Senescência Vascular e Vulnerabilidade da Placa Aterosclerótica (VICTORIA)

Antecedentes - O processo de envelhecimento cronológico contribui significativamente para alterações estruturais e funcionais na vasculatura, emergindo como um importante fator de risco para doença aterosclerótica e eventos trombóticos agudos [1,2]. Além disso, a deterioração vascular relacionada à idade pode ser influenciada por escolhas de estilo de vida, fatores ambientais e estímulos externos, resultando em um declínio gradual na integridade e funcionalidade vascular [3,4].

Para identificar potenciais alvos de intervenção terapêutica para retardar ou reverter as consequências deletérias do envelhecimento vascular, é crucial compreender melhor os mecanismos celulares e moleculares do envelhecimento vascular, bem como definir melhor como os fatores ambientais podem acelerar o processo [3 -5].

Nas últimas décadas, os danos no DNA - tanto teloméricos quanto não teloméricos, juntamente com deficiências mitocondriais - emergiram como um gatilho fundamental no envelhecimento vascular e no desenvolvimento da aterosclerose [4-11]. Uma riqueza de evidências apoia a presença de lesões oxidativas no DNA, desgaste dos telômeros e danos ao DNA mitocondrial em modelos experimentais e amostras de placas humanas [12-17], bem como nas células periféricas de indivíduos com aterosclerose [9,18-21 ].

Além disso, é cada vez mais evidente que a instabilidade genómica pode impactar diretamente a função celular vascular, desencadeando vias de sinalização que levam a uma infinidade de alterações fisiopatológicas. Estas alterações abrangem inflamação, apoptose, autofagia e, em última análise, senescência celular, que é marcada pela secreção do "fenótipo secretor associado à senescência" (SASP). [4-11]. A robusta associação mecanicista entre danos no DNA e envelhecimento celular destaca os danos no DNA como o principal candidato para a principal causa do envelhecimento [22]. Visar os danos no DNA e seus correlatos mecanísticos pode fornecer uma base lógica para o desenvolvimento de intervenções unificadas destinadas a mitigar disfunções e doenças relacionadas à idade [22].

No entanto, os mecanismos precisos que ligam os danos no ADN à SASP nas células vasculares, bem como o seu papel na patogénese da aterosclerose e do ateroma vulnerável, permanecem indefinidos.

Evidências recentes ressaltam a interferência mútua entre a disfunção dos telômeros e o dismetabolismo mitocondrial no processo de senescência celular [23-26], enfatizando a necessidade de elucidar ainda mais essa conexão complexa e intrincada, que pode abrir novas estratégias terapêuticas potenciais para doenças relacionadas à idade [27] .

Mais estudos são necessários para compreender os mecanismos subjacentes pelos quais a disfunção mitocondrial influencia o comprimento dos telômeros e vice-versa, e como sua interação contribui para o processo de envelhecimento vascular [26].

Nossa hipótese é que mecanismos moleculares complexos que ligam a disfunção dos telômeros, danos ao mtDNA e desregulação do RNA não codificante estão envolvidos no processo de envelhecimento vascular, promovendo o desenvolvimento e progressão da aterosclerose. Consequentemente, marcadores de envelhecimento periférico de dano genético e RNA não codificante podem ser úteis para caracterizar o desenvolvimento de uma placa vulnerável em vasos culpados e para melhorar o prognóstico dos pacientes.

Objetivos - Os objetivos específicos da presente proposta são: 1) investigar a associação entre marcadores periféricos de envelhecimento celular [comprimento dos telômeros (LTL) e conteúdo de DNA mitocondrial (mtDNAcn)] e desregulação de RNA não codificante (lncRNA TERRA, MitomiR) em os diferentes espectros de angina de peito (angina estável, instável, NSTEMI e STEMI) e 2) avaliar sua associação com eventos cardiovasculares adversos maiores (MACE) dentro de 12 meses após a inscrição.

Pacientes com choque cardíaco, insuficiência cardíaca congestiva, doença renal em estágio terminal e enxerto de revascularização do miocárdio serão excluídos. Uma avaliação precisa da morfologia da placa será adquirida para pacientes que serão examinados para exame de tomografia de coerência óptica (OCT) ou ultrassom intravascular (IVUS) da artéria culpada.

Desenho do estudo - Estudo observacional prospectivo, de centro único, não randomizado. Coleta de amostras e dados - Uma amostra de sangue periférico (aproximadamente 10 mL) será coletada de cada paciente antes de ser submetido a procedimentos de angiografia diagnóstica ou terapêutica e utilizada para extração de DNA e/ou RNA. Será estabelecido um biobanco de outras amostras biológicas (sangue total, plasma, soro, coágulo, PBMCs). Aproximadamente 12 meses após a inscrição, será realizado acompanhamento clínico de todos os pacientes inscritos no estudo por meio de consulta médica de rotina ou entrevista telefônica para avaliação de eventos cardiovasculares adversos (MACE - óbito, infarto do miocárdio ou necessidade de revascularizações subsequentes).

Determinação de biomarcadores - LTL e mtDNAcn são medidos após extração de DNA de leucócitos sanguíneos, enquanto lnc-RNA TERRA e mitomiR, após extração de RNA de leucócitos sanguíneos, e analisados ​​usando técnicas de PCR em tempo real.

Tamanho da amostra - Para detectar um tamanho de efeito médio (f = 0,25) na diferença do valor médio de LTL entre os grupos, estimamos que seja necessário um tamanho de amostra de pelo menos 232 pacientes no total, com nível alfa de 0,05 e poder de 90% ou superior. Considerando uma taxa de abandono de 10%, o número total de pacientes a serem inscritos deve ser de pelo menos 260.

Análise estatística - A distribuição normal dos dados será testada através do teste de Kolmogorov-Smirnov.

As variáveis ​​contínuas serão apresentadas como média, desvio padrão, mediana, primeiro e terceiro quartil. Variáveis ​​categóricas serão expressas como números e porcentagens.

As comparações entre dois grupos serão realizadas utilizando o teste t de Student para amostras independentes para variáveis ​​contínuas, e o teste do qui-quadrado ou teste exato de Fisher para as categóricas. As comparações entre mais de dois grupos serão testadas com a análise de variância unidirecional (ANOVA) seguida por testes post-hoc de Bonferroni para comparações de 2 grupos. Caso a suposição de normalidade da distribuição dos dados não seja satisfeita, serão utilizados os testes não paramétricos equivalentes. Será calculado o coeficiente de Pearson ou Spearman para investigar a correlação entre as variáveis ​​de forma univariada. Curvas de sobrevivência livre de eventos serão construídas utilizando o modelo de Kaplan-Meier e testadas com o teste log-rank entre diferentes grupos. O modelo univariado e multivariado de riscos proporcionais de Cox será usado para identificar o valor preditivo de cada variável em relação ao evento MACE; os dados serão expressos com HR e seu intervalo de confiança de 95%.

Referências

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