Influência da matriz da fruta nas respostas de glicose e insulina após a ingestão de suco de laranja em homens saudáveis (ZULEMA)

Proposta de projeto: Papel da matriz do fruto na absorção de glicose do suco de laranja em humanos (ZULEMA)

Suposições básicas: O consumo excessivo de açúcares livres pode ter efeitos negativos para a saúde e o mau controle pós-prandial da glicose pode ser um marcador de risco de diabetes tipo 2 a longo prazo. Os açúcares impulsionam o índice glicêmico (IG) das bebidas, mas, contrariamente às expectativas, os sucos de frutas e as bebidas adoçadas com açúcar fornecem resultados de IG diferentes, apesar de muitas vezes terem o mesmo teor total de açúcar. Isto implica que os açúcares naturais e adicionados podem ter efeitos diferentes no controlo glicémico, ou que a combinação de açúcares na matriz do sumo está de alguma forma a melhorar o efeito dos açúcares no controlo glicémico.

Pergunta de pesquisa: Como a variação da matriz e da fonte de açúcares, mas não dos açúcares totais em sucos de frutas e bebidas, afeta o IG? Os pesquisadores presumem que os açúcares livres serão os impulsionadores do IG, mas pode não ser o caso.

Hipótese: Para a mesma quantidade de açúcares livres (sacarose, glicose e frutose) em sucos e bebidas, a matriz do suco de frutas (ou seja, fibras, carboidratos complexos, ácido cítrico, polifenóis e outros fitoquímicos, minerais, vitaminas), terão efeito modulador na absorção de glicose.

Objetivo: O objetivo principal deste estudo é avaliar o efeito da presença da matriz do suco no suco 100% de laranja contra sucos manipulados (para reduzir a porcentagem de matriz da fruta) nas respostas da glicemia pós-prandial em indivíduos saudáveis. O objetivo secundário será caracterizar o efeito na resposta à insulina.

Desenho experimental: As respostas da glicose também serão comparadas às da glicose sozinha (Índice Glicêmico, GI).

Métodos:

Preparação e logística de sucos. As bebidas de laranja serão produzidas e fornecidas pela AMC Natural Drinks (Murcia, Espanha). Um suco 100% de fruta (suco de laranja) será comparado com bebidas contendo 50% e 0% de suco, embora com a mesma composição qualitativa e quantitativa de açúcares totais (sacarose, frutose, glicose) do suco 100%.

Análises químicas:

Os pesquisadores irão caracterizar a composição dos açúcares e os principais componentes da matriz da fruta:

Análise química de fibras solúveis e insolúveis.

Análise de açúcares. Os sucos serão fabricados e a composição de açúcares (sacarose, glicose e frutose) medida e ajustada para garantir que o teor de açúcar não se altere durante o período de armazenamento. As análises serão realizadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC) utilizando detectores de Índice de Refração (IR) apropriados.

Análise fitoquímica. Fenólicos individuais e outros fitoquímicos característicos do suco de laranja. Flavanonas, polimetoxiflavonas, derivados do ácido hidroxicinâmico, flavonas, carotenóides, serão analisados ​​utilizando HPLC de fase reversa com detectores Ultraviolet-Diode Array (UV-DAD) e detectores Mass Spec (MS).

Ensaio clínico:

Este estudo é um ensaio de intervenção cruzado, randomizado, duplo-cego e dose-resposta. Todos os participantes repetirão o estudo em momentos separados (para obter resultados duplicados). O protocolo do estudo já foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade Católica.

Participantes, Critérios de Inclusão e Exclusão:

Os pesquisadores recrutarão adultos saudáveis ​​do sexo masculino com idades entre 18 e 45 anos por meio de anúncios classificados online, mídias sociais e boca a boca. As mulheres não são elegíveis porque o ciclo menstrual pode influenciar o controle glicêmico. Para atender aos critérios de inclusão, os participantes deverão ter Índice de Massa Corporal (IMC) entre 18,5 e 29,9 kg/m2, ser consumidores habituais de café da manhã e estar dispostos a consumir as bebidas do estudo. Serão excluídos os participantes que estejam de dieta ou tenham alergia alimentar ou aversão às bebidas do estudo. Além disso, os participantes serão excluídos se tiverem flutuações de peso significativas nos últimos 6 meses ou um diagnóstico prévio de diabetes, pré-diabetes, doença gastrointestinal, doença hepática, doença renal ou distúrbio metabólico.

Tamanho da amostra:

Os pesquisadores estimaram o tamanho da amostra para um estudo cruzado randomizado no qual os efeitos da intervenção (diferentes bebidas de laranja de teste) serão testados em uma amostra de população adulta saudável. Para tanto, os pesquisadores utilizaram o software gratuito disponível G*Power 3.1.9.7 assumindo um poder estatístico bicaudal de 90% (1-β=0,90), nível de significância estatística de 5% (α=0,05) e tamanho de efeito d=0,7. De acordo com isso, o número mínimo de participantes do estudo deveria ser N=24. Esses participantes também deverão participar da segunda rodada de testes (resultados duplicados). O número final de participantes foi aumentado para 30 para contabilizar possíveis desistências.

Consentimento de estudo:

Uma entrevista de triagem por telefone fornecerá os critérios iniciais de elegibilidade. Os participantes que passarem na triagem por telefone serão agendados para comparecer pessoalmente a uma sessão de informações e triagem final no laboratório para revisar os protocolos do estudo e obter consentimento informado por escrito. Os pesquisadores farão algumas medidas antropométricas e explicarão aos participantes a intervenção e procedimentos durante todo o estudo. Os participantes também preencherão uma série de questionários gerais validados sobre seus hábitos alimentares e de estilo de vida.

Desenho de Intervenção:

Os participantes elegíveis completarão quatro sessões de teste (+ duas repetições) com pelo menos 2-3 dias de intervalo. Em manhãs separadas, os participantes chegarão ao laboratório às 8h00 após jejum de 10 a 12h, exceto uma pequena quantidade de água que será permitida até 1h antes da chegada. No dia anterior a cada sessão de teste, os participantes preencherão um diário alimentar para verificar a adesão à dieta livre de polifenóis e frutas cítricas, protocolo de jejum e estimar a quantidade de nutrientes consumidos (principalmente carboidratos totais, açúcares livres , fibra e água).

Os participantes consumirão rapidamente (dentro de cinco minutos) uma das três bebidas: (1) suco de laranja 100%, (2) bebida de laranja com 50% de suco de laranja e 50% de água com adição de açúcares para corresponder ao conteúdo do suco 100% e (3) 100% de água com adição de açúcares para corresponder ao conteúdo do suco 100%. As porções padrão (cerca de 250 mL) serão calculadas com base no total de carboidratos disponíveis para atingir uma ingestão de 25 g de açúcares livres. Além disso, os participantes também consumirão uma solução de glicose (25 g) para estimar o IG. Todas as bebidas teste serão servidas frias em recipientes opacos com tampa. A resposta glicêmica será medida por picada no dedo no início do estudo (0 minutos) e 15, 30, 45, 60, 90 e 120 minutos após o consumo da bebida.

Após a conclusão do estudo, os participantes terão um descanso de 2 a 3 semanas e retornarão ao laboratório para uma segunda sessão de teste. O objetivo desta repetição é obter uma análise mais robusta dos resultados e avaliar a variabilidade intra e interindividual.

Resposta glicêmica pós-prandial:

Os pesquisadores coletarão amostras de glicose no sangue capilar das pontas dos dedos por meio de lancetas autodesativadas de uso único (lancetas Softclix, Roche) e medirão a glicose imediatamente por meio de um glicosímetro (Accu-Check Guide Me, Roche).

Medição de insulina:

Amostras adicionais de sangue serão coletadas da veia. Após centrifugação (1200-1500 ×g, 10 min, 4 ºC), as amostras de soro serão rapidamente congeladas e mantidas a -80 ºC até a análise dos níveis de insulina. A insulina será medida usando um sistema de teste ELISA (Accu Bind ELISA Microwells, Monobind Inc. CA, EUA).

Análises Estatísticas:

As análises estatísticas serão realizadas utilizando o SAS versão 9.4. Uma análise de variância de dois fatores de medidas repetidas (ANOVA), usando o procedimento PROC MIXED, será usada para determinar o efeito da intervenção (ou seja, bebida de teste) nos níveis de glicose no sangue. Para determinar o efeito do tratamento na área incremental de glicose no sangue sob a curva (iAUC), será usada uma ANOVA de medidas repetidas de um fator. Um valor de p <0,05 será considerado estatisticamente significativo.