Исследование иммунного ответа на фталат-аллерген (PAIR)

1. Цель:

   Изучить влияние фталатов на иммунологию дыхательных путей, функцию легких и назальные аллергические реакции.

2. Гипотезы:

   Вдыхание фталата увеличивает рекрутирование иммунных клеток в верхние дыхательные пути и влияет на функциональность иммунных и эпителиальных клеток.

   Гипотеза 2: вдыхание фталата изменяет клеточный ответ на ингаляционную пробу аллергена.

3. Обоснование:

   Фталаты представляют собой пластификаторы или смягчители, используемые в ПВХ и других пластмассах, а также в ряде потребительских товаров. Поскольку фталаты химически не связаны с пластиком, они просачиваются из этих продуктов, вызывая повседневное воздействие на человека через воздух, пыль и пищу. Воздействие фталатов было связано с ухудшением или развитием заболеваний дыхательных путей в эпидемиологических исследованиях, но влияние фталатов на наши дыхательные пути и иммунные реакции в значительной степени неизвестны. В этом исследовании мы хотели бы изучить, как один конкретный фталат, дибутилфталат (DBP), может влиять на дыхательную и иммунную системы человека. Исследователи не ожидают, что ответы будут заметны испытуемым; они ожидают, что любые реакции, которые могут возникнуть, можно будет обнаружить только при тщательном исследовании клеток и тканей (например, промывание носа и ершики (жидкость из носа), бронхиальные пробы, кровь, моча). Назальные образцы будут использоваться для измерения воспалительных реакций носа с точки зрения рекрутирования клеток и уровней медиаторов воспаления. Образцы бронхов позволят более точно изучить воспалительные реакции в легких и, таким образом, предоставить гораздо более подробную информацию о реакциях, вызванных фталатами из-за провокации аллергеном. Понимание этих тонких изменений поможет нам предотвратить проблемы со здоровьем, связанные с воздействием фталатов в будущем.

4. Цели:

   Установить, что фталаты изменяют клеточный иммунный ответ в верхних дыхательных путях.

5. Метод исследования:

   Это слепой перекрестный эксперимент между двумя условиями (дибутилфталат, DBP или фильтрованный воздух, FA), рандомизированными и уравновешенными по порядку.

   После каждого контакта с DBP или FA мы проводим тест с ингаляционным аллергеном. Сбор данных для каждого состояния будет разделен двухнедельным периодом вымывания.

   Чтобы оценить влияние воздействия на иммунный ответ и функцию легких, исследователи собирают и выполняют следующие действия в день воздействия или на следующий день:

   • Перед каждым воздействием, через 3 часа и 24 часа после воздействия мы будем собирать образцы мочи и крови, выполнять NAL и измерять объем форсированного выдоха (ОФВ1) с помощью спирометрии и FeNO.
   • Заражение метахолином проводят через 24 часа после воздействия.
   • Чистку носа (NAB) проводят за 3 часа до воздействия на левую ноздрю и через 3 часа после воздействия на правую ноздрю.
   • Некоторым зарегистрированным субъектам будет проведена бронхоскопия через 24 часа после воздействия, во время которой будут взяты бронхоальвеолярные образцы и эндобронхиальные биоптаты.

   В литературе представлены противоречивые данные для фталатов в отношении некоторых аналитических конечных точек. Таким образом, чтобы облегчить выбор конечных точек для основного исследования, а также для проверки некоторых процедур исследования, перед началом основного исследования будет проведено «подисследование по оптимизации метода». Для этого дополнительного исследования будет набрано не более 25 здоровых субъектов, которые подпишут измененное согласие, отражающее их ограниченное участие. Эти субъекты не будут подвергаться воздействию DBP или CA, а будут набраны только для сбора крови, промывания носа и чистки носа или части этих образцов. Они посетят Ванкуверскую больницу общего профиля только один раз, посвятив от 1 до 3 часов своего времени участию в дополнительном исследовании. Кроме того, до начала основного исследования (выше) до четырех здоровых субъектов могут быть привлечены к «пилотному исследованию» для оптимизации логистики воздействия и экспериментальных процедур основного исследования. Эти субъекты будут подвергаться только воздействию ХА, и у них будут собраны все процедуры и образцы, как описано для фактического исследования, за исключением бронхоскопии.

   Образцы, собранные во время вспомогательного исследования по оптимизации метода и пилотного исследования, будут использоваться для разработки аналитических методов измерения иммунных клеточных ответов, таких как ответы клеток белой крови или носового эпителия на бактериальные компоненты (агонисты Toll-подобных рецепторов (TLR)) и анализы фагоцитоза. после воздействия фталата in vitro (как описано в процедурах исследования).

6. Статистический анализ:

Модель смешанных эффектов будет использоваться для оценки всех эффектов, а соответствующие контрасты будут использоваться для проверки гипотез. В частности, модели будут включать воздействие (CA или DBP), порядок (CA перед DBP или DBP перед CA) и статус варианта гена (например, GSTM1 присутствует или GSTM1 нулевой) как фиксированные эффекты и идентификационный номер субъекта как случайный эффект. Заражение ингаляционным аллергеном проводится во время воздействия как DBP, так и CA, и поэтому не будет включено в статистический анализ.

Влияние общего уровня воздействия фталатов для 6 обычно измеряемых фталатов, оцениваемых в образцах мочи в день 1 и 2, на FeNO/кровь/функции легких будет проанализировано с помощью модели смешанных эффектов, включая воздействие (ДАД, СА), период отбора проб (день 1, день 2) и уровень фталата (день 1, день 2). Однофакторный ANOVA будет использоваться для сравнения уровней MnBP в моче до и после воздействия в различные моменты времени для проверки воздействия фталатов.