邻苯二甲酸盐过敏原免疫反应研究 (PAIR)

1. 目的：

   研究邻苯二甲酸酯对气道免疫学、肺功能和鼻过敏反应的影响。

2. 假设：

   吸入邻苯二甲酸盐会增加免疫细胞向上呼吸道的募集，并影响免疫细胞和上皮细胞的功能。

   假设 2：吸入邻苯二甲酸盐会改变细胞对吸入过敏原挑战的反应。

3. 理由：

   邻苯二甲酸盐是增塑剂或软化剂，用于 PVC 和其他塑料以及一系列消费品。 由于邻苯二甲酸盐与塑料没有化学结合，它们会从这些产品中泄漏出来，导致人体通过空气、灰尘和食物经常接触到这些物质。 在流行病学研究中，暴露于邻苯二甲酸盐与呼吸道疾病的恶化或发展有关，但邻苯二甲酸盐对我们呼吸道和免疫反应的影响在很大程度上是未知的。 在这项研究中，我们想研究一种特殊的邻苯二甲酸酯邻苯二甲酸二丁酯 (DBP) 如何影响人体呼吸系统和免疫系统。 调查人员并不期望受试者会注意到这些反应；他们期望可能发生的任何反应只能通过仔细检查细胞和组织（例如 鼻腔灌洗和刷子（鼻液）、支气管样本、血液、尿液）。 鼻腔样本将用于测量鼻部炎症反应的细胞募集和炎症介质水平。 支气管样本将允许对肺部炎症反应进行精细检查，从而提供有关因过敏原挑战而引起的邻苯二甲酸盐引起的反应的更详细信息。 了解这些微妙的变化将有助于我们在未来预防与接触邻苯二甲酸盐相关的健康问题。

4. 目标：

   确定邻苯二甲酸盐会改变上呼吸道的细胞免疫反应。

5. 研究方法：

   这是两种条件（邻苯二甲酸二丁酯，DBP，或过滤空气，FA）之间的盲法交叉实验，随机和平衡顺序。

   每次接触 DBP 或 FA 后，我们都会进行吸入过敏原挑战。 每种情况的数据收集将以 2 周的清除期分开。

   为了评估暴露对免疫反应和肺功能的影响，研究人员将在暴露当天或第二天收集并执行以下操作：

   • 每次暴露前、暴露后 3 小时和 24 小时，我们将收集尿液和血液样本，进行 NAL，并通过肺量计和 FeNO 测量用力呼气容积 (FEV1)。
   • 暴露后 24 小时将进行乙酰甲胆碱激发。
   • 将在左鼻孔暴露前 3 小时和右鼻孔暴露后 3 小时进行鼻刷 (NAB)。
   • 一部分登记的受试者将在暴露后 24 小时进行支气管镜检查，其中将收集支气管肺泡样本和支气管内活组织检查。

   关于某些分析终点，文献提供了邻苯二甲酸盐相互矛盾的数据。 因此，为了便于选择主要研究的终点，以及验证某些研究程序，将在主要研究开始之前执行“方法优化子研究”。 该子研究将招募最多 25 名健康受试者，他们将签署一份修改后的同意书，以反映他们的有限参与。 这些受试者不会暴露于 DBP 或 CA，但只会被招募用于收集血液、洗鼻和刷鼻，或这些样本的一个子集。 他们将只参加一次温哥华综合医院的访问，在参与子研究时投入 1-3 小时的时间。 此外，在开始主要研究（上文）之前，最多可以招募四名健康受试者进行“试点研究”，以优化主要研究的暴露后勤和实验程序。 这些受试者将仅接受 CA 暴露，并按照实际研究的描述收集所有程序和样本，支气管镜检查除外。

   在方法优化子研究和试点研究期间收集的样本将用于建立分析方法来测量免疫细胞反应，例如白血或鼻上皮细胞对细菌成分（Toll 样受体 (TLR) 激动剂）的反应和吞噬作用测定在体外接触邻苯二甲酸酯后（如研究程序所述）。

6. 统计分析：

将使用混合效应模型来估计所有效应，并使用相关对比来检验假设。 具体来说，模型将包括暴露（CA 或 DBP）、顺序（CA 在 DBP 之前或 DBP 在 CA 之前）和基因变异状态（例如，GSTM1 存在或 GSTM1 无效）作为固定效应，受试者识别号作为随机效应。 吸入过敏原挑战是在 DBP 和 CA 暴露期间进行的，因此不包括在统计分析中。

在第 1 天和第 2 天的尿样中评估的 6 种常用邻苯二甲酸酯的一般邻苯二甲酸酯暴露水平对 FeNO/血液/肺功能的影响将通过混合效应模型进行分析，包括暴露（DBP、CA）、采样期（第 1 天、第 2 天）和邻苯二甲酸盐水平（第 1 天、第 2 天）。 将使用单向方差分析比较不同时间点的暴露前和暴露后尿 MnBP 水平，以验证邻苯二甲酸酯暴露。