Leczenie choroby zwyrodnieniowej stawów kolanowych osoczem bogatopłytkowym

• Celem pracy jest porównanie klinicznych wyników infiltracji kwasem hialuronowym i osoczem bogatopłytkowym (PRP) w leczeniu zachowawczym łagodnej i umiarkowanej choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego. Poza tym chcemy ujednolicić dwa protokoły pozyskiwania i przygotowywania PRP do stosowania w leczeniu łagodnej i umiarkowanej choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego.
• Próba obejmie 90 pacjentów z chorobą zwyrodnieniową stawu kolanowego leczonych w Poradni Programu Monitorowania i Leczenia Choroba zwyrodnieniowa stawów.
• Pacjenci zostaną podzieleni losowo na bloki poprzez proste narysowanie nieprzezroczystych kopert przed zastosowaniem, w 3 grupach eksperymentalnych i zidentyfikowani w sposób opisany poniżej:

GRUPA PRP Protokół A: Złożona z 30 pacjentów, którzy będą otrzymywali śródstawową iniekcję osocza bogatopłytkowego (PRP A), raz w tygodniu przez trzy kolejne tygodnie; GRUPA PRP Protokół B: Złożona z 30 pacjentów, którzy będą otrzymywali dostawową iniekcję osocza bogatopłytkowego (PRP B), raz w tygodniu przez trzy kolejne tygodnie; GRUPA Kwas hialuronowy: składa się z 30 pacjentów, którzy otrzymają dostawowe wstrzyknięcie 2 ml dostawowego kwasu hialuronowego (AHI), raz w tygodniu przez trzy kolejne tygodnie.

• PRP A zostanie przygotowany zgodnie z następującą techniką opublikowaną wcześniej w innym miejscu:

  1. Pobranie 50 ml krwi obwodowej z żyły łokciowej do sterylnych probówek próżniowych o pojemności 5 ml z 10% cytrynianem sodu; Porcja pobranej krwi pełnej zostanie wykorzystana do oceny zanieczyszczenia mikrobiologicznego;
  2. Wirować pełną krew przez 10 minut przy 1200 obr./min, w temperaturze pokojowej, rozdzielając materiał na dwie różne warstwy (erytrocyty w dolnej warstwie i osocze w górnej warstwie), w wirówce o promieniu 6,5 cm;
  3. Oddzielić i wirować osocze przez 5 minut przy 1200 obr./min, tworząc dwie nowe warstwy (górną, która zostanie usunięta, dolną, zawierającą płytki krwi); Należy zachować ostrożność, aby ostrożnie odessać osocze z zamkniętej probówki za pomocą strzykawki i igły i przenieść je do nowej probówki zbiorczej, ostrożnie wstrzykując je przez nasadkę;
  4. Przygotuj materiał do infiltracji w kolanie; szacuje się, że po przygotowaniu otrzymamy 5 ml PRP, z czego połowę objętości wykorzystamy do wstrzyknięcia, a drugą połowę do analizy składu i analizy mikrobiologicznej.

• Przygotowanie PRP B zostanie przeprowadzone zgodnie z następującą techniką opublikowaną wcześniej gdzie indziej:

  a) Pobranie 50 ml krwi obwodowej z żyły łokciowej do sterylnych probówek próżniowych o pojemności 5 ml z 10% cytrynianem sodu; b) Wirować pełną krew przez 15 minut przy 1500 obr./min, w temperaturze pokojowej, rozdzielając materiał na dwie różne warstwy (czerwone krwinki, w dolnej warstwie i osocze, w górnej warstwie), w wirówce o promieniu 6,5 cm; e) Rozdzielić i wirować osocze przez 7 minut przy 3500 obr./min, tworząc dwie nowe warstwy (górną, która zostanie usunięta, dolną, zawierającą płytki krwi); Należy zachować ostrożność, aby ostrożnie odessać osocze z zamkniętej probówki za pomocą strzykawki i igły i przenieść je do nowej probówki zbiorczej, ostrożnie wstrzykując je przez nasadkę; f) Przygotować materiał do infiltracji w kolanie; po przygotowaniu szacuje się, że otrzymamy 5 ml PRP, z czego połowę objętości wykorzystamy do wstrzyknięcia, a drugą połowę do analizy składu.

• Wszystkie nacieki będą wykonywane w sali zabiegowej ambulatoryjnej z zachowaniem zasad aseptyki. Technika aplikacji będzie przebiegać zgodnie z poniższymi krokami:

  1. Pacjent siedzi na noszach w wygodnej pozycji, z ugiętymi kolanami i zasłoniętymi oczami (zaślepienie co do wykonywanego zabiegu);
  2. Powierzchnię, na której będzie wykonywana aplikacja, oczyścić gazikiem zwilżonym odkażającą Chlorheksydyną;
  3. Pozwól chlorheksydynie działać przez minutę, a następnie usuń ją gazikiem zwilżonym 70% alkoholem;
  4. Badanie palpacyjne kolana w celu naciekania niekierowanego przez dostęp przednio-boczny do kolana;
  5. Wykonać przycisk znieczulający na skórze i tkance podskórnej w miejscu nacieku za pomocą 1 ml 2% lidokainy bez środka zwężającego naczynia krwionośne;
  6. Wprowadź igłę dołączoną do strzykawki użytego produktu przez wybraną ścieżkę;
  7. Wstrzyknąć leczenie zgodnie z randomizacją (AHI/PRP A/PRP B);
  8. Wyjąć igłę i pustą strzykawkę ze stawu;
  9. Wykonaj 30 cykli zgięcia i wyprostu kolana, aby rozprowadzić produkt na stawie;

  10. Zakończ procedurę prostym opatrunkiem.

      • Pacjent nie powinien spożywać tłustych potraw ani napojów alkoholowych na 48 godzin przed zabiegiem;
      • Jeśli obecny jest wysięk stawowy, należy go odessać przed infiltracją;
      • Należy zalecić pacjentowi powrót do szpitala w przypadku nasilenia bólu, obrzęku lub zaczerwienienia kolana;
      • Nie należy stosować NLPZ w tygodniu następującym po aplikacji.

• Ocena kliniczna będzie składać się z następujących etapów:

  1. Subiektywna ocena funkcjonalna na podstawie kwestionariuszy WOMAC, Knee Society Score (KSS) oraz wizualnej skali analogowej do analizy bólu, funkcji i satysfakcji (przed naciekiem, w dniu trzeciego nacieku, 3 miesiące, 6 miesięcy i rok po nacieku; wg. protokół obserwacji do ośrodka kolanowego);

  2. Ocena kliniczna, polegająca na (1) rejestracji danych demograficznych (wiek, płeć, waga, wzrost, stopień zaawansowania choroby zwyrodnieniowej stawów), (2) pomiarze zakresu ruchu, (3) ocenie osi kończyn dolnych (przed naciekiem, na dzień trzeciego nacieku, 3 miesiące, 6 miesięcy i rok po nacieku, zgodnie z protokołem kontroli stawu kolanowego); Ocena radiologiczna z radiogramami panoramicznymi, przednio-tylnymi i profilowymi kolan z obciążeniem, mająca na celu wykrycie zmian w osi i szparach stawowych (przed naciekiem, 6 miesięcy i 1 rok po nacieku, zgodnie z protokołem kontroli ośrodka kolana).

     Pacjenci będą oceniani przez obserwatora niezależnego od tego, który zastosował wybrane leczenie.

• Badanie składu PRP zostanie przeprowadzone w Centrum Technologii Komórkowej zgodnie z techniką opublikowaną wcześniej w innym miejscu:

Próbki krwi obwodowej z grupy A i B będą przetwarzane w celu uzyskania PRP, przy czym część tego produktu zostanie wykorzystana we wniosku, a część wykorzystana do analizy składu wytworzonego produktu.

Wkrótce po przygotowaniu część produktu zostanie oceniona pod kątem składu hematologicznego: całkowitej liczby komórek, leukocytów i płytek krwi oraz średniej objętości płytek krwi. Pozostała część PRP będzie przechowywana w porcjach po około 200 ul w Centrum Technologii Komórkowej, gdzie pozostanie zamrożona w zamrażarce w temperaturze -80°C do czasu analizy proteomicznej (określonej poniżej) i oznaczenia ilościowego czynników i cytokin , za pomocą testu immunoabsorpcji enzymatycznej i zestawów Luminex: interleukina-1β, interleukina-6, interleukina-8, czynnik martwicy nowotworów-α, interferon-γ, interleukina-2, interleukina-2R, interleukina-7, interleukina-15, interleukina- 17, interleukina-12p40 (cytokiny prozapalne); interleukina-1RA, interleukina-4, interleukina-5, interleukina-10, interleukina-13, interferon-α (cytokiny przeciwzapalne); eotaksyna, białko indukowane interferonem gamma 10kDa, białko kofaktora błony-1, monokina indukowana interferonem-γ, makrofagowe białko zapalne-1α, makrofagowe białko zapalne-1β (chemokiny); czynnik wzrostu śródbłonka, czynnik wzrostu β-fibroblastów, czynnik stymulujący tworzenie kolonii G, czynnik wzrostu śródbłonka naczyń, transformujący czynnik wzrostu-β1, transformujący czynnik wzrostu-β2, transformujący czynnik wzrostu-β3, płytkopochodny czynnik wzrostu-AB, płytkowy czynnik wzrostu -BB, insulinowy czynnik wzrostu-1 (czynniki wzrostu).