Analisi del DNA di campioni di tessuto tumorale da pazienti con cancro dell'orofaringe associato al virus del papilloma umano

OBIETTIVI:

• Analizza l'espressione e la mutazione di PIK3CA e l'amplificazione e l'espressione di p110α in campioni di tessuto tumorale da pazienti con carcinoma a cellule squamose (SCC) positivo al virus del papilloma umano (HPV+) e negativo al virus del papilloma umano (HPV-) dell'orofaringe.
• Determinare la proliferazione e la sopravvivenza dopo l'inibizione di PI3K nelle linee cellulari SCC orofaringee HPV(+) e HPV(-) e nelle cellule che esprimono HPV E6 ed E7.
• Determinare la proliferazione e la sopravvivenza dopo l'inibizione di PI3K in colture a breve termine di campioni di tessuto tumorale da pazienti con SCC primario HPV(+) e HPV(-) dell'orofaringe.

SCHEMA: I campioni di tessuto tumorale precedentemente raccolti vengono analizzati per il DNA dell'HPV mediante amplificazione PCR e sequenziamento diretto dei prodotti PCR; espressione della proteina E6 e relativa espressione di PIK3CA mediante qRT-PCR; amplificazione di PIK3CA mediante Southern blotting; mutazione di PIK3CA; espressione di p110α, fosfo-AKT, AKT totale e FOXO1 mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide (PAGE) e immunoblotting; e l'effetto dell'inibizione di PI3K sul ciclo cellulare e sull'apoptosi mediante citometria a flusso. Gli studi farmacologici vengono eseguiti su linee cellulari di carcinoma a cellule squamose orofaringee e colture a breve termine e cellule che esprimono HPV E6 ed E7 utilizzando LY 294002 in vitro per analizzare la risposta all'inibizione di PI3K. I risultati della risposta all'inibizione di PI3K saranno correlati con lo stato dell'HPV, l'espressione, l'amplificazione e la mutazione di PIK3CA e l'espressione di p110α.

ACCUMULO PREVISTO: per questo studio verranno accumulati un totale di 20 campioni di tessuto tumorale HPV (+) e 20 HPV (-) da pazienti.