疑似 TITinopathy 肌病患者的诊断和表型-基因型相关性研究的改进 (DIAMYOTIT)
研究概览
详细说明
肌联蛋白病是由于肌联蛋白（肌节的一种巨大弹性蛋白）改变引起的遗传性骨骼肌和心肌病。 由于下一代测序 (NGS) 的广泛使用，titin 基因 (TTN) 正在成为神经肌肉疾病 (NMD) 的主要致病基因，具有高度的临床和等位基因异质性。 对表型变异性和遗传隐性或显性遗传方式的 titinopathies 的潜在机制知之甚少。 它们涉及肌联蛋白对肌节形成和稳定性的原始结构功能，以及它与其他蛋白质的相互作用。 TTN 中变异的影响是可变的、沉默的、隐性的或显性的，生物信息学工具对于解释它们的功能影响并不是真正有效的，这使得它们极难解释。 此外，TTN 变体在一般人群中非常常见。 由于 titin 的巨大尺寸 (3700kD) 和复杂性，TTN 变体对转录本和蛋白质的影响分析并不常见。 国际社会中很少有团队，但法国没有团队提出对 titin 进行蛋白质印迹 (WB) 分析作为诊断测试。 此外，该测试仅允许确认由截短突变引起的隐性 titinopathies 的诊断，这是罕见的情况（
该项目来自我们的 NGS 诊断结果，将是正在进行的 AFM 资助项目（申请 19958）的延续。 我们通过 NGS 在患有骨骼肌病（伴有或不伴有心肌病）的患者中鉴定出几种可能导致疾病的 TTN 变异。 感谢 AFM 资助的项目，我们分析了一些 TTN 变体对剪接的影响，我们目前正在实施实验条件来执行 titin WB。 此外，我们观察到 TTN 中大多数疑似致病性的非截短变异位于与肌球蛋白重链 (MHC) 相互作用的肌联蛋白域中。 在假设它们可能对肌节中肌动蛋白和 MHC 之间相互作用的稳定性产生有害影响的情况下，我们计划进行功能测试以评估它们在肌动蛋白-肌球蛋白相互作用中的后果。
本项目的具体目标是进行功能研究，以评估 TTN 变异对转录本和蛋白质的影响，以改进诊断方法，并对遗传模式和表型进行相关性研究。 该项目的创新方面是结合了几种分子和生化方法对 RNA（评估对患者骨骼肌肌动蛋白转录本转录和/或剪接的影响）、蛋白质（评估所有 TTN 变体对肌动蛋白数量的影响）和大小，通过 WB 分析肌肉活检）和蛋白质-蛋白质相互作用（评估位于 titin-MHC 相互作用域的 TTN 变体对与 MHC 相互作用的致病影响），我们将根据学术研究项目中报告的技术实施. 我们项目的实力还基于我们与神经病学家、神经儿科医生、病理学家和其他生物学专家的强大网络，在组织内的 NMDs 区域间参考中心和国家 titinopathies 网络中，以及对项目的影响神经学家（莫拉莱斯博士）通过他的博士论文，开展表型-基因型相关性研究。
TTN 基因中发现的变异的功能研究应该对患者的诊断有很大的影响，这对其管理和家族遗传咨询很重要。 实施的测试将提供给法国的 titinopathies 网络。 这应该可以解决大量没有明确诊断的患者的诊断，并指定肌病中titinopathies的参与频率。 改善肌钙蛋白病的诊断将产生重大的社会经济影响，因为它将降低迭代诊断测试带来的成本。
表型-基因型相关性研究将允许扩大 titinopathies 的突变和临床范围，并参与国际努力以了解 titinopathies 的分子基础，这是设计治疗方法的强制性第一步。 此外，基因确认开辟了开发源自患者组织的眼底病变细胞模型的途径。 这些模型将成为蛋白质组学和其他功能研究的基础，以破译 titinopaphies 的机制并指出可能成为药理学治疗目标的代谢途径。
由于这些原因，本申请将构成一个重要的、原创的和创新的发展，以有助于诊断和对 titinopathies 分子基础的认识。
研究类型
注册 (估计的)
联系人和位置
学习联系方式
- 姓名：Mireille COSSEE, MCU PH
- 电话号码：04 11 75 98 63
- 邮箱：mireille.cossee@inserm.fr
研究联系人备份
- 姓名：Fanny CARDON
- 邮箱：fanny-cardon@chu-montpellier.fr
学习地点
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-
Montpellier、法国、34090
- 招聘中
- CHU Montpellier
-
接触：
- mireille COSSEE
- 邮箱：Mireille Cossee <mireille.cossee@inserm.fr>
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参与标准
资格标准
适合学习的年龄
- 孩子
- 成人
- 年长者
接受健康志愿者
取样方法
研究人群
描述
纳入标准：
- 患者由神经科医生或儿科神经科医生跟随。
- 患有先天性或进行性近端或远端肌病的儿童或成人
- 通过 NGS 分析鉴定潜在致病性 TTN 基因中的变体
- 先前进行的肌肉活检
- 收集患者（或他的一位法定代表人，如果未成年）不反对参与本研究和收集必要的生物材料（肌肉）
- 参加或受益于社会保障计划的患者
排除标准：
- 没有肌肉采样
学习计划
研究是如何设计的？
设计细节
- 观测模型：仅案例
- 时间观点：预期
队列和干预
团体/队列 |
干预/治疗 |
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肌病疑似肌腱病患者
先前已鉴定出一种或多种潜在致病性 TTN 变异的肌病患者（指示病例和受影响的相关病例）。
先前进行的肌肉活检
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使用针对蛋白质 C-ter 和 N-Ter 的特异性抗体对巨型蛋白质进行蛋白质印迹分析
通过特定的蛋白质印迹和体外测试分析几种相互作用的蛋白质。
之前用于蛋白质印迹的样品将进行质谱分析
通过 RNAseq 分析我们队列中患有钛蛋白病的患者的肌肉基因表达
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研究衡量的是什么？
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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肌联蛋白相对量的测定
大体时间：注册
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Western blot评估：正常与否，如有异常则定性
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注册
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肌联蛋白相对大小的测量
大体时间：注册
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Western blot评估：正常与否，如有异常则定性
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注册
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
|---|---|---|
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测量相互作用蛋白质的后果
大体时间：2年内
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Western blot评价：正常与否
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2年内
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测量 TTN 变体对 titin 转录本的影响
大体时间：2年
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通过肌肉活检的 RT-PCR 研究进行评估
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2年
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表型-基因型相关性研究
大体时间：2.5年
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临床生物学数据的相关性
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2.5年
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疾病不同遗传方式的分子基础分析
大体时间：2.5年
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完整生物数据的综合分析及与家族数据的相关性
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2.5年
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通过体外研究测量相互作用水平
大体时间：2年内
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Western blot评价：正常与否
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2年内
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评估 TTN 变异对患者骨骼肌中肌联蛋白肽的数量和组成的影响
大体时间：2年内
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通过质谱分析
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2年内
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评估 TTN 变异对患者骨骼肌中 titin 表达和剪接的影响
大体时间：2年内
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使用 mRNA 的多聚 A 尾部选择方案
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2年内
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通过 RNAseq 数据的表达分析评估 TTN 变异对肌肉基因表达水平的影响
大体时间：2年内
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表达分析可以使用R软件和DESeq2软件进行。
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2年内
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评估 TTN 变体对肌肉蛋白伙伴的影响。
大体时间：2年内
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定量蛋白质组分析、质谱分析将使我们能够评估患者肌肉中肌肉蛋白质的数量、总体蛋白质谱
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2年内
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合作者和调查者
研究记录日期
研究主要日期
学习开始 (实际的)
初级完成 (估计的)
研究完成 (估计的)
研究注册日期
首次提交
首先提交符合 QC 标准的
首次发布 (实际的)
研究记录更新
最后更新发布 (估计的)
上次提交的符合 QC 标准的更新
最后验证
更多信息
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