Implementação de um protocolo para a transdiferenciação do epitélio da mucosa bucal em epitélio da córnea (TransBuCor)

1. Relembre a anatomia e histologia da córnea

   A córnea é um componente ocular essencial para a visão: muitas vezes referida como a primeira “vigia transparente” na parte frontal do olho. É a primeira estrutura que a luz encontra ao entrar no olho. Sua função principal é convergir os raios de luz incidentes, que então seguem em direção ao cristalino antes de atingir a retina e iniciar a cascata visual.

   A córnea é um tecido avascular e transparente composto por cinco camadas: epitélio corneano, camada de Bowman, estroma corneano, membrana de Descemet e endotélio corneano.

   • O epitélio da córnea é a camada mais externa da córnea, consistindo de células epiteliais da córnea, representando cerca de 10% de toda a córnea. Essa camada se regenera constantemente, com renovação completa ocorrendo a cada sete dias. Arranhões nesta camada geralmente cicatrizam bem.
   • A camada de Bowman ajuda a unir o epitélio da córnea e o estroma. Esta camada não pode se regenerar depois de danificada, podendo levar a cicatrizes permanentes que podem afetar a visão.
   • O estroma corneano representa cerca de 90% da córnea e é composto por colágeno e ceratócitos.
   • A membrana de Descemet é composta de colágeno e separa o estroma corneano do endotélio. Esta camada engrossa gradualmente com a idade.
   • O endotélio da córnea é a camada mais interna e auxilia no transporte de fluido de outras camadas da córnea. Danos a esta camada podem comprometer este processo e impactar negativamente a visão de uma pessoa.

2. Processo de renovação e cura do epitélio da córnea

   As células epiteliais da córnea regeneram-se dentro de 3 a 10 dias através da renovação constante das células-tronco do limbo localizadas no limbo (zona de transição entre a córnea e a esclera) na camada de células basais, dentro de criptas pigmentadas chamadas paliçadas de Vogt.

   A deficiência de células-tronco límbicas (LSCD) é caracterizada por uma perda ou comprometimento de células-tronco límbicas cruciais para o repovoamento epitelial da córnea e a função da barreira límbica.

   As etiologias da LSCD podem ser genéticas (PAX6), secundárias à inflamação crônica (por exemplo, ceratoconjuntivite alérgica grave ou rosácea ocular), adquiridas através de infecção, como ceratite herpética, ou secundárias a uma doença bolhosa, como síndrome de Steven-Johnson ou síndrome de Lyell. A LSCD também pode ser adquirida através de trauma causado por queimaduras químicas ou térmicas. As etiologias também podem ser idiopáticas.

   Quando estas células estaminais são perdidas, o epitélio da córnea é incapaz de reparar e renovar-se. Isto leva à degradação epitelial, defeitos epiteliais persistentes, conjuntivalização, neovascularização da córnea, cicatrizes da córnea e inflamação crônica. Esses fatores contribuem para fotofobia, perda de clareza da córnea, perda de visão e dor crônica. Isso impossibilita o transplante de córnea, pois seria rejeitado e/ou apresentaria má cicatrização.

   As soluções atuais para abordar esta causa de cegueira da córnea são limitadas. As técnicas incluem enxertos límbicos autólogos do olho contralateral do paciente, mas isso pode representar risco e não é possível quando a patologia é bilateral. Os enxertos alogênicos apresentam alto risco de rejeição e requerem tratamento imunossupressor sistêmico.

3. Enxertos de membrana mucosa na reconstrução periorbital

A enxertia de mucosa oral é uma técnica cirúrgica bem estabelecida para o tratamento de deficiências e cicatrizes conjuntivais. A mucosa oral possui propriedades biológicas semelhantes às da conjuntiva, sendo ambas compostas por uma ou mais camadas de células epiteliais cobrindo uma camada de tecido conjuntivo frouxo. Pode ser colhido repetidamente, sendo o local doador facilmente acessível e amplamente disponível. A morbidade da área doadora é baixa e a cirurgia geralmente é bem tolerada pelos pacientes. Além disso, a técnica cirúrgica é relativamente simples, tornando a mucosa oral uma candidata ideal para substituir anomalias conjuntivais.

Enxertos de mucosa oral têm sido utilizados não apenas no tratamento de cavidades contraídas em pacientes anoftálmicos e na reconstrução da superfície ocular e do fórnice em pacientes após ressecção tumoral, mas também no tratamento de pterígio refrativo e em pacientes com penfigoide ou simbléfaro ocular. É também o tecido mais comumente utilizado no tratamento de complicações pós-cirúrgicas, incluindo deficiências conjuntivais após glaucoma, cirurgia de retina, fusão da córnea relacionada à ceratoprótese e cobertura do trato da dacriocistorrinostomia. Além disso, a mucosa oral tem sido usada para reparar derretimentos esclerocorneais intratáveis ​​causados ​​por queimaduras químicas graves.

Algumas equipes propuseram o uso de células da mucosa bucal e sua transdiferenciação em células-tronco límbicas. A cavidade oral é facilmente acessível e as células-tronco podem ser isoladas da mucosa de forma minimamente invasiva e de baixo risco para o paciente. Essas células possuem alto potencial de diferenciação e expressam marcadores de células-tronco embrionárias; Tra2-49, Tra2-54, SSEA4, Oct4, Sox2 e Nanog, bem como o marcador da crista neural Nestin. No entanto, os testes em humanos ainda estão em fase preliminar e nenhuma terapia foi validada até o momento.

Neste estudo de prova de conceito, o objetivo é desenvolver um protocolo para diferenciar células da mucosa oral em células-tronco límbicas para uso em um futuro ensaio clínico com pacientes.