Avaliação dos níveis de biomarcadores salivares em indivíduos com diferentes condições periodontais

O objetivo deste estudo clínico é examinar comparativamente os níveis de IL-6, IL-8 e proteína LIGHT em amostras de saliva obtidas de indivíduos periodontalmente saudáveis ​​com gengivite e periodontite que se apresentaram em nossa clínica para controles periodontais de rotina. Em linha com os resultados obtidos; está planejado determinar o potencial desses mediadores bioquímicos para serem utilizados como marcador diagnóstico no diagnóstico de doença periodontal.

A periodontite é uma doença multifatorial que envolve 10-15% da população adulta mundial, desenvolvendo-se devido à placa dentária microbiana e caracterizada pela perda de inserção clínica e destruição do tecido conjuntivo e do osso alveolar. Se não for tratada, faz com que a inflamação penetre nos tecidos mais profundos e altere a homeostase óssea, levando à perda dentária.

A gengivite é uma inflamação da gengiva que não causa destruição nos tecidos circundantes ao dente e é caracterizada por edema nas gengivas e sangramento em mais de 10% de todas as áreas da boca. De acordo com a Classificação de Doenças Periodontais de 2017, a gengivite é dividida em duas: gengivite relacionada à placa dentária e gengivite não relacionada à placa dentária. A gengivite costuma ser indolor e raramente é observado sangramento espontâneo e, por esses motivos, os indivíduos podem reconhecer a doença tardiamente. Portanto, o diagnóstico precoce da gengivite é importante para prevenir a transformação da gengivite em periodontite caracterizada pela destruição óssea progressiva e destruição do tecido conjuntivo.

Estudos demonstraram que existem mais de 700 bactérias com capacidade de colonizar a cavidade oral humana, mas uma média de 200 a 300 espécies bacterianas na boca de um indivíduo. Dentre essas bactérias, encontram-se bactérias associadas à saúde gengival, como Porphyromonas gingivalis (Pg), Tannerella forsythensis (Tf) e Treponema denticola (Td), que são chamadas de bactérias do complexo vermelho; As subespécies Fusobacterium nucleatum (Fn), Prevotella intermedia (Pi) e Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), que não pertencem a nenhum grupo, têm sido associadas à destruição ativa de tecidos e à progressão da doença periodontal.

De acordo com a hipótese chave da placa, que é uma das hipóteses de placa atualmente aceitas, a capacidade de bactérias altamente patogênicas, especialmente P. Gingivalis e Aggregatibacter Actinomycetemcomitans, de gerar resposta imune do hospedeiro e causar destruição tecidual, apesar de sua baixa concentração de placa, tem sido enfatizou. Foi demonstrado que as bactérias patogênicas afetam a resposta imune do hospedeiro, em vez da destruição direta do osso inflamatório e do tecido conjuntivo. Um dos pontos importantes na patogênese da doença periodontal são as citocinas, um membro do sistema imunológico adquirido. Estudos demonstraram que a quantidade de citocinas pró-inflamatórias, como interleucina-6 (IL-6), IL-8, interleucina-1 (IL-1) fator de necrose tumoral-α (TNF-α) aumenta no plasma sanguíneo, saliva e gengival fluido de sulco.

A proteína LIGHT (TNFSF-14), um membro da superfamília do fator de necrose tumoral (TNFSF), é secretada principalmente por células T e células dendríticas imaturas, mas também é secretada por células com funções imunológicas, como monócitos, granulócitos, esplenócitos e baço. células. LIGHT pode ligar HVEM e três receptores de sinalização TNFSF ligados à membrana, nomeadamente receptor beta de linfotoxina (LTβR) e DcR3. Foi demonstrado que a ligação de LIGHT-LTβR induz a apoptose. Enquanto o HVEM é expresso em células endoteliais, dendríticas, natural killer, T e B, o LTβR é expresso em fibroblastos, monócitos, células endoteliais, epiteliais e estromais. A interação da proteína LIGHT com HVEM ou LTβR resulta na ativação do Fator Nuclear-kappaB e, finalmente, na produção de citocinas. Também foi demonstrado que a proteína LIGHT pode coestimular a resposta celular T via HVEM, incluindo células T CD4+ e CD8+.

A artrite reumatóide é uma doença inflamatória crônica e destrutiva. Citocinas pró-inflamatórias como IL-1, TNF-a, metaloproteinase de matriz (MMP-8, MMP-9) estão aumentadas na artrite reumatóide, bem como na periodontite. Por estas razões, existem semelhanças entre a imunopatogênese da periodontite e da artrite reumatóide. Num estudo realizado em pacientes com artrite reumatóide, a proteína LIGHT demonstrou ser um importante biomarcador pró-inflamatório correlacionado positivamente com a destruição óssea e com um aumento estatisticamente significativo da destruição óssea. Em outro estudo realizado em pacientes com artrite reumatóide, foram avaliados os níveis séricos da proteína LIGHT e foi demonstrado que o aumento dos níveis de LIGHT aumentou a osteoclastogênese dependente de RANKL e aumentou a formação de osteoclastos independentemente do RANKL. Outra conclusão deste estudo é que a proteína LIGHT pode desempenhar um papel em condições imunopatogênicas associadas à perda óssea local e sistêmica.

Em outro estudo realizado em pacientes com artrite reumatóide, LIGHT aumentou a resposta inflamatória nas células fibroblásticas sinoviais e foi sugerido como um novo alvo de terapia anticitocina para o tratamento da artrite reumatóide.

Num estudo realizado em pacientes com doença óssea de mieloma múltiplo, LIGHT demonstrou aumentar a osteoclastogénese; inibir proteínas osteoblásticas osteocalcina, sialoproteína óssea e formação de osterix; e inibir a osteoblastogênese da esclerostina dos monócitos.

Em um estudo de Fan et al. , foi investigado se a proteína LIGHT é um potencial biomarcador inflamatório. Em 566 pacientes, a proteína LIGHT demonstrou aumentar 16 vezes no soro sanguíneo na presença de pneumonia, uma doença inflamatória.

O diabetes mellitus tipo 2 é caracterizado pela desregulação do metabolismo de carboidratos, lipídios e proteínas e é causado pela secreção prejudicada de insulina pelas células das ilhotas pancreáticas, resistência à insulina ou uma combinação de ambos. Estudos demonstraram que a periodontite é a 6ª complicação do diabetes mellitus e foi comprovada uma correlação positiva bidirecional. Em estudo realizado em pacientes com diabetes mellitus tipo 2, foi demonstrado que a proteína LIGHT apresentou disfunção nas células das ilhotas pancreáticas, aumento da secreção de citocinas inflamatórias e aumento da formação de resposta inflamatória nas células endoteliais.

Num estudo realizado em pacientes com doença óssea de mieloma múltiplo, LIGHT demonstrou aumentar a osteoclastogénese; inibir a formação de proteínas osteoblásticas osteocalcina, sialoproteína óssea e osterix; e inibir a osteoblastogênese da esclerostina de monócitos investigados se a proteína LIGHT é um potencial biomarcador inflamatório. Em 566 pacientes, foi demonstrado que a proteína LIGHT aumentou 16 vezes no soro sanguíneo na presença de pneumonia, uma doença inflamatória.

O diabetes mellitus tipo 2 é caracterizado pela desregulação do metabolismo de carboidratos, lipídios e proteínas e é causado pela secreção prejudicada de insulina pelas células das ilhotas pancreáticas, resistência à insulina ou uma combinação de ambos. Estudos demonstraram que a periodontite é a 6ª complicação do diabetes mellitus e foi comprovada uma correlação positiva bidirecional. Num estudo realizado em pacientes com diabetes mellitus tipo 2, a proteína LIGHT demonstrou apresentar disfunção nas células das ilhotas pancreáticas, aumento da secreção de citocinas inflamatórias e aumento da resposta inflamatória nas células endoteliais.

O ponto de partida do nosso estudo foi um estudo publicado em 2024 que examinou citocinas pró-inflamatórias no fluido do sulco gengival após cirurgia periodontal e teve como objetivo encontrar um potencial novo biomarcador. De acordo com este estudo, foi demonstrado que LIGHT estimula a formação de citocinas pró-inflamatórias IL-6 e IL-8 e MMP-9 em fibroblastos gengivais humanos e está associado ao aumento da formação de profundidade de sondagem da bolsa periodontal 12 meses após a cirurgia. Foi sugerido que a proteína LIGHT causa destruição tecidual nas células fibroblásticas gengivais humanas, causa perda de tecido mole e ósseo e contribui para o desenvolvimento da periodontite. Neste estudo, enfatizou-se que mais estudos são necessários para avaliar a relação entre LIGHT e periodontite.

A interleucina-6 é uma citocina multifuncional definida como um fator de diferenciação de células B envolvido na maturação de células produtoras de anticorpos. IL-6 é uma proteína de cadeia única produzida por células T, células B, monócitos, fibroblastos e alguns outros tipos de células. A IL-6 pode transmitir sinais às células de duas maneiras: sinalização convencional dependente do receptor e sinalização trans associada ao receptor solúvel de IL-6. Um dos efeitos sistêmicos mais importantes da IL-6 é a indução de uma resposta de fase aguda. Esta resposta de fase aguda é a indução da produção de citocinas pró-inflamatórias e a estimulação da quimiotaxia dos neutrófilos. Também aumenta os níveis de proteína C reativa (PCR), a proteína de fase aguda mais comum em humanos. Ele também possui propriedades como aumentar a ativação e diferenciação de células T e aumentar a diferenciação de macrófagos.

A IL-6 também aumenta a proliferação de células endoteliais, levando à secreção de IL-8 e de proteínas quimioatrativas de monócitos. Como resultado desses processos, faz com que os leucócitos cheguem ao local da inflamação. Também aumenta a secreção de enzimas pró-inflamatórias MMP juntamente com a interleucina-1.

Em um estudo, foi examinado o efeito do tratamento inicial não cirúrgico nos níveis de IL-6 em pacientes saudáveis ​​e com periodontite. De acordo com os resultados deste estudo, os níveis basais de IL-6 no fluido do sulco gengival foram significativamente mais elevados em pacientes com periodontite do que em pacientes saudáveis. Após o tratamento periodontal não cirúrgico, foi observada uma diminuição estatisticamente significativa nos níveis de IL-6. Este estudo sugere que a IL-6 pode ser um biomarcador que pode ser utilizado no diagnóstico de periodontite.

Num estudo realizado em ratos, foi demonstrado que a inibição da secreção de IL-6 no contexto de periodontite experimental interrompeu a atividade pró-inflamatória induzida pela IL-6 e reduziu a reabsorção óssea alveolar e diminuiu a produção de RANKL.

Em um estudo transversal, foram analisados ​​os níveis de IL-6 e IL-8 na saliva e no fluido do sulco gengival obtidos de indivíduos saudáveis ​​e com periodontite. Nos resultados, os níveis de IL-6 e IL-8 foram mais elevados tanto na saliva quanto no fluido do sulco gengival em pacientes com periodontite do que em pacientes saudáveis.

A IL-8 é uma quimiocina pró-inflamatória e sua expressão é regulada principalmente pela proteína ativadora e pela atividade transcricional mediada pelo fator nuclear kappa β . Foi demonstrado que a expressão de IL-8 é regulada por estímulos como TNF-α, IL-1β, hormônios esteróides, incluindo sinais inflamatórios. A IL-8 foi caracterizada com base na sua atividade quimiotática e na sua capacidade de causar desgranulação de neutrófilos humanos. In vitro, tem dois efeitos principais: quimiotaxia e liberação de enzimas granulares. Atua como quimioatraente e ativador de neutrófilos para citocinas em locais inflamatórios e pode ser secretado por células endoteliais, fibroblastos gengivais, monócitos, neutrófilos e fagócitos. A secreção de IL-8 facilita a migração de neutrófilos do tecido gengival altamente vascularizado para o sulco gengival. IL-8 é a primeira citocina pró-inflamatória secretada pelas células epiteliais gengivais estimuladas por bactérias patogênicas como P. Gingivalis e T. Forsythia e pode persistir por até uma semana após a secreção.

Em um estudo de revisão de literatura, foi enfatizado que o número de níveis de IL-8 aumentou significativamente na presença de periodontite, mas mais estudos são necessários devido aos resultados diferentes em vários estudos. Em outro estudo de revisão de literatura, foi enfatizado que o nível sérico de IL-8 pode ser um potencial biomarcador na avaliação da periodontite, mas são necessários mais estudos.

De acordo com as informações acima, não há nenhum estudo na literatura avaliando os níveis de IL-6, IL-8 e LIGHT em amostras de saliva em termos de doença periodontal. Nosso estudo teve como objetivo investigar as alterações dessas citocinas na presença de doença periodontal, examinando comparativamente os níveis de IL-6, IL-8 e LIGHT em amostras de saliva obtidas de indivíduos saudáveis ​​com gengivite e periodontite, para mostrar seu potencial para uso no diagnóstico de doenças ou para fornecer informações preliminares para tratamentos futuros que possam ser realizados através dessas vias de citocinas.