L'étude sur la réponse immunitaire aux allergènes et aux phtalates (PAIR)

1. But:

   Étudier les effets des phtalates sur l'immunologie des voies respiratoires, la fonction pulmonaire et les réactions allergiques nasales.

2. Hypothèses:

   L'inhalation de phtalates augmente le recrutement de cellules immunitaires dans les voies respiratoires supérieures et affecte la fonctionnalité des cellules immunitaires et épithéliales.

   Hypothèse 2 : L'inhalation de phtalates altère la réponse cellulaire à une provocation allergène par inhalation.

3. Justification:

   Les phtalates sont des plastifiants ou des adoucissants, utilisés dans le PVC et d'autres plastiques et une gamme de produits de consommation. Étant donné que les phtalates ne sont pas liés chimiquement au plastique, ils s'échappent de ces produits, entraînant une exposition humaine courante par l'air, la poussière et les aliments. L'exposition aux phtalates a été associée à l'aggravation ou au développement de maladies des voies respiratoires dans des études épidémiologiques, mais les effets des phtalates sur nos voies respiratoires et nos réponses immunitaires sont largement inconnus. Dans cette étude, nous aimerions étudier comment un phtalate particulier, le phtalate de dibutyle (DBP), peut affecter les systèmes respiratoire et immunitaire humains. Les enquêteurs ne s'attendent pas à ce que les réponses soient perceptibles par les sujets ; ils s'attendent à ce que toute réponse susceptible de se produire ne soit détectable que par un examen minutieux des cellules et des tissus (par ex. lavage nasal et brosses (liquide du nez), prélèvements bronchiques, sang, urine). Des échantillons nasaux seront utilisés pour mesurer les réponses inflammatoires nasales en termes de recrutement cellulaire et de niveaux de médiateurs inflammatoires. Les prélèvements bronchiques permettront un examen affiné d'une réponse inflammatoire dans le poumon et fourniront ainsi une information beaucoup plus détaillée concernant les réponses induites par les phtalates dues à une provocation allergénique. Comprendre ces changements subtils nous aidera à prévenir les problèmes de santé associés à l'exposition aux phtalates à l'avenir.

4. Objectifs:

   Établir que les phtalates modifient la réponse immunitaire cellulaire dans les voies respiratoires supérieures.

5. Méthode de recherche:

   Il s'agit d'une expérience croisée en aveugle entre deux conditions (phtalate de dibutyle, DBP, ou air filtré, FA), randomisée et contrebalancée à la commande.

   Après chaque exposition au DBP ou au FA, nous réaliserons un challenge allergène inhalé. La collecte de données pour chaque condition sera séparée par une période de sevrage de 2 semaines.

   Pour évaluer les effets de l'exposition sur la réponse immunitaire et la fonction pulmonaire, les enquêteurs recueilleront et effectueront les éléments suivants le jour de l'exposition ou le lendemain :

   • Avant chaque exposition, 3h et 24h post-exposition, nous prélèverons des échantillons d'urine et de sang, effectuerons NAL, et mesurerons le volume expiratoire forcé (FEV1) par spirométrie et FeNO.
   • Le challenge à la méthacholine sera réalisé 24h après l'exposition.
   • Le brossage nasal (NAB) sera effectué à 3h pré-exposition sur la narine gauche et 3h post-exposition sur la narine droite.
   • Une fraction des sujets inscrits subira une bronchoscopie effectuée 24h après l'exposition, où des échantillons bronchoalvéolaires et des biopsies endobronchiques seront prélevés.

   La littérature fournit des données contradictoires pour les phtalates en ce qui concerne certains des paramètres analytiques. Par conséquent, afin de faciliter le choix des critères d'évaluation pour l'étude principale, ainsi que pour valider certaines procédures d'étude, une « sous-étude d'optimisation de la méthode » sera réalisée avant le début de l'étude principale. Un maximum de 25 sujets sains seront recrutés pour cette sous-étude, qui signeront un consentement modifié reflétant leur participation limitée. Ces sujets ne seront pas exposés au DBP ou au CA, mais seront uniquement recrutés pour la collecte de sang, le lavage nasal et le brossage nasal, ou un sous-ensemble de ces échantillons. Ils n'assisteront qu'à une seule visite à l'hôpital général de Vancouver, consacrant 1 à 3 heures de leur temps lorsqu'ils participeront à la sous-étude. De plus, avant le début de l'étude principale (ci-dessus), jusqu'à quatre sujets sains peuvent être recrutés pour une « étude pilote » afin d'optimiser la logistique des expositions et les procédures expérimentales de l'étude principale. Ces sujets seront soumis à une exposition à l'AC uniquement et toutes les procédures et tous les échantillons seront prélevés comme décrit pour l'étude proprement dite, à l'exception de la bronchoscopie.

   Les échantillons recueillis au cours de la sous-étude d'optimisation de la méthode et de l'étude pilote seront utilisés pour établir des méthodes analytiques pour mesurer les réponses cellulaires immunitaires telles que les réponses des cellules sanguines blanches ou épithéliales nasales aux composants bactériens (agonistes des récepteurs Toll Like (TLR)) et les tests de phagocytose. après une exposition in vitro aux phtalates (comme décrit dans les procédures d'étude).

6. Analyses statistiques:

Un modèle à effets mixtes sera utilisé pour estimer tous les effets et des contrastes pertinents seront utilisés pour tester les hypothèses. Plus précisément, les modèles incluront l'exposition (CA ou DBP), l'ordre (CA avant DBP ou DBP avant CA) et le statut de la variante génétique (par exemple, GSTM1 présent ou GSTM1 nul) comme effets fixes et le numéro d'identification du sujet comme effet aléatoire. La provocation allergène par inhalation est administrée pendant les expositions au DBP et à l'AC et ne sera donc pas incluse dans les analyses statistiques.

L'influence du niveau général d'exposition aux phtalates pour 6 phtalates couramment mesurés, évalués dans des échantillons d'urine les jours 1 et 2 sur FeNO/sang/fonction pulmonaire sera analysée par un modèle à effets mixtes incluant l'exposition (DBP, CA), la période d'échantillonnage (jour 1, Jour 2) et le niveau de phtalate (Jour 1, Jour 2). Une ANOVA unidirectionnelle sera utilisée pour comparer les niveaux urinaires de MnBP avant et après l'exposition à différents moments afin de vérifier l'exposition aux phtalates.