El Proyecto JOIN: El Aire en el Diagnóstico y Prevención del Asma y la Alergia (JOIN)

Objetivos:

El proyecto JOIN combina las áreas de investigación de salud y ambiente interior para contribuir al desarrollo y validación de un nuevo método de diagnóstico de asma a través del análisis de COV exhalados. Este método es más sensible, más específico y completamente no invasivo. Además, el proyecto JOIN evaluará el impacto de la exposición al ambiente interior, a saber, los disruptores endocrinos, en el desarrollo de asma y alergias en los niños. Los objetivos específicos del proyecto son:

1. Clasificar a los niños con asma y controles sanos utilizando perfiles de COV exhalados;
2. Clasificar los fenotipos de asma utilizando perfiles de VOC exhalados;
3. Evaluar la influencia de la exposición prolongada a COV exógenos en las muestras de aliento exhalado;
4. Caracterizar la exposición en interiores midiendo las concentraciones de un conjunto de sustancias químicas identificadas como EDC en el aire interior y el polvo en los hogares;
5. Evaluar la asociación entre la exposición a EDC en interiores y los resultados de salud de los niños enfocados en asma/alergias y también con la exacerbación de alergias y síntomas respiratorios en aquellos que ya están sensibilizados;
6. Investigue qué materiales de construcción y productos de consumo podrían estar contribuyendo más a la exposición de los niños;
7. Evaluar la asociación entre la exposición a los EDC en interiores y la función pulmonar, la inflamación y la capacidad de respuesta de las vías respiratorias y los biomarcadores de enfermedad exhalados y urinarios.

La finalización de este proyecto puede contribuir a la validación de un nuevo método de diagnóstico del asma en camino de ser introducido en un contexto clínico real.

La auditoría de la calidad del aire interior permitirá una mejor comprensión del proceso de exposición a los disruptores endocrinos y los efectos en la salud, principalmente en los niños. El proyecto también evaluará y comparará los EDC en el aire interior y en niños, como resultado de la exposición.

El plan de trabajo:

1. Selección y reclutamiento de la población de estudio

   En este proyecto, se espera que 75 niños de 6 a 18 años sean reclutados (con el consentimiento de su tutor legal) durante las visitas clínicas en el departamento de inmunoalergología del Hospital S. João. Todos los participantes serán informados sobre los objetivos y procedimientos del proyecto y se les pedirá que firmen un formulario de consentimiento informado. Los datos recopilados serán confidenciales y los participantes tendrán derecho a que se eliminen sus datos del estudio en cualquier momento.

   Previo acuerdo con los tutores legales, se programarán las visitas a los domicilios de los participantes. Durante las visitas se tomarán muestras de EBC y orina, así como aliento exhalado (no condensado).

2. Cuestionario de encuesta Se llevará a cabo un cuestionario estandarizado autoadministrado, basado en el Estudio Internacional de Asma y Alergias en la Infancia (ISAAC), completado por los padres/tutores legales en el hogar. Se recogerá información sociodemográfica y económica, hábitos de consumo de tabaco y bebida, uso de productos de cuidado personal, antecedentes familiares de enfermedades y hábitos alimentarios. También se incluirá un conjunto de preguntas sobre la salud respiratoria/alérgica del niño, los síntomas/diagnósticos actuales (durante los últimos 3 meses). Simultáneamente, se identificarán las características de los factores del ambiente interior, como el tipo de vivienda, la antigüedad del edificio, el tipo de piso, la ventilación.

3. Evaluación clínica y recolección de muestras biológicas Los niños que asisten al Centro Hospitalario S. João para una evaluación clínica de inmunoalergología serán invitados a participar en este estudio. Tras la aceptación, los datos de espirometría, óxido nítrico exhalado fraccionado (FeNO) y pruebas cutáneas se recuperarán del expediente clínico de los participantes. Inmediatamente después de la evaluación clínica, se recolectará el condensado del aire exhalado (EBC) de los niños respirando de 10 a 15 minutos a un sistema de condensación de aire exhalado (TurboDECCS portátil). Las muestras de EBC se almacenarán a -80ºC hasta su análisis en laboratorio.

   Durante la auditoría de la calidad del aire interior en los hogares de niños, se recolectarán muestras adicionales de EBC (para comprender si hubo diferencias significativas en comparación con las muestras obtenidas en el hospital), así como aire exhalado (no condensado). El aire exhalado se recogerá mediante bolsas Tedlar® de 1 L (SKC Inc. EE. UU.) limpiado previamente con 3 descargas de nitrógeno según las instrucciones del fabricante. Las bolsas de respiración sirven únicamente para almacenar y transportar el aire y son un producto ya desarrollado y aprobado. Se pedirá a los participantes que no ingieran alimentos ni bebidas saborizadas en las 2h previas a la recolección del aliento. Se indicará a los niños que se limpien la boca con agua, inhalen, contengan la respiración durante 5 segundos y luego exhalen profundamente en la bolsa Tedlar.

   Las muestras de orina de los niños se recogerán en dos momentos. El 1er momento será el día próximo a la evaluación clínica en el Centro Hospitalario S. João y el 2º momento será el día de la auditoría de calidad del aire interior. Previamente se le entregará a cada participante un recipiente comercial de polipropileno para recolección de muestras para obtener 6 -10 ml de orina. Las muestras de orina se recolectarán en casa temprano en la mañana después de un período de ayuno de al menos 8 horas para medir los metabolitos de los EDC urinarios, como MBzP, MEP, MEHP. Después de la recolección, las muestras de orina deben almacenarse a -20°C y entregarse el día de la auditoría de calidad del aire interior. Posteriormente, las muestras se congelarán a -20ºC hasta su análisis.

   El diagnóstico clínico de asma (estándar de referencia) será realizado por 7 alergólogos diferentes asignados aleatoriamente a cada paciente.

4. Inspección y caracterización del edificio Se utilizará una lista de verificación para obtener información sobre las posibles fuentes interiores (productos de consumo y de limpieza, muebles, tipo de suelo), otras características del edificio (p. edad, ventilación, etc.), reformas recientes y fuentes exteriores, comportamientos de los ocupantes e información sobre la presencia de materiales específicos y el uso de los consumidores.

5. Los EDC de la auditoría del aire interior se medirán en el aire interior y el polvo porque se ha identificado que el aire interior es una fuente importante de exposición química, mientras que se ha demostrado que el polvo doméstico es una vía de exposición importante. El polvo también proporciona un registro de los productos químicos que se han utilizado históricamente en el hogar, ya que los procesos de degradación en el interior suelen ser lentos. Los productos químicos objeto de análisis incluyeron ftalatos, bisfenol A, etanolaminas y éteres de glicol. Estos compuestos fueron seleccionados en base a la evidencia de alteración endocrina, exacerbación del asma, presencia esperada en interiores y en productos de consumo, y compatibilidad con métodos analíticos desarrollados en estudios de exposición en el hogar.

   Las muestras de aire interior de los EDC se recolectarán utilizando cartuchos de muestreo de pesticidas personales de URG (University Research Glassware; Chapel Hill, Nc), que se colocarán en la habitación de los niños aproximadamente a la altura de la respiración. Al final del período de muestreo, los muestreadores URG se almacenarán a -4 °C antes de enviarlos al laboratorio. Para medir los EDC en el polvo, se utilizarán bolsas de aspiradoras domésticas. Se recolectarán muestras de polvo de todas las superficies del piso del dormitorio y también de la superficie de los objetos, como estantes, armarios, marcos de puertas, marcos de ventanas, televisores y equipos de audio y computadoras personales. El polvo de cada bolsa se tamizará con una malla metálica de 100 µm y se almacenará en frascos de vidrio (prelavados con hexano) a -20 °C hasta que se realice el análisis químico.

   Los COV del aire interior de los dormitorios de los niños se recogerán mediante muestreo activo, según procedimientos estandarizados, al mismo tiempo que la evaluación clínica para evaluar la influencia de los COV ambientales pertinentes en el ensayo clínico. El muestreo se realizará utilizando una bomba de control de flujo de 5 L (SKC Inc. USA) conectado a un tubo de sorción de acero inoxidable lleno de 200 mg de Tenax TA 60/80 (Supelco). El muestreo comenzará al mismo tiempo que la evaluación clínica y se programará para finalizar después de una hora, proporcionando una muestra representativa de los COV del aire interior en el momento de la recolección del aliento exhalado. Al final del muestreo, los tubos serán sellados con tapas herméticas y transportados al laboratorio, donde serán almacenados a temperatura ambiente hasta su análisis.

6. Análisis de laboratorio Los compuestos orgánicos volátiles y los EDC se analizarán mediante nariz electrónica (Cyranose 320). Se realizará un análisis multivariante para observar si los perfiles de VOC de los participantes con asma son diferentes de los que no tienen asma. Se estimarán tasas de clasificación, área bajo la curva ROC, sensibilidad y especificidad para los diferentes modelos.