Bezpieczeństwo Sofosbuwiru u osób z zaawansowaną niewydolnością nerek

Projekt badania Trzy ramiona, badanie obserwacyjne, farmakokinetyczne

Czas trwania studiów Dwa lata (marzec 2019-luty 2020)

Uczestnicy badania Zostaną uwzględnione dwie grupy uczestników (i) Osoby bez przewlekłej choroby nerek, tj. z prawidłowym eGFR i zakażone HCV (ii) Osoby z przewlekłą chorobą nerek i eGFR <30 ml/min oraz zakażone zakażeniem HCV

Uwzględnimy w sumie trzydziestu uczestników, po dziesięciu w każdej z trzech grup: Grupa A (ESRD, alternatywna dawka dzienna), Grupa B (ESRD, dawka dzienna) i Grupa C (normalny eGFR)

Schemat podawania leku Uczestnicy z eGFR <30 ml/min: otrzymają daklataswir w dawce 60 mg raz na dobę razem z sofosbuwirem (200 mg) raz na dobę lub sofosbuwirem w dawce 400 mg raz na drugi dzień Uczestnicy z prawidłową czynnością nerek otrzymają sofosbuwir w dawce 400 mg i daklataswir w dawce 60 mg raz na dobę.

Czas trwania leczenia będzie wynosił 12 tygodni dla wszystkich trzech badanych grup.

Harmonogram dializ Sesje hemodializy od czterech do pięciu godzin będą przeprowadzane dwa razy w tygodniu

Plan badania farmakokinetycznego (i) Cząsteczki: Sofosbuvir i GS331007 (ii) Metoda: Chromatografia cieczowa-tandemowa spektrometria mas (iii) Pobieranie próbek (każdorazowo ~2 ml) zostanie przeprowadzone w następujący sposób: Godzina „0”, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 24 [Dzień 1]; godzina 36 [dzień 2]; godzina 84 [Dzień 4] i godzina 156 [Dzień 7].

Pobieranie, transport i przechowywanie próbek Wkrótce po pobraniu próbki surowica zostanie oddzielona przez odwirowanie przy 4000 x g przez 10 min w temperaturze 4°C, a oddzielona surowica będzie przechowywana w temperaturze -80°C do czasu analizy. Analiza zostanie przeprowadzona przy użyciu zwalidowanej metody bioanalitycznej w CSIR-CDRI, Lucknow.

Inaktywacja wirusa zapalenia wątroby typu C w przechowywanej próbce Inaktywacja HCV zostanie przeprowadzona poprzez obróbkę cieplną. Przed obróbką cieplną komora kąpieli wodnej zostanie oczyszczona, napełniona świeżą wodą RO i sprawdzona pod kątem dokładności kalibracji temperatury. Próbki będą ogrzewane w temperaturze 60°C przez 10 minut lub w temperaturze 65°C przez 5 minut w celu inaktywacji wirusa. Natychmiast po obróbce cieplnej próbki zostaną umieszczone w kruszonym lodzie, aby zatrzymać efekt cieplny. Próbki będą transportowane w stanie zamrożonym do analizy.

Przygotowanie próbki:

Przygotowanie próbki składa się z prostej ekstrakcji ciecz-ciecz i/lub wytrącania białka.

Chromatografia cieczowa-spektroskopia masowa System HPLC składający się z systemu Shimadzu UFLC składającego się z pomp binarnych LC-20AD i automatycznego podajnika próbek SIL-HTc (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japonia) zostanie wykorzystany do nastrzyknięcia 10 µl podwielokrotności przetworzonych próbek na kolumnę C18 (4.6 mm × 50 mm, 5,0 µm). Rozdzielenie zostanie osiągnięte przez przepuszczanie fazy ruchomej w trybie izokratycznym, zawierającej acetonitryl i 10 mM bufor octanu amonu w odpowiednim stosunku (% obj./obj.) przy szybkości przepływu umożliwiającej wystarczającą rozdzielczość, aby można ją było zoptymalizować podczas opracowywania i walidacji metody. Faza ruchoma zostanie należycie przefiltrowana przez filtr 0,22 µm i odgazowana ultradźwiękami przed użyciem. Detekcja spektrometrii masowej zostanie przeprowadzona na spektrometrze masowym API 5500 Q Trap (Applied Biosystems, MDS Sciex Toronto, Kanada) wyposażonym w źródło jonizacji przez rozpylanie elektronów API (ESI). Napięcie rozpylania jonów zostanie ustawione na 5500 V. Parametry związane z instrumentem, mianowicie gaz nebulizatora, gaz kurtynowy, gaz pomocniczy i gaz kolizyjny oraz parametry związane ze związkiem, mianowicie potencjał deklastracji (DP), energia zderzenia (CE), potencjał wejścia (EP) i potencjał wyjścia komórki kolizyjnej (CXP) odpowiednio zostaną zoptymalizowane przed walidacją metody. Powietrze zerowe będzie używane jako gaz źródłowy, podczas gdy azot będzie używany zarówno jako gaz kurtynowy, jak i kolizyjny. Spektrometr masowy będzie pracował w trybie jonów dodatnich ESI i ESI ujemnych, a detekcja jonów będzie prowadzona w trybie monitorowania reakcji wielokrotnych (MRM) monitorującym przejścia analitów. Kwadrupol 1 i kwadrupol 3 zostaną utrzymane w rozdzielczości jednostkowej, a czas przebywania zostanie ustawiony na 200 ms. Oprogramowanie Analyst 1.6 (wersja 1.6, zbudowany 3773; AB Sciex, Toronto, Kanada) zostanie użyte do akwizycji danych i oceny ilościowej.

Oszacowanie parametrów farmakokinetycznych Parametry farmakokinetyczne zostaną oszacowane przy użyciu oprogramowania WinNonlin poprzez modelowanie kompartmentowe/niekompartmentowe.