Многоцентровый фенотип-генотипический анализ сосудистых пятен для оптимизации лечения с использованием оптической когерентной томографии

Сосудистые пятна, обычно называемые «винными родимыми пятнами», представляют собой сосудистые аномалии, поражающие 0,3–0,5% новорожденных; они влияют на качество жизни из-за разрастания мягких тканей, узловатости и изменяющих жизнь, стигматизирующих уродств. Лазерное лечение является стандартом лечения и основано на фотокоагуляции сосудов. Тем не менее, сообщается, что менее 25% полностью очищаются; причина такого отсутствия ответа плохо изучена. Недавно мозаичные мутации в генах, которые контролируют регуляцию клеточного цикла, включая GNAQ, GNA11, PiK3CA и другие, были выявлены как генетическая причина этих родимых пятен. Это открытие изменило наше фундаментальное понимание их патофизиологии. Это обеспечивает молекулярное объяснение ограниченной чувствительности к лазеру, поскольку эти гены имеют общие онкогенные пути, которые приводят к синхронной, строго регулируемой клеточной пролиферации и росту. Самое главное, это открытие раскрыло потенциал использования фармакологической блокады активированных нижестоящих путей для улучшения результатов.

Это предложение направлено на использование новой визуализации для выявления различий в сосудистой сети сосудистых родимых пятен с помощью генотипирования и глубокого парного клинического фенотипирования, а также на создание целевого лазерного алгоритма на основе генотипа и возраста. В небольшой подгруппе пациентов с подтвержденным генотипированием GNAQ/GNA11 исследователи будут использовать профилирование пространственного транскриптома одной клетки пораженной ткани для поиска лекарств. По завершении этого проекта исследователи получат уточненные корреляции генотип-фенотип, усиленные новой визуализацией ткани-мишени, выявляя различия в сосудистой сети по генотипу, и все это может ускорить точные методы лечения, чтобы предотвратить обезображивание и улучшить качество жизни. Эти результаты предоставят важные данные для проведения клинических испытаний, которые изменят парадигмы лечения от единственного, неэффективного деструктивного метода лечения к целенаправленному фармакологическому вмешательству в сочетании со светом.

Исследователи предполагают, что для удаления родимых пятен от портвейна потребуются: 1) точный подход, включающий оптимальную лазерную дозиметрию, основанную на новых ангиографических изображениях, возрасте и генотипе, и 2) целенаправленная фармакологическая блокада активированных путей, основанная на исследовании нижестоящие эффекторы. Долгосрочная цель состоит в том, чтобы изменить парадигму лечения от одного неэффективного деструктивного метода к целевому лазерному источнику в сочетании с таргетной местной терапией.

Цель 1: Соотнести генотип с клиническим фенотипом

• 1.1 Соотнесите генотип с полным фенотипированием доступных участников в стратах A и B. При стратификации по возрасту участников гипотеза состоит в том, что генотип будет влиять на размер сосудов, при этом большая активация клеточного цикла связана с большим средним диаметром и глубиной сосудов на ОКТ.
• 1.2. Соотнесите клинический фенотип с данными динамической оптической когерентной томографии (ОКТ) в слоях А и В. Исследователи предполагают, что возраст участников будет самым важным предиктором медианного размера и глубины сосудов на ОКТ. Исследователи ожидают увидеть разнообразие в архитектуре и структуре сосудистой сети в зависимости от генотипа. Гипотеза заключается в том, что пациенты с мутацией GNAQ будут демонстрировать значительные сосудистые искажения с выпадением и расширением сосудов, как сообщалось в литературе по ОКТ для глаз у пациентов с синдромом Стерджа-Вебера.
• 1.3 Соберите как количественные, так и качественные результаты у участников, получавших ОКТ, чтобы оценить опыт участников, использующих этот адъювантный метод лечения в слое B.
• 1.4 Интегрировать данные ОКТ для создания целевого лазерного алгоритма по возрасту и/или генотипу для оптимизации фотокоагуляции мутировавших клеток в слое B.

Цель 2: Определить молекулярный механизм сосудистых пятен на лице для разработки методов лечения, специфичных для данного пути.

• 2.1 У 12–15 участников с подтвержденными мутациями GNAQ/GNA11 в слоях A, B или C выполните биопсию пораженной и нормальной ткани, соберите образцы крови и слюны, чтобы облегчить объективный пространственный транскриптомный анализ с использованием системы Visium 10x.
• 2.2 Идентифицировать новые нижестоящие специфические генотипические мишени с помощью беспристрастного пространственного транскриптомного анализа с целевой оценкой 3 путей, для которых в настоящее время разрабатываются топические ингибиторы (PiK3CA, mTOR и MEK/ERK).

Цель 3: оценить результаты лазерного лечения СПВ (уровни B и C)

• 3.1 Количественное улучшение PWS у участников, стратифицированное по возрасту начала лазерного лечения, параметрам лазерного лечения и глубокому клиническому фенотипу (анатомическая локализация, морфология, ОКТ и генотип). Намерение этой цели состоит в том, чтобы определить, приводит ли более раннее начало лазерной терапии (до 1 года) к улучшению результатов, и различается ли чувствительность к лазеру в зависимости от анатомического расположения, морфологии/цвета или генотипа. Гипотеза состоит в том, что более раннее лечение (начиная до 2-летнего возраста) приведет к улучшению клиренса, который будет более длительным, чем у тех, кто начал лазерную эпиляцию после 2-летнего возраста. В небольшой подгруппе пациентов с доступным генотипированием исследователи изучат реакцию заболевания на лазер на основе генотипа и местоположения. Гипотеза состоит в том, что СПВ, связанные с PiK3CA, будут реагировать лучше, чем другие генотипы (GNAQ, GNA11, RASA1, EPHB4), и что СПВ на боковой поверхности лица и в средней части лба будут наиболее чувствительными анатомическими участками.
• 3.2 Изучить значимые исходы, о которых сообщают пациенты и/или родители, у субъектов, прошедших лазерное лечение. Исследователи разделят лазерных респондеров по сравнению с нереспондерами. Гипотеза состоит в том, что у ответивших на лечение улучшится качество жизни. Наконец, исследователи проспективно оценят сообщаемые пациентами результаты лазерного лечения, включая удовлетворенность пациентов, рецидивы и процедурную боль (по сообщениям пациента и/или родителя у детей младше 7 лет). Исследователи предполагают высокую частоту рецидивов и дискомфорт у пациентов.

Дизайн исследования:

После получения информированного согласия дерматолог-исследователь проведет визуальный осмотр кожи, чтобы задокументировать кожные проявления, и для этого исследования будут сделаны фотографии пораженных участков. Фотографии будут использованы для определения корреляций генотип-фенотип и будут переданы в координационный центр.

Фотографии будут храниться в электронном виде в соответствии с требованиями HIPAA в соответствии с политикой каждого сайта.

Во время регистрации или при последующем посещении, но только один раз во время участия в исследовании, субъекты могут согласиться предоставить любой из следующих не необходимых с медицинской точки зрения образцов для генетических исследований: образец крови, образец слюны, пробойная биопсия кожи (нормальная кожа или пораженной кожи), хирургические образцы тканей, залитые в парафин образцы тканей (от предыдущих операций). Сбор любого из этих образцов является необязательным.

Во время регистрации участники будут помещены в страту A - однократные измерения ОКТ или страту B - серийные измерения ОКТ, которые проводятся в сочетании со стандартным лазерным лечением, или страту C - серийную оценку со стандартным лазерным лечением без использования. ОКТ.

Участники, которые перейдут на уровень A, будут иметь однократные измерения ОКТ окрашивания сосудов, если они решат не/не имеют права/не проходили ранее стандартную лазерную терапию окрашивания сосудов на момент зачисления. Показанием для слоя А является то, что некоторые пациенты предпочтут не проходить лазерное лечение, особенно если они ранее подвергались интенсивному лечению лазером или имеют светло-розовое сосудистое пятно, которое было стабильным. Участникам, которые перейдут на Strata C, будет назначено лечение с помощью лазера в качестве стандартного лечения и последующее наблюдение без использования серийной ОКТ.

Участникам, которые перейдут на Strata B, будут проведены серийные ОКТ-измерения окрашивания их сосудов до начала стандартного лазерного лечения. ОКТ будет проводиться перед каждой стандартной лазерной терапией, если участник выбрал стандартную лазерную терапию в качестве лечения своего сосудистого пятна во время регистрации.

Участники, зачисленные в страту A и прошедшие однократное измерение ОКТ, могут перейти на страту B, если позднее они решат пройти стандартную лазерную терапию своего сосудистого пятна. Эти участники по-прежнему смогут участвовать в вышеуказанных коллекциях образцов только один раз за время своего участия. Переход из страты A в страту B не считается вторым зачислением.

Все участники останутся в исследовании, пока исследование не будет закрыто. Участники смогут собирать образцы при любом посещении во время учебы.

Клиническое фенотипирование участников будет дополнено за счет использования динамической ОКТ для характеристики среднего диаметра и глубины кровеносных сосудов. ОКТ — это неинвазивная кожно-специфическая технология, которая позволяет быстро определить диаметр, плотность и глубину кровеносных сосудов в сканируемой области. Это похоже на размещение ультразвукового датчика на коже участника. Зонд имеет размер 6 x 6 мм и в течение 60 секунд после размещения обеспечивает наиболее распространенный (режимный) обнаруженный диаметр кровеносного сосуда, а также глубину сосудистого сплетения. ОКТ должна быть безболезненной и представлять минимальный риск для участника.

Для участников уровня B ОКТ будет проводиться на исходном уровне и перед каждым стандартным лазерным лечением. Анатомические ориентиры для выбора места размещения ОКТ будут определены врачом-исследователем с целью визуализации наиболее заметной области пятна. У части участников измерения ОКТ также будут проводиться после стандартного лазерного лечения. Анатомические ориентиры для выбора в этой подгруппе определяются врачом-исследователем; самая светлая область пятна также будет визуализирована, чтобы контрастировать различия между диаметрами сосудов, поскольку это повлияет на выбор оптимальных настроек лазера в разных областях пятна. Количество областей, в которых будет выполняться ОКТ над окрашиванием сосудов, будет определяться лечащим врачом в зависимости от размера пятна сосудов. Измененные настройки лазера, используемые для стандартного лазерного лечения, будут основываться на использовании теории селективного фототермолиза для определения оптимальной длительности импульса лазера на основе измерения ОКТ. Это будет соответствовать приемлемым стандартам ухода и в конечном итоге останется на усмотрение лазерного хирурга. Врач-исследователь также будет стремиться измерять одни и те же области перед каждым посещением, ожидая, что размер пятна, вероятно, будет варьироваться в зависимости от разрешения лечения сосудистого пятна.

Для участников уровня B анкета будет заполнена до 5 раз участником и/или родителем/опекуном участников в возрасте от 0 до 17 лет во время обучения. В анкете будет задан вопрос о том, как участники и/или их родители/опекуны относятся к результатам лазерного лечения и как они относятся к использованию ОКТ в дополнение к их стандартному лечению.

Для участников Strata C (которые проходят лазерную терапию в рамках стандартного лечения без ОКТ) исследовательская группа попросит родителя/и/или субъекта заполнить результаты, о которых сообщают пациенты, во время исследования. Целью этих опросников является получение значимых результатов лечения пациентов с помощью проверенных показателей PROMIS, связанных с эффективностью лазера для их пятен от портвейна.

Во время регистрации участника на Strata C и/или после первого лазера участника родители/опекуны заполняют анкету удовлетворенности родителей. Исследователи выполнят последующую лазерную оценку и визуальную аналоговую шкалу во время визитов участников, чтобы количественно оценить улучшение пятна портвейна по сравнению с исходным уровнем. Каждые 6 месяцев пациент или родитель/опекун заполняют форму лазерной оценки пациента/семьи.