Ftalaatti-allergeeni-immuunivastetutkimus (PAIR)

1. Tarkoitus:

   Tutkia ftalaattien vaikutuksia hengitysteiden immunologiaan, keuhkojen toimintaan ja nenän allergisiin reaktioihin.

2. Hypoteesit:

   Ftalaatin inhalaatio lisää immuunisolujen kerääntymistä ylähengitysteihin ja vaikuttaa immuuni- ja epiteelisolujen toimintaan.

   Hypoteesi 2: Ftalaatin sisäänhengitys muuttaa solujen vastetta inhaloitavaan allergeenihaasteeseen.

3. Perustelut:

   Ftalaatit ovat pehmittimiä tai pehmittimiä, joita käytetään PVC:ssä ja muissa muoveissa sekä erilaisissa kuluttajatuotteissa. Koska ftalaatit eivät ole kemiallisesti sitoutuneita muoviin, ne vuotavat ulos näistä tuotteista aiheuttaen ihmisten rutiininomaisen altistumisen ilman, pölyn ja ruoan kautta. Ftalaateille altistuminen on epidemiologisissa tutkimuksissa yhdistetty hengitystiesairauksien pahenemiseen tai kehittymiseen, mutta ftalaattien vaikutukset hengitysteihin ja immuunivasteisiin ovat suurelta osin tuntemattomia. Tässä tutkimuksessa haluamme selvittää, miten yksi tietty ftalaatti, dibutyyliftalaatti (DBP) voi vaikuttaa ihmisen hengitys- ja immuunijärjestelmään. Tutkijat eivät odota vastausten olevan havaittavissa koehenkilöille; he odottavat, että mahdolliset vasteet voidaan havaita vain solujen ja kudosten huolellisen tutkimuksen avulla (esim. nenähuuhtelu ja harjat (neste nenästä), keuhkoputkinäytteet, veri, virtsa). Nenänäytteitä käytetään nenän tulehdusvasteiden mittaamiseen solujen kerääntymisen ja tulehdusvälittäjien tasojen suhteen. Keuhkoputkinäytteet mahdollistavat keuhkojen tulehdusvasteiden tarkemman tutkimuksen ja tarjoavat siten paljon yksityiskohtaisempaa tietoa allergeenialtistuksen aiheuttamista ftalaatin aiheuttamista vasteista. Näiden hienovaraisten muutosten ymmärtäminen auttaa meitä ehkäisemään ftalaateille altistumiseen liittyviä terveysongelmia tulevaisuudessa.

4. Tavoitteet:

   Sen osoittamiseksi, että ftalaatit muuttavat solujen immuunivastetta ylemmissä hengitysteissä.

5. Tutkimusmenetelmä:

   Tämä on sokea ristikkokoe kahden ehdon välillä (dibutyyliftalaatti, DBP tai suodatettu ilma, FA), satunnaistettu ja tasapainotettu tilauksesta.

   Jokaisen DBP- tai FA-altistuksen jälkeen toimitamme inhaloitavan allergeenihaasteen. Tiedonkeruu kustakin sairaudesta erotetaan 2 viikon pesujaksolla.

   Arvioidakseen altistuksen vaikutuksia immuunivasteeseen ja keuhkojen toimintaan tutkijat keräävät ja suorittavat seuraavat tiedot altistuspäivänä tai seuraavana päivänä:

   • Ennen jokaista altistusta, 3 tuntia ja 24 tuntia altistuksen jälkeen, keräämme virtsa- ja verinäytteitä, suoritamme NAL:n ja mittaamme pakotetun uloshengityksen tilavuuden (FEV1) spirometrialla ja FeNO:lla.
   • Metakoliinialtistus suoritetaan 24 tuntia altistuksen jälkeen.
   • Nenäharjaus (NAB) suoritetaan 3 tuntia ennen altistusta vasemmalla sieraimella ja 3 tuntia altistuksen jälkeen oikealla sieraimella.
   • Osalle otetuista koehenkilöistä tehdään bronkoskoopia 24 tuntia altistuksen jälkeen, jossa kerätään bronkoalveolaariset näytteet ja endobronkiaaliset biopsiat.

   Kirjallisuus tarjoaa ristiriitaisia ​​tietoja ftalaateista joidenkin analyyttisten päätepisteiden osalta. Siksi päätutkimuksen päätepisteiden valinnan helpottamiseksi sekä joidenkin tutkimusmenetelmien validoimiseksi "Method Optimization -alatutkimus" suoritetaan ennen päätutkimuksen aloittamista. Tähän alatutkimukseen otetaan enintään 25 tervettä henkilöä, jotka allekirjoittavat muutetun suostumuksensa, joka kuvastaa heidän rajoitettua osallistumistaan. Näitä koehenkilöitä ei altisteta DBP:lle tai CA:lle, vaan heidät värvätään vain veren keräämiseen, nenän huuhteluun ja nenän harjaukseen tai näiden näytteiden osaan. He käyvät vain yhdellä käynnillä Vancouverin yleissairaalassa ja omistavat 1–3 tuntia ajastaan ​​osatutkimukseen osallistumiseen. Lisäksi ennen päätutkimuksen aloittamista (yllä) enintään neljä tervettä henkilöä voidaan värvätä "pilottitutkimukseen" päätutkimuksen altistumisen logistiikan ja kokeellisten menettelyjen optimoimiseksi. Nämä koehenkilöt altistetaan vain CA-altistukselle, ja heiltä kerätään kaikki menettelyt ja näytteet varsinaisessa tutkimuksessa kuvatulla tavalla bronkoskoopiaa lukuun ottamatta.

   Method Optimation -alatutkimuksen ja pilottitutkimuksen aikana kerättyjä näytteitä käytetään määrittämään analyyttisiä menetelmiä immuunisoluvasteiden, kuten valkoveren tai nenän epiteelisolujen vasteiden bakteerikomponenteille (Toll Like Receptor (TLR) -agonistit) ja fagosytoosimääritysten mittaamiseksi. ftalaatin in vitro -altistuksen jälkeen (kuten on kuvattu tutkimusmenetelmissä).

6. Tilastollinen analyysi:

Kaikkien vaikutusten arvioimiseen käytetään sekavaikutelmamallia, ja hypoteesien testaamiseen käytetään asiaankuuluvia kontrasteja. Tarkemmin sanottuna mallit sisältävät altistuksen (CA tai DBP), järjestyksen (CA ennen DBP:tä tai DBP ennen CA:ta) ja geenivariantin tilan (esim. GSTM1 läsnä tai GSTM1 tyhjä) kiinteinä vaikutuksina ja kohteen tunnistusnumeron satunnaisena vaikutuksena. Inhalaatioallergeenialtistus annetaan sekä DBP- että CA-altistuksen aikana, eikä sitä siksi sisällytetä tilastollisiin analyyseihin.

Yleisen ftalaatialtistuksen tason vaikutus kuudelle yleisesti mitatulle ftalaatille, jotka on arvioitu virtsanäytteissä päivinä 1 ja 2, FeNO/veri/keuhkojen toimintaan analysoidaan sekavaikutusmallilla, joka sisältää altistuksen (DBP, CA), näytteenottoajan (päivä 1, Päivä 2) ja ftalaattitaso (Päivä 1, Päivä 2). Yksisuuntaista ANOVAa käytetään virtsan MnBP-tasojen vertaamiseen ennen altistumista ja sen jälkeen eri ajankohtina ftalaatin altistumisen varmistamiseksi.