Implementación de un protocolo para la transdiferenciación del epitelio de la mucosa bucal al epitelio corneal (TransBuCor)

1. Recordatorio sobre anatomía e histología corneal

   La córnea es un componente ocular esencial para la visión: a menudo se la denomina la primera "ojo de buey transparente" en la parte frontal del ojo. Es la primera estructura que encuentra la luz al entrar en el ojo. Su función principal es hacer converger los rayos de luz incidentes, que luego avanzan hacia el cristalino antes de llegar a la retina e iniciar la cascada visual.

   La córnea es un tejido avascular y transparente compuesto por cinco capas: epitelio corneal, capa de Bowman, estroma corneal, membrana de Descemet y endotelio corneal.

   • El epitelio corneal es la capa más externa de la córnea y está formada por células epiteliales corneales que representan aproximadamente el 10% de toda la córnea. Esta capa se regenera constantemente, produciéndose una renovación completa cada siete días. Los rayones en esta capa generalmente sanan bien.
   • La capa de Bowman ayuda a unir el epitelio corneal y el estroma. Esta capa no puede regenerarse una vez dañada, lo que puede provocar cicatrices permanentes que pueden afectar la visión.
   • El estroma corneal representa aproximadamente el 90% de la córnea y está compuesto por colágeno y queratocitos.
   • La membrana de Descemet está formada por colágeno y separa el estroma corneal del endotelio. Esta capa se espesa gradualmente con la edad.
   • El endotelio corneal es la capa más interna y ayuda a transportar líquido desde otras capas corneales. El daño a esta capa puede comprometer este proceso e impactar negativamente la visión de una persona.

2. Proceso de renovación y curación del epitelio corneal.

   Las células epiteliales corneales se regeneran en un plazo de 3 a 10 días mediante la renovación constante a partir de células madre limbales ubicadas en el limbo (zona de transición entre la córnea y la esclerótica) en la capa de células basales, dentro de criptas pigmentadas llamadas empalizadas de Vogt.

   La deficiencia de células madre limbales (LSCD) se caracteriza por una pérdida o deterioro de células madre limbales cruciales para la repoblación epitelial corneal y la función de barrera limbal.

   Las etiologías de la LSCD pueden ser genéticas (PAX6), secundarias a inflamación crónica (p. ej., queratoconjuntivitis alérgica grave o rosácea ocular), adquiridas a través de una infección como la queratitis herpética o secundarias a una enfermedad ampollosa como el síndrome de Steven-Johnson o el síndrome de Lyell. El LSCD también se puede adquirir a través de un traumatismo por quemaduras químicas o térmicas. Las etiologías también pueden ser idiopáticas.

   Cuando estas células madre se pierden, el epitelio corneal no puede repararse ni renovarse. Esto conduce a degradación epitelial, defectos epiteliales persistentes, conjuntivalización, neovascularización corneal, cicatrices corneales e inflamación crónica. Estos factores contribuyen a la fotofobia, la pérdida de claridad corneal, la pérdida de visión y el dolor crónico. Esto hace que el trasplante de córnea sea imposible ya que sería rechazado y/o presentaría una mala curación.

   Las soluciones actuales para abordar esta causa de ceguera corneal son limitadas. Las técnicas incluyen injertos limbales autólogos del ojo contralateral del paciente, pero esto puede suponer un riesgo y no es posible cuando la patología es bilateral. Los injertos alogénicos tienen un alto riesgo de rechazo y requieren tratamiento inmunosupresor sistémico.

3. Injertos de membrana mucosa en la reconstrucción periorbitaria

El injerto de mucosa oral es una técnica quirúrgica bien establecida para tratar deficiencias y cicatrices conjuntivales. La mucosa oral posee propiedades biológicas similares a las de la conjuntiva, estando ambas compuestas por una o más capas de células epiteliales que cubren una capa de tejido conectivo laxo. Se puede recolectar repetidamente, con el sitio donante fácilmente accesible y ampliamente disponible. La morbilidad del sitio donante es baja y los pacientes generalmente toleran bien la cirugía. Además, la técnica quirúrgica es relativamente sencilla, lo que convierte a la mucosa oral en una candidata ideal para sustituir las anomalías conjuntivales.

Los injertos de mucosa oral se han utilizado no sólo para tratar las cavidades contraídas en pacientes anoftálmicos y reconstruir la superficie ocular y el fondo de saco en pacientes después de la resección del tumor, sino también para tratar el pterigión refractivo y en pacientes con penfigoide o simbléfaron ocular. También es el tejido más utilizado en el tratamiento de complicaciones posquirúrgicas, incluidas deficiencias conjuntivales después del glaucoma, cirugía de retina, derretimientos corneales relacionados con queratoprótesis y para cubrir el tracto de dacriocistorrinostomía. Además, la mucosa oral se ha utilizado para reparar derretimientos esclerocorneales intratables causados ​​por quemaduras químicas graves.

Algunos equipos han propuesto utilizar células de la mucosa bucal y transdiferenciarlas en células madre del limbo. La cavidad bucal es de fácil acceso y las células madre pueden aislarse de la mucosa de forma mínimamente invasiva y de bajo riesgo para el paciente. Estas células tienen un alto potencial de diferenciación y expresan marcadores de células madre embrionarias; Tra2-49, Tra2-54, SSEA4, Oct4, Sox2 y Nanog, así como el marcador de la cresta neural Nestin. Sin embargo, los ensayos en humanos aún se encuentran en la etapa preliminar y hasta la fecha no se ha validado ninguna terapia.

En este estudio de prueba de concepto, el objetivo es desarrollar un protocolo para diferenciar células de la mucosa oral en células madre del limbo para su uso en un futuro ensayo clínico con pacientes.