Comparación del rendimiento diagnóstico entre M-FISH, panel de sonda FISH y análisis citogenético convencional en LMA

La hematología neoplásica está a la vanguardia de la medicina personalizada. La clasificación de la Organización Mundial de la Salud (OMS) incorpora datos genéticos con hallazgos microscópicos, inmunofenotípicos y clínicos y clasifica las neoplasias hematológicas en categorías clínica y biológicamente distintas. Este sistema guía el diagnóstico, el pronóstico y las opciones terapéuticas, lo que se ha vuelto cada vez más importante con las terapias dirigidas emergentes para el linfoma y la leucemia. Sin embargo, las pruebas de laboratorio para neoplasias hematológicas son de alta complejidad y generalmente bastante costosas.

La evaluación inicial de muchas neoplasias hematológicas incluye estudios morfológicos, histológicos, inmunofenotípicos (citométricos de flujo y/o inmunohistoquímicos) y citogenéticos convencionales. Los datos obtenidos del análisis citogenético pueden ser patognomónicos para leucemias específicas en la clasificación de la OMS (por ejemplo, leucemia mieloide aguda (LMA) con anomalías citogenéticas recurrentes y leucemia mielógena crónica (LMC)) y es probable que asuman un papel más importante en la definición de categorías específicas en más clasificaciones.

Los estudios citogenéticos convencionales han sido el estándar de oro durante más de cinco décadas para detectar alteraciones genéticas de tamaño superior a 10 Mb (megapares de bases). Han allanado el camino para identificar aberraciones cromosómicas específicas asociadas con subconjuntos clínica y morfológicamente definitivos de neoplasias hematológicas.

La hibridación fluorescente in situ (FISH) se ha convertido en una prueba complementaria confiable y rápida para detectar eventos genéticos críticos asociados con el diagnóstico y pronóstico en neoplasias hematológicas. FISH ha abordado los problemas de los estudios citogenéticos convencionales dirigiéndose a las células en interfase además de las metafases. Ha quedado claro que los estudios FISH también pueden ser un componente integral de la evaluación diagnóstica, en particular cuando la anomalía es "críptica", es decir, no es evidente en los estudios citogenéticos convencionales.

Aunque la prueba FISH complementaria aumenta la detección general de aberraciones, su beneficio no es uniforme en todos los tipos de neoplasias hematológicas. Esto se debe a que las sondas FISH están restringidas a la detección de anomalías específicas y, por lo tanto, las alteraciones genéticas más allá del alcance de las sondas FISH se perderían por completo.

Es una práctica común que los laboratorios utilicen paneles de sonda FISH junto con el cariotipo tanto en muestras de diagnóstico como durante el seguimiento para monitorear la respuesta a la terapia. FISH está dirigido a anomalías específicas, y los resultados pueden evaluarse de forma automatizada en núcleos en interfase, lo que permite el examen de más células que los estudios citogenéticos convencionales. FISH tiene mayor sensibilidad analítica y, en ciertas circunstancias, mayor sensibilidad clínica en comparación con los estudios citogenéticos convencionales. El uso de paneles de sonda FISH para ayudar en el diagnóstico o en el control de muestras de seguimiento de neoplasias hematológicas es fundamental.

El Eastern Collaborative Oncology Group (ECOG) comparó estudios citogenéticos convencionales y FISH en pacientes con AML y encontró que un panel de sondas para detectar monosomía 5/deleción 5q, monosomía 7/deleción 7q, trisomía 8, t(8;21), t(9 ;22), los reordenamientos de MLL con varios socios, t(15;17) e inv(16)/t(16;16), tuvieron una concordancia entre 98% y 100%. Por otro lado, el estudio de He et al demuestra el valor limitado de las pruebas FISH en la AML de adultos en el marco de un estudio de cariotipo adecuado.

A pesar de los muchos avances tecnológicos significativos realizados en los últimos años en el área de las pruebas genéticas clínicas, los estudios citogenéticos convencionales y los estudios FISH de rutina siguen siendo importantes herramientas de pruebas de laboratorio disponibles para evaluar las neoplasias hematológicas. Por lo general, estos dos métodos de prueba se complementan entre sí y, a menudo, FISH sirve para aclarar y definir mejor los resultados citogenéticos. Por lo tanto, existe una expectativa muy fuerte de que los resultados citogenéticos y FISH se confirmen entre sí a pesar de los casos que parecen ser excepciones. Cuando se producen resultados contradictorios con estos dos métodos de prueba en la misma muestra, los laboratorios clínicos tienen el desafío de ofrecer explicaciones basadas en datos empíricos más allá de simplemente afirmar que se debió o no a un error de laboratorio.

Multiplex FISH (M-FISH) representa uno de los desarrollos más significativos en citogenética molecular de la última década. En la citogenética de tumores y leucemias, M-FISH se ha enfocado en dos grupos para identificar reordenamientos cromosómicos crípticos no detectables por estudios citogenéticos convencionales: aquellos con un cariotipo aparentemente normal (sospechosos de albergar pequeños reordenamientos no detectables por citogenética convencional) y aquellos con un complejo cariotipo aberrante (que son difíciles de cariotipar con precisión debido a la gran cantidad de aberraciones).

Zhang et al. utilizó el cariotipo espectral (SKY) para reevaluar los cariotipos de los casos de AML informados como normales por bandas G. Esto resultó en la identificación de un caso de t(11;19)(q23;p13), una anomalía citogenética sutil pero reconocida, y un clon menor que contenía monosomía para el cromosoma 7 en otro caso. En un estudio similar, Mohr et al. comparó SKY con el cariotipo convencional en pacientes con LMA o SMD con cariotipos normales. No se identificaron anomalías.

Con la falta de un enfoque algorítmico estandarizado basado en la evidencia, el uso indebido y la sobreutilización de las pruebas de laboratorio son comunes y dan como resultado un aumento de los costos de atención médica y la complejidad de la atención al paciente. En el entorno actual de atención de la salud, que se centra cada vez más en el valor y la eficiencia, es fundamental que los patólogos y los médicos incorporen técnicas costosas y de alta complejidad en la atención rutinaria del paciente. Mientras que los estudios citogenéticos convencionales brindan una visión integral del genoma, el panel de sondas FISH puede detectar anomalías genéticas crípticas o submicroscópicas e identificar anomalías genéticas recurrentes en células que no se dividen. M-FISH puede identificar reordenamientos cromosómicos crípticos que no son detectados por estudios citogenéticos convencionales. Como consecuencia, comúnmente se extrapola que FISH mejorará la sensibilidad para detectar todas las anomalías genéticas en comparación con los estudios citogenéticos convencionales. Esta suposición luego se ha traducido en la práctica clínica para que los médicos y patólogos soliciten rutinariamente tanto estudios citogenéticos convencionales como estudios FISH en pacientes con neoplasias hematológicas. Dependiendo de qué tan completo sea el panel de la sonda FISH, el costo de esta prueba puede ser bastante alto y su valor aditivo sigue siendo cuestionable.