O estudo de resposta imune a alérgenos de ftalato (PAIR)

1. Propósito:

   Estudar os efeitos dos ftalatos na imunologia das vias aéreas, função pulmonar e respostas alérgicas nasais.

2. Hipóteses:

   A inalação de ftalato aumenta o recrutamento de células imunes para as vias aéreas superiores e afeta a funcionalidade das células imunes e epiteliais.

   Hipótese 2: A inalação de ftalato altera a resposta celular a um desafio de alergeno por inalação.

3. Justificação:

   Os ftalatos são plastificantes ou amaciantes, usados ​​em PVC e outros plásticos e uma variedade de produtos de consumo. Como os ftalatos não estão quimicamente ligados ao plástico, eles vazam desses produtos, causando exposição humana rotineira através do ar, poeira e alimentos. A exposição aos ftalatos tem sido associada ao agravamento ou desenvolvimento de doenças das vias aéreas em estudos epidemiológicos, mas os efeitos dos ftalatos nas nossas vias aéreas e nas respostas imunológicas são amplamente desconhecidos. Neste estudo, gostaríamos de investigar como um ftalato em particular, dibutil ftalato (DBP), pode afetar os sistemas respiratório e imunológico humano. Os investigadores não esperam que as respostas sejam percebidas pelos sujeitos; eles esperam que qualquer resposta que possa ocorrer só seja detectável por meio de um exame cuidadoso de células e tecidos (por exemplo, lavagem nasal e escovas (fluido do nariz), amostras brônquicas, sangue, urina). Amostras nasais serão utilizadas para mensuração das respostas inflamatórias nasais em termos de recrutamento celular e níveis de mediadores inflamatórios. As amostras brônquicas permitirão um exame refinado de respostas inflamatórias no pulmão e, assim, fornecerão informações muito mais detalhadas sobre as respostas induzidas por ftalato devido ao desafio com alergênico. Compreender essas mudanças sutis nos ajudará a prevenir problemas de saúde associados à exposição aos ftalatos no futuro.

4. Objetivos.

   Estabelecer que os ftalatos alteram a resposta imune celular nas vias aéreas superiores.

5. Método de pesquisa:

   Este é um experimento de cruzamento cego entre duas condições (dibutil ftalato, DBP ou ar filtrado, FA), randomizado e contrabalançado de acordo com o pedido.

   Após cada exposição de DBP ou FA, aplicaremos um desafio de alérgeno inalado. A coleta de dados para cada condição será separada por um período de washout de 2 semanas.

   Para avaliar os efeitos da exposição na resposta imune e na função pulmonar, os investigadores irão coletar e realizar o seguinte no dia da exposição ou no dia seguinte:

   • Antes de cada exposição, 3h e 24h pós-exposição, coletaremos amostras de urina e sangue, realizaremos NAL e mediremos o volume expiratório forçado (VEF1) por espirometria e FeNO.
   • O desafio com metacolina será realizado 24h após a exposição.
   • A escovação nasal (NAB) será realizada 3h pré-exposição na narina esquerda e 3h pós-exposição na narina direita.
   • Uma fração dos indivíduos inscritos terá uma broncoscopia realizada 24h pós-exposição, onde serão coletadas amostras broncoalveolares e biópsias endobrônquicas.

   A literatura fornece dados conflitantes para ftalatos em relação a alguns dos parâmetros analíticos. Portanto, para facilitar a escolha dos parâmetros para o estudo principal, bem como para validar alguns procedimentos do estudo, um 'subestudo de otimização do método' será realizado antes do início do estudo principal. Um máximo de 25 indivíduos saudáveis ​​serão recrutados para este subestudo, que assinarão um consentimento modificado que reflete sua participação limitada. Esses indivíduos não serão expostos a DBP ou CA, mas serão recrutados apenas para coleta de sangue, lavagem nasal e escovação nasal ou um subconjunto dessas amostras. Eles farão apenas uma visita ao Hospital Geral de Vancouver, dedicando 1 a 3 horas de seu tempo ao participar do subestudo. Além disso, antes de iniciar o estudo principal (acima), até quatro indivíduos saudáveis ​​podem ser recrutados para um 'estudo piloto' para otimizar a logística das exposições e os procedimentos experimentais do estudo principal. Esses indivíduos serão submetidos apenas à exposição à CA e terão todos os procedimentos e amostras coletados conforme descrito para o estudo real, com exceção da broncoscopia.

   As amostras coletadas durante o subestudo de otimização do método e o estudo piloto serão usadas para estabelecer métodos analíticos para medir as respostas imunes celulares, como sangue branco ou respostas de células epiteliais nasais a componentes bacterianos (agonistas do Toll Like Receptor (TLR)) e ensaios de fagocitose após exposição in vitro ao ftalato (conforme descrito nos procedimentos do estudo).

6. Análise estatística:

Um modelo de efeitos mistos será usado para estimar todos os efeitos e contrastes pertinentes serão usados ​​para testar as hipóteses. Especificamente, os modelos incluirão exposição (CA ou DBP), ordem (CA antes do DBP ou DBP antes do CA) e status da variante do gene (por exemplo, GSTM1 presente ou GSTM1 nulo) como efeitos fixos e número de identificação do sujeito como um efeito aleatório. O desafio de inalação de alérgenos é dado durante as exposições de DBP e CA e, portanto, não será incluído nas análises estatísticas.

A influência do nível geral de exposição ao ftalato para 6 ftalatos comumente medidos, avaliados em amostras de urina Dia 1 e 2 em FeNO/sangue/função pulmonar será analisada por modelo de efeitos mistos incluindo exposição (DBP, CA), período de amostragem (Dia 1, Dia 2) e nível de ftalatos (Dia 1, Dia 2). Uma ANOVA unidirecional será usada para comparar os níveis urinários de MnBP pré e pós-exposição para vários pontos de tempo para verificar a exposição ao ftalato.