A JOIN projekt: A levegő az asztma és allergia diagnosztizálásában és megelőzésében (JOIN)

Célok:

A JOIN projekt egyesíti az egészséggel és a beltéri környezettel kapcsolatos kutatási területeket, hogy hozzájáruljon egy új asztmadiagnosztikai módszer kifejlesztéséhez és validálásához a kilégzett VOC elemzésen keresztül. Ez a módszer érzékenyebb, specifikusabb és teljesen non-invazív. Ezen túlmenően a JOIN projekt felméri a beltéri környezetnek, nevezetesen az endokrin rendszert károsító anyagoknak való kitettség hatását a gyermekek asztma és allergia kialakulására. A projekt konkrét céljai a következők:

1. Osztályozza az asztmás gyermekeket és egészséges kontrollokat a kilélegzett VOC profilok segítségével;
2. Osztályozza az asztma fenotípusait a kilélegzett VOC-profilok segítségével;
3. Értékelje az exogén illékony szerves vegyületeknek való hosszan tartó expozíció hatását a kilégzett levegőmintákra;
4. Jellemezze a beltéri expozíciót az EDC-ként azonosított vegyi anyagok koncentrációjának mérésével a beltéri levegőben és az otthoni porban;
5. Értékelje az összefüggést a beltéri EDC-nek való kitettség és a gyermekek egészségi állapota között az asztmára/allergiára összpontosítva, valamint az allergiák és a légúti tünetek súlyosbodásával azoknál, akik már érzékenyek;
6. Vizsgálja meg, hogy mely építőanyagok és fogyasztási cikkek járulhatnak hozzá leginkább a gyermekek expozíciójához;
7. Értékelje az összefüggést az EDC-k beltéri expozíciója és a tüdőfunkció, a légúti gyulladás és válaszkészség, valamint a betegségek kilélegzett és vizelet biomarkerei között.

A projekt befejezése hozzájárulhat egy új asztmadiagnosztikai módszer validálásához, amely a valós klinikai kontextusban való bevezetése előtt áll.

A beltéri levegő minőségének auditálása lehetővé teszi az endokrin rendszert károsító anyagoknak és az egészségügyi hatásoknak való expozíciós folyamat jobb megértését, főként a gyermekek esetében. A projekt emellett értékeli és összehasonlítja a beltéri levegőben és a gyermekeknél az expozíció eredményeként kialakuló EDC-ket.

Munkaterv:

1. A vizsgált populáció kiválasztása és toborzása

   Ebben a projektben 75 6 és 18 év közötti gyermek felvételére számítanak (törvényes gyámjuk beleegyezésével) a S. João Kórház immunallergológiai osztályán végzett klinikai látogatások során. Minden résztvevőt tájékoztatnak a projekt céljairól és eljárásairól, és felkérik őket, hogy írják alá a beleegyező nyilatkozatot. Az összegyűjtött adatok bizalmasak, és a résztvevőknek jogukban áll bármikor eltávolítani adataikat a vizsgálatból.

   A törvényes gyámokkal való megegyezés alapján a résztvevők otthonába történő látogatásokat ütemezzük. A látogatások során EBC és vizeletmintát vesznek, valamint kilélegzett (nem kondenzált) levegőt.

2. Kérdőíves felmérés Egy önkitöltős, standardizált kérdőívet készítenek, amely az Asthma and Allergies in Childhood Nemzetközi Tanulmánya (ISAAC) alapján történik, amelyet a szülők/törvényes gondviselők töltenek ki otthon. Társadalmi-demográfiai és gazdasági információkat, dohányzási és ivási szokásokat, testápoló szerek használatát, családi betegségeket és táplálkozási szokásokat gyűjtenek. A gyermek légúti/allergiás egészségi állapotával, aktuális tüneteivel/diagnózisával (az elmúlt 3 hónapban) kapcsolatos kérdéseket is tartalmazni fog. Ezzel egyidejűleg meghatározzák a beltéri környezeti tényezők jellemzőit, például a lakás típusát, az épület korát, a padlóburkolat típusát, a szellőzést.

3. Klinikai értékelés és biológiai minták gyűjtése Az S. João Kórház Központjában immunoallerlógiai klinikai értékelésre járó gyermekeket felkérik, hogy vegyenek részt ebben a vizsgálatban. Elfogadáskor a spirometriás, a frakcionált kilégzett nitrogén-monoxid (FeNO) és a bőrszúrásos tesztek adatait lekérik a résztvevők klinikai aktájából. Közvetlenül a klinikai értékelés után a kilélegzett levegő kondenzátumot (EBC) összegyűjtik a gyerekektől úgy, hogy 10-15 percig lélegeznek egy kilégzett levegő kondenzációs rendszerbe (hordozható TurboDECCS). Az EBC mintákat -80ºC-on tárolják a laboratóriumi elemzésig.

   A gyermekotthonok beltéri levegőminőségi auditálása során további EBC mintákat gyűjtenek (hogy megértsék, van-e szignifikáns eltérés a kórházban vett mintákhoz képest), valamint a kilélegzett (nem kondenzált) levegőt. A kilélegzett levegőt 1 literes Tedlar® zacskók (SKC Inc.) segítségével gyűjtik össze. USA) előzőleg 3 nitrogénöblítéssel megtisztítva a gyártó utasításai szerint. A légzőzsákok kizárólag a levegő tárolására és szállítására szolgálnak, és már kifejlesztett és jóváhagyott termék. A résztvevőket megkérjük, hogy a levegővételt megelőző 2 órában ne nyeljenek ételt vagy ízesített italt. A gyerekeket arra utasítják, hogy mossa ki a szájukat vízzel, lélegezzen be, tartsa vissza a lélegzetét 5 másodpercig, majd lélegezze ki mélyen a Tedlar zsákba.

   Két pillanat alatt vizeletmintát vesznek a gyerekektől. Az első pillanat a klinikai értékelés utáni napon lesz a S. João Kórházközpontban, a 2. pillanat pedig a beltéri levegőminőségi audit napján lesz. Minden résztvevőnek előzetesen egy kereskedelmi forgalomban kapható polipropilén mintagyűjtő edényt kap, hogy 6 - 10 ml vizelet. A vizeletmintákat otthon, kora reggel, legalább 8 órás éheztetés után gyűjtik a vizelet EDC-k metabolitjainak, például MBzP, MEP, MEHP mérésére. A vizeletmintákat a gyűjtés után -20°C-on kell tárolni, és a beltéri levegőminőségi audit napján ki kell szállítani. Ezt követően a mintákat -20 °C-on lefagyasztják az elemzésig.

   Az asztma klinikai diagnózisát (referencia standard) 7 különböző allergológus végzi, akiket véletlenszerűen rendelnek hozzá minden egyes beteghez.

4. Épületellenőrzés és jellemzés Egy ellenőrző lista segítségével információt kapunk a lehetséges beltéri forrásokról (fogyasztói és tisztítószerek, bútorok, padlóburkolat típusa), egyéb épületjellemzőkről (pl. életkor, szellőzés stb.), a közelmúltban végzett felújítások és a kültéri források, a lakók viselkedése, valamint a konkrét anyagok jelenlétére és a fogyasztói felhasználásra vonatkozó információk is összegyűjtésre kerülnek.

5. A beltéri levegő auditálása során az EDC-ket a beltéri levegőben és a porban mérik, mivel a beltéri levegőt a vegyi expozíció fontos forrásaként azonosították, míg a háziporról kimutatták, hogy fontos expozíciós útvonal. A por az otthonokban hagyományosan használt vegyi anyagokat is feljegyzi, mivel a beltéri lebomlási folyamatok jellemzően lassúak. Az elemzés tárgyát képező vegyszerek között szerepelt a ftalátok, a biszfenol A, az etanol-aminok és a glikol-éterek. Ezeket a vegyületeket az endokrin zavarok, az asztma súlyosbodása, a beltéri és fogyasztási cikkekben való várható jelenlét, valamint a háztartási expozíciós vizsgálatok során kifejlesztett analitikai módszerekkel való kompatibilitás alapján választották ki.

   Az EDC-k beltéri levegőmintáit egy URG személyi peszticid-mintavevő patron (University Research Glassware; chapel Hill, Nc) segítségével gyűjtik, amelyeket a gyerekek hálószobájában helyeznek el körülbelül légzési magasságban. A mintavételi időszak végén az URG mintavevőket -4°C-on tárolják a laboratóriumba szállítás előtt. A porban lévő EDC-k méréséhez háztartási porszívózsákokat használnak. Pormintákat gyűjtenek a hálószoba padlójának minden felületéről, valamint tárgyak felületéről, például polcokról, szekrényekről, ajtókeretekről, ablakkeretekről, TV- és audiokészülékekről, valamint személyi számítógépekről. Az egyes zsákokból származó port 100 µm-es fémszitával átszitálják, és üvegedényekben (hexánnal előtisztítva) tárolják -20°C-on a kémiai elemzés elvégzéséig.

   A gyermekszobákban a beltéri levegő VOC-it aktív mintavétellel, szabványosított eljárások szerint gyűjtik a klinikai értékeléssel egy időben, hogy értékeljék a vonatkozó környezeti VOC-k hatását a klinikai tesztben. A mintavétel egy 5 literes áramlásszabályozó szivattyúval történik (SKC Inc. USA) 200 mg Tenax TA 60/80-zal (Supelco) töltött rozsdamentes acél szorpciós csőhöz csatlakoztatva. A mintavétel a klinikai értékeléssel egy időben kezdődik, és egy óra múlva fejeződik be, reprezentatív mintát adva a beltéri levegő VOC-jaiból a kilégzett levegő gyűjtésének időpontjában. A mintavétel végén a csöveket légmentesen záródó kupakkal lezárják és a laboratóriumba szállítják, ahol az elemzésig szobahőmérsékleten tárolják.

6. Laboratóriumi elemzés Az illékony szerves vegyületeket és az EDC-ket elektronikus orrral (Cyranose 320) elemzik. Többváltozós elemzést végeznek annak megfigyelésére, hogy az asztmás résztvevők VOC profilja eltér-e a nem asztmás résztvevőkétől. Az osztályozási arányokat, a ROC-görbe alatti területet, az érzékenységet és a specificitást megbecsülik a különböző modelleknél.