JOIN 项目：诊断和预防哮喘和过敏症的空气 (JOIN)

目标：

JOIN 项目结合了健康和室内环境研究领域，致力于通过呼出的 VOC 分析开发和验证一种新的哮喘诊断方法。 这种方法更灵敏、更特异，而且完全无创。 此外，JOIN 项目将评估暴露于室内环境（即内分泌干扰物）对儿童哮喘和过敏发展的影响。 该项目的具体目标是：

1. 使用呼出的 VOC 概况对哮喘儿童和健康对照儿童进行分类；
2. 使用呼出的 VOC 配置文件对哮喘表型进行分类；
3. 评估长期暴露于外源性 VOCs 对呼出气样本的影响；
4. 通过测量室内空气和家中灰尘中被确定为 EDC 的一组化学物质的浓度来表征室内暴露；
5. 评估在室内接触 EDCs 与儿童健康结果之间的关联，重点关注哮喘/过敏症，以及与那些已经敏感的人的过敏症和呼吸道症状恶化之间的关系；
6. 调查哪些建筑材料和消费品可能对儿童的接触影响最大；
7. 评估 EDCs 室内暴露与肺功能、气道炎症和反应性以及疾病的呼出和尿液生物标志物之间的关联。

该项目的完成可能有助于验证一种新的哮喘诊断方法，以便将其引入真实的临床环境。

室内空气质量审计将有助于更好地了解内分泌干扰物的暴露过程和健康影响，主要是儿童。 该项目还将评估和比较暴露在室内空气和儿童体内的内分泌干扰物。

工作计划：

1. 研究人群的选择和招募

   在该项目中，预计将招募 75 名年龄在 6 至 18 岁之间的儿童（在其法定监护人的同意下）在 S. João 医院的免疫过敏科进行临床访问。 所有参与者都将被告知项目的目标和程序，并被要求签署知情同意书。 收集的数据将保密，参与者将有权随时从研究中删除他们的数据。

   在与法定监护人达成协议后，将安排对参与者家的访问。 在访问期间，将收集 EBC 和尿液样本，以及呼出的气体（非浓缩）。

2. 问卷调查 将根据儿童哮喘和过敏症国际研究 (ISAAC) 由父母/法定监护人在家中完成的自填标准化问卷进行。 将收集社会人口和经济信息、吸烟和饮酒习惯、个人护理产品的使用情况、家族病史和饮食习惯。 还将包括一系列关于儿童呼吸/过敏健康、当前症状/诊断（过去 3 个月内）的问题。 同时，将确定室内环境因素的特征，例如住宅类型、建筑物的年龄、地板类型、通风情况。

3. 临床评估和生物样本采集 到 S. João 医院中心进行免疫变态反应学临床评估的儿童将被邀请参加这项研究。 接受后，将从参与者的临床档案中检索肺活量测定法、呼出气一氧化氮分数 (FeNO) 和皮肤点刺测试的数据。 临床评估后，将通过呼出空气冷凝系统（便携式 TurboDECCS）呼吸 10 至 15 分钟，立即从儿童身上收集呼出气冷凝物 (EBC)。 EBC 样品将储存在 -80ºC 直至实验室分析。

   在儿童之家的室内空气质量审计期间，将收集额外的 EBC 样本（以了解与在医院获得的样本相比是否存在显着差异）以及呼出的空气（非冷凝）。 呼出的空气将使用 1 L Tedlar® 袋（SKC Inc. 美国）之前根据制造商的说明用 3 次氮气冲洗进行了清洁。 呼吸袋仅用于储存和运输空气，是一种已经开发并获得批准的产品。 参与者将被要求在呼吸收集前 2 小时内不要摄入食物或调味饮料。 将指导儿童用水清洁口腔，吸气，屏住呼吸 5 秒钟，然后深深地呼气到 Tedlar 袋中。

   两分钟后将收集儿童的尿液样本。 第一个时刻将在 S. João 医院中心进行临床评估的第二天，第二个时刻将在室内空气质量审核当天。之前将向每位参与者提供一个商业聚丙烯样本收集容器，以获得 6 -10 毫升尿液。 禁食至少8小时后，清晨在家中收集尿液样本，以测量尿液EDCs的代谢物，如MBzP、MEP、MEHP。 收集尿液样本后应在-20°C 下保存，并在室内空气质量审核当天交付。 随后，样品将在 -20ºC 下冷冻直至分析。

   哮喘的临床诊断（参考标准）将由随机分配给每位患者的 7 名不同的过敏症专家进行。

4. 建筑检查和特征 将使用清单来获取有关可能的室内来源（消费品和清洁产品、家具、地板类型）、其他建筑特征（例如 年龄、通风等）、最近的翻新和室外来源、居住者的行为以及有关特定材料的存在和消费者使用的信息也将被收集。

5. 室内空气审计 EDCs 将在室内空气和灰尘中测量，因为室内空气已被确定为化学暴露的重要来源，而房屋灰尘已被证明是重要的暴露途径。 由于室内的降解过程通常很慢，因此灰尘还提供了历史上在家中使用过的化学品的记录。 分析的目标化学品包括邻苯二甲酸盐、双酚 A、乙醇胺和乙二醇醚。 这些化合物的选择基于内分泌干扰、哮喘恶化、室内和消费品中预期存在的证据，以及与家庭暴露研究中开发的分析方法的相容性。

   EDCs 室内空气样本将使用 URG 个人杀虫剂采样盒（University Research Glassware；chapel Hill，Nc）收集，该采样盒将放置在儿童卧室中大约呼吸高度处。 在采样期结束时，URG 采样器将在运送到实验室之前储存在 -4°c。 要测量灰尘中的 EDC，将使用家用真空吸尘器袋。 将从卧室地板的所有表面以及物体表面收集灰尘样本，例如架子、橱柜、门框、窗框、电视和音响设备以及个人电脑。 来自每个袋子的灰尘将用 100µm 金属筛网筛分并储存在 -20°C 的玻璃罐中（用己烷预先清洁），直到进行化学分析。

   儿童卧室室内空气VOCs在临床评估的同时，按照标准化流程主动采样采集，以评估相关环境VOCs对临床试验的影响。 采样将使用 5 L 流量控制泵（SKC Inc. USA) 连接到装有 200 mg Tenax TA 60/80 (Supelco) 的不锈钢吸附管。 采样将与临床评估同时开始，并按程序在一小时后结束，在收集呼出气时提供室内空气 VOC 的代表性样本。 在取样结束时，试管将用气密盖密封并运送到实验室，在那里它们将在室温下储存直至分析。

6. 实验室分析 挥发性有机化合物和 EDC 将通过电子鼻 (Cyranose 320) 进行分析。 将进行多变量分析以观察患有哮喘的参与者的 VOC 概况是否与没有哮喘的参与者不同。 将针对不同模型估计分类率、ROC 曲线下面积、敏感性和特异性。