Comparação do rendimento diagnóstico entre M-FISH, FISH Probe Panel e análise citogenética convencional em AML

A hematologia neoplásica está na vanguarda da medicina personalizada. A classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS) incorpora dados genéticos com achados microscópicos, imunofenotípicos e clínicos e classifica as neoplasias hematológicas em categorias clínicas e biologicamente distintas. Esse sistema orienta o diagnóstico, o prognóstico e as escolhas terapêuticas, o que se tornou cada vez mais importante com o surgimento de terapias direcionadas para linfoma e leucemia. No entanto, os exames laboratoriais para neoplasias hematológicas são de alta complexidade e geralmente bastante onerosos.

A avaliação inicial de muitas neoplasias hematológicas inclui estudos morfológicos, histológicos, imunofenotípicos (citometria de fluxo e/ou imuno-histoquímica) e citogenéticos convencionais. Os dados obtidos da análise citogenética podem ser patognomônicos para leucemias específicas na classificação da OMS (por exemplo, leucemia mielóide aguda (LMA) com anormalidades citogenéticas recorrentes e leucemia mielóide crônica (LMC)) e provavelmente assumirão um papel maior na definição de categorias específicas em classificações adicionais.

Estudos citogenéticos convencionais têm sido o padrão-ouro por mais de cinco décadas para detectar alterações genéticas maiores que 10 Mb (mega pares de bases). Eles abriram caminho na identificação de aberrações cromossômicas específicas associadas a subconjuntos clínica e morfologicamente definitivos de neoplasias hematológicas.

A hibridização fluorescente in situ (FISH) tornou-se um teste complementar confiável e rápido no direcionamento de eventos genéticos críticos associados ao diagnóstico e prognóstico em neoplasias hematológicas. A FISH abordou os problemas dos estudos citogenéticos convencionais, visando células interfásicas além das metáfases. Tornou-se claro que os estudos FISH também podem ser um componente integral da avaliação diagnóstica, particularmente quando a anormalidade é "críptica", ou seja, não evidente por estudos citogenéticos convencionais.

Embora o teste FISH complementar aumente a detecção geral de aberrações, seu benefício não é uniforme em todos os tipos de neoplasias hematológicas. Isso ocorre porque as sondas FISH são restritas à detecção apenas de anormalidades específicas e alterações genéticas além do escopo das sondas FISH seriam, portanto, completamente perdidas.

É prática comum que os laboratórios usem painéis de sonda FISH em conjunto com a cariotipagem em amostras de diagnóstico e durante o acompanhamento para monitorar a resposta à terapia. O FISH é direcionado para anormalidades específicas e os resultados podem ser avaliados de forma automatizada em núcleos interfásicos, permitindo o exame de mais células do que os estudos citogenéticos convencionais. FISH tem maior sensibilidade analítica e, em certas circunstâncias, maior sensibilidade clínica em comparação com estudos citogenéticos convencionais. O uso de painéis de sonda FISH para auxiliar no diagnóstico ou no monitoramento de amostras de acompanhamento de neoplasias hematológicas é crítico.

O Eastern Collaborative Oncology Group (ECOG) comparou estudos citogenéticos convencionais e FISH em pacientes com LMA e descobriu que um painel de sonda para detectar monossomia 5/deleção 5q, monossomia 7/deleção 7q, trissomia 8, t(8;21), t(9 ;22), rearranjos MLL com vários parceiros, t(15;17) e inv(16)/t(16;16), tiveram uma concordância entre 98% e 100%. Por outro lado, o estudo de He et al demonstra o valor limitado do teste FISH em LMA em adultos no contexto de um estudo de cariotipagem adequado.

Apesar de muitos avanços tecnológicos significativos feitos nos últimos anos na área de testes genéticos clínicos, estudos citogenéticos convencionais e estudos FISH de rotina continuam sendo importantes ferramentas de testes laboratoriais disponíveis para avaliação de neoplasias hematológicas. Normalmente, esses dois métodos de teste se complementam e, muitas vezes, o FISH serve para esclarecer e definir melhor os resultados citogenéticos. Portanto, há uma expectativa muito forte de que os resultados citogenéticos e de FISH se confirmem, apesar dos casos que parecem ser exceções. Quando ocorrem resultados conflitantes por esses dois métodos de teste na mesma amostra, os laboratórios clínicos são desafiados a oferecer explicações com base em dados empíricos além de simplesmente afirmar que foi ou não devido a um erro de laboratório.

Multiplex FISH (M-FISH) representa um dos desenvolvimentos mais significativos em citogenética molecular da última década. Na citogenética de tumores e leucemias, dois grupos foram direcionados pelo M-FISH para identificar rearranjos cromossômicos crípticos não detectáveis ​​por estudos citogenéticos convencionais: aqueles com um cariótipo aparentemente normal (suspeito de abrigar pequenos rearranjos não detectáveis ​​pela citogenética convencional) e aqueles com um complexo cariótipo aberrante (que são difíceis de cariótipo com precisão devido ao grande número de aberrações).

Zhang et ai. usou cariótipo espectral (SKY) para reavaliar os cariótipos de casos de LMA relatados como normais por banda G. Isso resultou na identificação de um caso de t(11;19)(q23;p13), uma anormalidade citogenética sutil, mas reconhecida, e um clone menor contendo monossomia do cromossomo 7 em outro caso. Em um estudo semelhante, Mohr et al. compararam SKY com cariótipo convencional em pacientes com LMA ou SMD com cariótipos normais. Nenhuma anormalidade foi identificada.

Com a falta de uma abordagem algorítmica padronizada baseada em evidências, o uso indevido e a superutilização de testes laboratoriais são comuns e resultam em aumento dos custos de saúde e na complexidade do atendimento ao paciente. No atual ambiente de assistência à saúde, que se concentra cada vez mais em valor e eficiência, é fundamental que patologistas e clínicos incorporem técnicas caras e de alta complexidade na rotina de atendimento ao paciente. Enquanto os estudos citogenéticos convencionais fornecem uma visão abrangente do genoma, o painel de sonda FISH pode detectar anormalidades genéticas enigmáticas ou submicroscópicas e identificar anormalidades genéticas recorrentes em células que não se dividem. M-FISH pode identificar rearranjos cromossômicos crípticos que não são detectados por estudos citogenéticos convencionais. Como consequência, é comumente extrapolado que FISH irá melhorar a sensibilidade de detecção de todas as anormalidades genéticas em comparação com estudos citogenéticos convencionais. Essa suposição foi então traduzida na prática clínica para ter clínicos e patologistas solicitando rotineiramente estudos citogenéticos convencionais e estudos FISH em pacientes com neoplasias hematológicas. Dependendo de quão abrangente é o painel de sonda FISH, o custo para este teste pode ser bastante caro, e seu valor aditivo permanece questionável.