O Projeto JOIN: O Ar no Diagnóstico e Prevenção da Asma e Alergia (JOIN)

Objetivos.

O projeto JOIN combina as áreas de pesquisa em saúde e ambiente interno para contribuir no desenvolvimento e validação de um novo método de diagnóstico de asma por meio da análise de COV exalados. Este método é mais sensível, mais específico e completamente não invasivo. Adicionalmente, o projeto JOIN irá avaliar o impacto da exposição ao ambiente interior, nomeadamente aos desreguladores endócrinos, no desenvolvimento de asma e alergia em crianças. Os objetivos específicos do projeto são:

1. Classificar crianças com asma e controles saudáveis ​​usando perfis de VOC exalados;
2. Classificar fenótipos de asma usando perfis de COV exalados;
3. Avaliar a influência da exposição prolongada a VOCs exógenos nas amostras de ar exalado;
4. Caracterizar a exposição interna medindo as concentrações de um conjunto de produtos químicos identificados como EDCs no ar interno e na poeira das residências;
5. Avaliar a associação entre exposição a EDCs em ambientes fechados e desfechos de saúde infantil focados em asma/alergias e também com a exacerbação de alergias e sintomas respiratórios em crianças já sensibilizadas;
6. Investigar quais materiais de construção e produtos de consumo podem estar contribuindo mais para a exposição de crianças;
7. Avalie a associação entre a exposição interna a EDCs e a função pulmonar, inflamação e capacidade de resposta das vias aéreas e biomarcadores exalados e urinários de doenças.

A realização deste projeto poderá contribuir para a validação de um novo método de diagnóstico da asma em vias de ser introduzido num contexto clínico real.

A auditoria da qualidade do ar interior permitirá uma melhor compreensão do processo de exposição a desreguladores endócrinos e efeitos na saúde, principalmente em crianças. O projeto também avaliará e comparará EDCs no ar interno e em crianças, como resultado da exposição.

Plano de trabalho:

1. Seleção e recrutamento da população do estudo

   Neste projeto prevê-se o recrutamento de 75 crianças dos 6 aos 18 anos (com o consentimento do respetivo responsável legal) durante as consultas clínicas no serviço de imunoalergologia do Hospital S. João. Todos os participantes serão informados sobre os objetivos e procedimentos do projeto e serão solicitados a assinar um termo de consentimento livre e esclarecido. Os dados coletados serão confidenciais e os participantes terão o direito de ter seus dados removidos do estudo a qualquer momento.

   Mediante acordo com os responsáveis ​​legais, serão agendadas as visitas domiciliares dos participantes. Durante as visitas, serão coletadas amostras de EBC e urina, bem como ar exalado (não condensado).

2. Levantamento por questionário Será aplicado um questionário padronizado autoaplicável, baseado no International study of Asthma and Allergies in Childhood (ISAAC), preenchido pelos pais/responsáveis ​​legais no domicílio. Serão recolhidas informações sociodemográficas e económicas, hábitos tabágicos e alcoólicos, utilização de produtos de higiene pessoal, antecedentes familiares de doenças e hábitos alimentares. Será também incluído um conjunto de perguntas sobre saúde respiratória/alérgica da criança, sintomas/diagnóstico atuais (durante os últimos 3 meses). Simultaneamente, serão identificadas características de fatores do ambiente interno, como tipo de habitação, idade da edificação, tipo de piso, ventilação.

3. Avaliação clínica e recolha de amostras biológicas Serão convidadas a participar neste estudo as crianças que frequentam o Centro Hospitalar de S. João para avaliação clínica imunoalergológica. Após a aceitação, os dados de espirometria, fração exalada de óxido nítrico (FeNO) e testes cutâneos serão recuperados do prontuário clínico dos participantes. Imediatamente após a avaliação clínica, o condensado do ar exalado (EBC) será coletado das crianças respirando por 10 a 15 minutos para um sistema de condensação do ar exalado (TurboDECCS portátil). As amostras de EBC serão armazenadas a -80ºC até análise laboratorial.

   Durante a auditoria da qualidade do ar interior nas casas das crianças, serão recolhidas amostras adicionais de EBC (para perceber se houve diferenças significativas quando comparadas com as amostras obtidas no hospital), bem como ar exalado (não condensado). O ar expirado será coletado com bolsas Tedlar® de 1 L (SKC Inc. EUA) previamente limpos com 3 descargas de nitrogênio de acordo com as instruções do fabricante. Os respiradores servem exclusivamente para armazenar e transportar o ar e são um produto já desenvolvido e aprovado. Será solicitado aos participantes que não ingiram alimentos ou bebidas aromatizadas nas 2h anteriores à coleta do hálito. As crianças serão instruídas a limpar a boca com água, inspirar, prender a respiração por 5 segundos e, posteriormente, expirar profundamente na bolsa Tedlar.

   Serão coletadas amostras de urina das crianças em dois momentos. O 1º momento será no dia seguinte à avaliação clínica no Centro Hospitalar de S. João e o 2º momento será no dia da auditoria da qualidade do ar interior. -10 mL de urina. Amostras de urina serão coletadas em casa no início da manhã após um período de jejum de pelo menos 8 horas para medir metabólitos urinários de EDCs, como MBzP, MEP, MEHP. Após a coleta, as amostras de urina devem ser armazenadas a -20°C e entregues no dia da auditoria da qualidade do ar interno. Posteriormente, as amostras serão congeladas a -20ºC até a análise.

   O diagnóstico clínico de asma (padrão de referência) será realizado por 7 alergologistas diferentes atribuídos aleatoriamente a cada paciente.

4. Inspeção e caracterização do edifício Será utilizada uma lista de verificação para obter informações sobre possíveis fontes internas (produtos de consumo e de limpeza, móveis, tipo de piso), outras características do edifício (ex. idade, ventilação, etc.), reformas recentes e fontes externas, comportamentos dos ocupantes e informações sobre a presença de materiais específicos e uso dos consumidores também serão coletados.

5. Os EDCs de auditoria de ar interno serão medidos no ar interno e na poeira porque o ar interno foi identificado como uma importante fonte de exposição química, enquanto a poeira doméstica demonstrou ser um importante caminho de exposição. A poeira também fornece um registro de produtos químicos que têm sido usados ​​historicamente em casa, uma vez que os processos de degradação em ambientes fechados geralmente são lentos. Os produtos químicos visados ​​para análise incluíam ftalatos, bisfenol A, etanolaminas e éteres de glicol. Esses compostos foram selecionados com base em evidências de desregulação endócrina, exacerbação da asma, presença esperada em ambientes fechados e em produtos de consumo e compatibilidade com métodos analíticos desenvolvidos em estudos de exposição doméstica.

   As amostras de ar interno de EDCs serão coletadas usando cartuchos de amostragem de pesticidas pessoais URG (University Research Glassware; capela HilL, Nc), que serão colocados no quarto das crianças aproximadamente na altura da respiração. No final do período de amostragem, os amostradores URG serão armazenados a -4°C antes do envio para o laboratório. Para medir EDCs em pó, serão usados ​​sacos de aspiradores domésticos. Amostras de poeira serão coletadas de todas as superfícies do chão do quarto e também da superfície de objetos, como prateleiras, armários, batentes de portas e janelas, aparelhos de TV e áudio e computadores pessoais. O pó de cada saco será peneirado com tela metálica de 100µm e armazenado em frascos de vidro (pré-limpos com hexano) a -20°C até a realização das análises químicas.

   Os VOCs do ar interno dos quartos das crianças serão coletados por amostragem ativa, de acordo com procedimentos padronizados, ao mesmo tempo que a avaliação clínica, a fim de avaliar a influência dos VOCs ambientais pertinentes no teste clínico. A amostragem será realizada usando uma bomba de controle de fluxo de 5 L (SKC Inc. EUA) conectado a um tubo de sorção de aço inoxidável preenchido com 200 mg de Tenax TA 60/80 (Supelco). A amostragem começará no mesmo horário da avaliação clínica e será programada para terminar após uma hora, fornecendo uma amostra representativa dos VOCs do ar interno no momento da coleta do ar exalado. Ao final da amostragem, os tubos serão lacrados com tampas herméticas e transportados para o laboratório, onde serão armazenados em temperatura ambiente até a análise.

6. Análise laboratorial Compostos orgânicos voláteis e EDCs serão analisados ​​por nariz eletrônico (Cyranose 320). A análise multivariada será realizada para observar se o perfil de VOC dos participantes com asma é diferente daqueles sem asma. Taxas de classificação, área sob a curva ROC, sensibilidade e especificidade serão estimadas para os diferentes modelos.