Studie imunitní odpovědi na ftalát-alergeny (PAIR)

1. Účel:

   Studovat účinky ftalátů na imunologii dýchacích cest, funkci plic a nosní alergické reakce.

2. hypotézy:

   Inhalace ftalátů zvyšuje nábor imunitních buněk do horních cest dýchacích a ovlivňuje funkčnost imunitních a epiteliálních buněk.

   Hypotéza 2: Inhalace ftalátů mění buněčnou odpověď na výzvu inhalačního alergenu.

3. Odůvodnění:

   Ftaláty jsou změkčovadla nebo změkčovadla, která se používají v PVC a jiných plastech a řadě spotřebních výrobků. Vzhledem k tomu, že ftaláty nejsou chemicky vázány na plasty, unikají z těchto produktů a způsobují běžnou expozici člověka vzduchem, prachem a potravinami. Expozice ftalátům byla v epidemiologických studiích spojována se zhoršením nebo rozvojem onemocnění dýchacích cest, ale účinky ftalátů na naše dýchací cesty a imunitní reakce jsou z velké části neznámé. V této studii bychom chtěli prozkoumat, jak může jeden konkrétní ftalát, dibutylftalát (DBP), ovlivnit lidský dýchací a imunitní systém. Vyšetřovatelé neočekávají, že odpovědi budou pro subjekty patrné; očekávají, že jakékoli reakce, které se mohou objevit, budou zjistitelné pouze pečlivým vyšetřením buněk a tkání (např. výplach nosu a kartáčky (tekutina z nosu), vzorky z průdušek, krev, moč). Nosní vzorky budou použity pro měření nazálních zánětlivých odpovědí z hlediska náboru buněk a hladin zánětlivých mediátorů. Bronchiální vzorky umožní jemnější vyšetření zánětlivých reakcí v plicích a poskytnou tak mnohem podrobnější informace o reakcích vyvolaných ftalátem v důsledku alergenové expozice. Pochopení těchto jemných změn nám pomůže předcházet zdravotním problémům spojeným s expozicí ftalátům v budoucnu.

4. Cíle:

   Prokázat, že ftaláty mění buněčnou imunitní odpověď v horních cestách dýchacích.

5. Metoda výzkumu:

   Toto je zaslepený křížový experiment mezi dvěma podmínkami (dibutylftalát, DBP nebo filtrovaný vzduch, FA), randomizovanými a vyváženými na objednávku.

   Po každé expozici DBP nebo FA provedeme inhalační alergenovou výzvu. Sběr dat pro každou podmínku bude oddělen 2týdenním vymývacím obdobím.

   Aby bylo možné vyhodnotit účinky expozice na imunitní odpověď a funkci plic, výzkumníci v den expozice nebo následující den shromáždí a provedou následující:

   • Před každou expozicí, 3h a 24h po expozici, odebereme vzorky moči a krve, provedeme NAL a změříme objem usilovného výdechu (FEV1) pomocí spirometrie a FeNO.
   • Metacholinová stimulace bude provedena 24 hodin po expozici.
   • Čištění nosu (NAB) bude provedeno 3 hodiny před expozicí levé nosní dírce a 3 hodiny po expozici pravé nosní dírce.
   • Zlomek zapsaných subjektů bude mít bronchoskopii provedenou 24 hodin po expozici, kde budou odebrány bronchoalveolární vzorky a endobronchiální biopsie.

   Literatura poskytuje protichůdné údaje pro ftaláty s ohledem na některé analytické koncové body. Proto, aby se usnadnil výběr sledovaných parametrů pro hlavní studii a také aby se validovaly některé postupy studie, bude před zahájením hlavní studie provedena „dílčí studie optimalizace metody“. Do této dílčí studie bude přijato maximálně 25 zdravých subjektů, které podepíší upravený souhlas, který odráží jejich omezenou účast. Tito jedinci nebudou vystaveni DBP nebo CA, ale budou vybráni pouze pro odběr krve, nosní výplach a čištění nosu nebo podskupinu těchto vzorků. Zúčastní se pouze jedné návštěvy Vancouver General Hospital a věnují 1-3 hodiny svého času účasti na dílčí studii. Navíc před zahájením hlavní studie (výše) mohou být pro „pilotní studii“ přijati až čtyři zdraví jedinci, aby se optimalizovala logistika expozic a experimentální postupy hlavní studie. Tito jedinci budou vystaveni pouze expozici CA a budou jim odebrány všechny postupy a vzorky, jak je popsáno pro aktuální studii s výjimkou bronchoskopie.

   Vzorky odebrané během dílčí studie Optimalizace metod a pilotní studie budou použity k vytvoření analytických metod pro měření imunitních buněčných odpovědí, jako jsou odpovědi bílých krvinek nebo buněk nosního epitelu na bakteriální složky (agonisté Toll Like Receptor (TLR)) a testy fagocytózy. po expozici ftalátu in vitro (jak je popsáno v postupech studie).

6. Statistická analýza:

K odhadu všech efektů bude použit model smíšených efektů a k testování hypotéz budou použity příslušné kontrasty. Konkrétně budou modely zahrnovat expozici (CA nebo DBP), pořadí (CA před DBP nebo DBP před CA) a stav genové varianty (např. GSTM1 přítomný nebo GSTM1 null) jako fixní efekty a identifikační číslo subjektu jako náhodný efekt. Výzva inhalačním alergenem se podává během expozice DBP i CA, a proto nebude zahrnuta do statistických analýz.

Vliv obecné úrovně expozice ftalátům pro 6 běžně měřených ftalátů, hodnocených ve vzorcích moči 1. a 2. den na FeNO/krev/plíce, bude analyzován modelem smíšených účinků včetně expozice (DBP, CA), periody odběru vzorků (1. den, Den 2) a hladina ftalátů (den 1, den 2). Jednosměrná ANOVA bude použita k porovnání hladin MnBP v moči před a po expozici pro různé časové body k ověření expozice ftalátům.