmung in Kurzzeitkulturen von Tumorgewebeproben von Patienten mit primärem HPV(+)- und HPV(-)-SCC des Oropharynx.

ÜBERBLICK: Zuvor gesammelte Tumorgewebeproben werden durch PCR-Amplifikation und direkte Sequenzierung von PCR-Produkten auf HPV-DNA analysiert; Expression von E6-Protein und relative Expression von PIK3CA durch qRT-PCR; Amplifikation von PIK3CA durch Southern-Blotting; Mutation von PIK3CA; Expression von p110α, Phospho-AKT, Gesamt-AKT und FOXO1 durch Polyacrylamid-Gelelektrophorese (PAGE) und Immunoblotting; und die Wirkung der PI3K-Hemmung auf den Zellzyklus und die Apoptose durch Durchflusszytometrie. Pharmakologische Studien werden an oropharyngealen Plattenepithelkarzinom-Zelllinien und Kurzzeitkulturen sowie HPV E6 und E7 exprimierenden Zellen unter Verwendung von LY 294002 in vitro durchgeführt, um die Reaktion auf die PI3K-Hemmung zu analysieren. Die Ergebnisse der Reaktion auf die PI3K-Hemmung werden mit dem HPV-Status, der PIK3CA-Expression, -Amplifikation und -Mutation sowie der p110α-Expression korreliert.

PROJEKTE ZUSAMMENFASSUNG: Für diese Studie werden insgesamt 20 HPV(+)- und 20 HPV(-)-Tumorgewebeproben von Patienten gesammelt.