Análise multicêntrica fenótipo-genótipo de manchas vasculares para otimizar o tratamento utilizando tomografia de coerência óptica

As manchas vasculares, comumente chamadas de "marcas de nascença vinho do porto", são anomalias vasculares que afetam 0,3-0,5% dos recém-nascidos; eles afetam a qualidade de vida devido ao supercrescimento de tecidos moles, nodularidade e desfiguração estigmatizante que altera a vida. O tratamento a laser é o padrão de tratamento e depende da fotocoagulação dos vasos. No entanto, menos de 25% são relatados para limpar totalmente; a razão para esta falta de resposta é mal compreendida. Recentemente, mutações em mosaico em genes que controlam a regulação do ciclo celular, incluindo GNAQ, GNA11, PiK3CA e outros, foram elucidadas como uma causa genética para essas marcas de nascença. Essa descoberta transformou nossa compreensão fundamental de sua fisiopatologia. Ele fornece uma explicação molecular para a capacidade de resposta limitada ao laser, pois esses genes compartilham vias oncogênicas que resultam em proliferação e crescimento celular sincronizado e rigidamente regulado. Mais importante ainda, esta descoberta revelou o potencial para utilizar o bloqueio farmacológico de vias a jusante ativadas para melhorar os resultados.

Esta proposta visa utilizar novas imagens para destacar diferenças na vasculatura de marcas de nascença vasculares com genotipagem e fenotipagem clínica pareada profunda e criar um algoritmo de laser direcionado com base no genótipo e na idade. Em um pequeno subconjunto de pacientes com genotipagem GNAQ/GNA11 confirmada, os investigadores utilizarão o perfil do transcriptoma espacial de célula única do tecido afetado para conduzir a descoberta de medicamentos. Após a conclusão deste projeto, os investigadores terão correlações genótipo-fenótipo refinadas aprimoradas por novas imagens de tecido alvo, elucidando diferenças na vasculatura por genótipo, o que pode acelerar tratamentos baseados em precisão para prevenir desfiguração e melhorar a qualidade de vida. Esses resultados fornecerão dados críticos para a implementação de ensaios clínicos que mudarão os paradigmas de tratamento de uma modalidade de tratamento destrutiva única e ineficaz para uma intervenção farmacológica direcionada associada à luz.

Os investigadores levantam a hipótese de que a remoção das marcas de nascença do vinho do Porto exigirá: 1) Uma abordagem baseada em precisão, incluindo dosimetria a laser ideal informada por novas imagens angiográficas, idade e genótipo, e 2) bloqueio farmacológico direcionado específico da via de vias ativadas informado pela investigação de efetores a jusante. O objetivo a longo prazo é mudar os paradigmas de tratamento de uma única modalidade destrutiva ineficaz para uma fonte de laser direcionada juntamente com terapia tópica direcionada.

Objetivo 1: Correlacionar genótipo com fenótipo clínico

• 1.1 Correlacione o genótipo com fenotipagem abrangente em participantes disponíveis nos estratos A e B. Quando estratificado por idade do participante, a hipótese é que o genótipo influenciará o tamanho do vaso, com maior ativação do ciclo celular associada a maior diâmetro mediano do vaso e profundidade na OCT.
• 1.2 Correlacione o fenótipo clínico com a tomografia de coerência óptica dinâmica (OCT) nos estratos A e B. Os investigadores levantam a hipótese de que a idade do participante será o maior preditor do tamanho e profundidade medianos dos vasos na OCT. Os investigadores esperam ver diversidade na arquitetura e padronização da vasculatura com base no genótipo. A hipótese é que pacientes com mutação GNAQ demonstrarão distorção vascular significativa, com abandono e dilatação vascular, conforme relatado na literatura de OCT ocular em pacientes com Síndrome de Sturge Weber.
• 1.3 Colete resultados quantitativos e qualitativos em participantes tratados com OCT para avaliar a experiência do participante utilizando esta modalidade adjuvante no tratamento no estrato B.
• 1.4 Integrar dados de OCT para criar um algoritmo de laser direcionado por idade e/ou genótipo para otimizar a fotocoagulação de células mutantes em Strata B.

Objetivo 2: Determinar o mecanismo molecular das manchas vasculares faciais para desenvolver terapias específicas

• 2.1 Em 12-15 participantes com mutações GNAQ/GNA11 confirmadas nos estratos A, estratos B ou estratos C realizam biópsias de tecido afetado e normal, coletam amostras de sangue e saliva para facilitar a análise transcriptômica espacial imparcial usando o sistema Visium 10x.
• 2.2 Identificar novos alvos específicos do genótipo a jusante por meio de análise transcriptômica espacial imparcial com avaliação direcionada de 3 vias para as quais os inibidores tópicos estão atualmente em desenvolvimento (PiK3CA, mTOR e MEK/ERK).

Objetivo 3: Avaliar os resultados do laser no tratamento da SPW (estratos B e C)

• 3.1 Melhora quantitativa na PWS dos participantes estratificada por idade de início do laser, parâmetros de tratamento a laser e fenotipagem clínica profunda (localização anatômica, morfologia, OCT e genótipo). A intenção deste objetivo é determinar se o início precoce do laser (antes de 1 ano de idade) resulta em melhores resultados e se a capacidade de resposta do laser difere por localização anatômica, morfologia/cor ou genótipo. A hipótese é que o tratamento mais precoce (iniciado antes dos 2 anos de idade) resultará em melhor depuração, que é mais duradoura do que naqueles que iniciam o laser após os 2 anos de idade. Em um pequeno subconjunto de pacientes com genotipagem disponível, os investigadores investigarão a capacidade de resposta da doença ao laser com base no genótipo e na localização. A hipótese é que a SPW associada ao PiK3CA responderá melhor do que outros genótipos (GNAQ, GNA11, RASA1, EPHB4), e que a SPW lateral da face e o meio da testa serão os locais anatômicos mais responsivos.
• 3.2 Investigar os resultados significativos relatados pelo paciente e/ou pelos pais em indivíduos tratados com laser. Os investigadores irão estratificar por respondedores a laser versus não respondedores. A hipótese é que os respondedores terão melhor qualidade de vida. Por fim, os investigadores avaliarão prospectivamente os resultados relatados pelo paciente em relação ao tratamento a laser, incluindo satisfação do paciente, recorrência e dor do procedimento (conforme relatado pelo paciente e/ou pelos pais em crianças com menos de 7 anos de idade). Os investigadores levantam a hipótese de altas taxas de recorrência e desconforto nos pacientes.

Projeto de pesquisa:

Uma vez obtido o consentimento informado, um exame visual da pele será feito pelo dermatologista do estudo para documentar os achados cutâneos e as fotografias da(s) área(s) afetada(s) serão tiradas para este estudo. As fotografias serão usadas para determinar as correlações genótipo-fenótipo e serão compartilhadas com o centro coordenador.

As fotografias serão armazenadas eletronicamente de maneira segura em conformidade com a HIPAA, de acordo com as políticas de cada local.

No momento da inscrição ou em uma visita subsequente, mas apenas uma vez durante a participação no estudo, os indivíduos podem concordar em fornecer qualquer uma das seguintes amostras não clinicamente necessárias para estudos genéticos: amostra de sangue, amostra de saliva, biópsia de punção cutânea (pele normal ou pele afetada), amostras de tecido cirúrgico, amostras de tecido embebidas em parafina (de cirurgias anteriores). A coleta de qualquer uma dessas amostras é opcional.

No momento da inscrição, os participantes serão colocados no Strata A - medições únicas de OCT ou Strata B - medições seriadas de OCT que são feitas em associação com tratamento a laser padrão, ou Strata C - avaliação serial com tratamento a laser padrão sem uso de OUTUBRO.

Os participantes que prosseguirão para o Strata A terão medições únicas de OCT de sua mancha vascular se optarem por não/não forem elegíveis para/se tiverem sido submetidos anteriormente ao tratamento padrão a laser para sua mancha vascular no momento da inscrição. A indicação para o Strata A é que alguns pacientes optarão por não se submeter ao tratamento com laser, principalmente se tiverem sido extensivamente tratados com laser anteriormente ou tiverem uma mancha vascular rosa clara estável. Os participantes que seguirem para o Strata C serão tratados com laser para atendimento padrão e acompanhados sem o uso de OCT seriado.

Os participantes que prosseguirão para o Strata B terão medições seriadas de OCT de sua mancha vascular realizadas antes do início do tratamento padrão com laser. A OCT será realizada antes de cada tratamento a laser padrão se o participante tiver optado pelo tratamento a laser padrão como tratamento de sua mancha vascular no momento da inscrição.

Os participantes inscritos no Strata A e submetidos a uma medição de OCT única podem ir para o Strata B se, posteriormente, decidirem se submeter ao tratamento a laser padrão para sua mancha vascular. Esses participantes ainda poderão participar das coletas de amostra acima apenas uma vez durante sua participação. A transição do estrato A para o estrato B não é considerada uma segunda inscrição.

Todos os participantes permanecerão no estudo até que o estudo seja encerrado. Os participantes poderão realizar coletas de amostras em qualquer visita durante o estudo.

A fenotipagem clínica dos participantes será aumentada por meio do uso de OCT dinâmico para caracterizar o diâmetro médio e a profundidade dos vasos sanguíneos. A OCT é uma tecnologia não invasiva específica para a pele que permite a identificação rápida do diâmetro do vaso sanguíneo, densidade e profundidade do vaso dentro da área digitalizada. É como colocar uma sonda de ultrassom na pele do participante. A sonda tem 6 x 6 mm e, em 60 segundos após a colocação, fornece o diâmetro (moda) mais comum dos vasos sanguíneos detectados, juntamente com a profundidade do plexo vascular. OCT deve ser indolor e de risco mínimo para o participante.

Para os participantes no Strata B, a OCT será realizada na linha de base e antes de cada padrão de tratamento a laser. Os marcos anatômicos para a escolha da colocação da OCT serão decididos pelo médico do estudo, com o objetivo de obter imagens da área mais proeminente da mancha. Em um subconjunto de participantes, as medições de OCT também serão feitas após o tratamento a laser padrão. Os marcos anatômicos para escolha neste subconjunto serão decididos pelo médico do estudo; a área mais clara da mancha também será visualizada para contrastar as diferenças entre o diâmetro do vaso, pois isso afetaria a escolha das configurações ideais do laser em diferentes áreas da mancha. O número de áreas em que a OCT será realizada sobre o corante vascular será determinado pelo médico assistente com base no tamanho do corante vascular. As configurações de laser alteradas usadas para o tratamento a laser padrão serão guiadas pelo uso da teoria da fototermólise seletiva para determinar a duração ideal do pulso do laser com base na medição OCT. Isso seguirá os padrões aceitáveis ​​de tratamento e, em última análise, ficará a critério do cirurgião a laser. O médico do estudo também terá como objetivo medir as mesmas áreas antes de cada visita, com a expectativa de que o tamanho da mancha provavelmente varie com base na resolução do tratamento da mancha vascular.

Para os participantes do Estrato B, um questionário será preenchido até 5 vezes pelo participante e/ou pelos pais/responsáveis ​​dos participantes de 0 a 17 anos durante o estudo. O questionário perguntará como os participantes e/ou seus pais/responsáveis ​​se sentem sobre os resultados do tratamento a laser e como eles se sentem sobre o uso de OCT além do tratamento padrão.

Para os participantes no Strata C (que se submetem ao laser como parte do tratamento padrão sem OCT), a equipe do estudo solicitará que os pais/e/ou o sujeito preencham os resultados relatados pelo paciente durante o estudo. A intenção desses questionários é capturar resultados significativos dos pacientes com medidas PROMIS validadas relacionadas à eficácia do laser para suas manchas de vinho do Porto.

No momento da inscrição do participante no Strata C e/ou após o primeiro laser do participante, os pais/responsáveis ​​preencherão um questionário de satisfação dos pais. Os investigadores completarão uma avaliação de acompanhamento a laser e uma escala analógica visual nas visitas do participante para quantificar a melhora na mancha de vinho do porto desde o início. A cada 6 meses, o paciente ou pai/responsável preencherá o formulário de avaliação do laser do paciente/família.