Diagnosztikai és fenotípus-genotípus korrelációs vizsgálatok javítása TITinopathiára gyanús myopathiában szenvedő betegeknél (DIAMYOTIT)

A titinopátiák örökletes csontváz- és szívmiopátiák, amelyek a titin, a szarkomer óriás rugalmas fehérje megváltozása következtében alakulnak ki. A következő generációs szekvenálás (NGS) széles körben elterjedt alkalmazása miatt a titin gén (TTN) a neuromuszkuláris rendellenességek (NMD) fő okozói génjévé válik, nagy klinikai és allél heterogenitással. A titinopátiák fenotípusos variabilitásának és recesszív vagy domináns öröklődési módjának hátterében álló mechanizmusok kevéssé ismertek. Ezek magukban foglalják a titin primordiális szerkezeti funkcióit a szarkomer kialakulásában és stabilitásában, valamint más fehérjékkel való kölcsönhatásait. A variánsok hatásai a TTN-ben változóak, csendesek, recesszívek vagy dominánsak, a bioinformatikai eszközök pedig nem igazán hatékonyak funkcionális hatásuk értelmezésére, így rendkívül nehezen értelmezhetőek. Ezenkívül a TTN-változatok nagyon gyakoriak az általános populációban. A titin hatalmas mérete (3700 kD) és összetettsége miatt a TTN-variánsok transzkriptumokra és fehérjékre gyakorolt ​​következményeit nem gyakran vizsgálják. A nemzetközi közösségben kevés olyan csapat van, Franciaországban viszont nincs olyan csapat, amely a titin Western-blot (WB) elemzését javasolná diagnosztikai tesztként. Ezen túlmenően ez a teszt csak a csonkoló mutációk miatt kialakuló recesszív titinopátiák diagnózisának megerősítését teszi lehetővé, amelyek ritka helyzetek (

Ez a projekt az NGS diagnosztikai eredményeinkből származik, és egy folyamatban lévő AFM által finanszírozott projekt folytatása lesz (19958-as pályázat). Az NGS segítségével csontváz myopathiában szenvedő betegekben (kardiomiopátiával vagy anélkül) számos potenciálisan betegséget okozó TTN változatot azonosítottunk. Az AFM által finanszírozott projektnek köszönhetően elemeztük egyes TTN-változatok splicingre gyakorolt ​​hatását, és jelenleg kísérleti feltételeket vezetünk be a titin WB elvégzéséhez. Ezenkívül megfigyeltük, hogy a TTN-ben a legtöbb nem csonkoló variáns, amelyről feltételezhető, hogy patogén, a miozin nehéz lánccal (MHC) kölcsönhatásba lépő titin doménekben található. Abban a hipotézisben, hogy káros hatással lehetnek a titin és az MHC közötti kölcsönhatások stabilitására a szarkomerben, funkcionális tesztek végrehajtását tervezzük a titin-miozin kölcsönhatások következményeinek értékelésére.

A jelen projekt konkrét célja a TTN variánsok transzkriptumokra és fehérjékre gyakorolt ​​hatásának értékelésére szolgáló funkcionális vizsgálatok végrehajtása a diagnosztikai megközelítés javítása, valamint az öröklődési módokkal és a fenotípusokkal való korrelációs vizsgálatok elvégzése. A projekt innovatív aspektusa az RNS több molekuláris és biokémiai megközelítésének kombinációja (a betegek vázizomzatában a titin transzkriptumainak transzkripciójára és/vagy splicingre gyakorolt ​​hatásainak értékelése), fehérje (az összes TTN variáns titin mennyiségre gyakorolt ​​hatásának értékelése). és méret, WB elemzésekkel izombiopsziákon) és fehérje-fehérje kölcsönhatások (a titin-MHC kölcsönható doménekben található TTN variánsok patogén hatásának felmérése az MHC-vel való interakciókra), amelyeket az akadémiai kutatási projektekben bemutatott technológiák alapján fogunk megvalósítani. . Projektünk erőssége a neurológusokkal, neuro-gyermekorvosokkal, patológusokkal és más biológiai szakértőkkel kialakított erős hálózatunkon is alapul, a szervezeten belül az NMD-k interregionális referenciaközpontjában és a titinopátiák nemzeti hálózatában, valamint a projektben egy neurológus (Dr. Morales) doktori disszertációja révén fenotípus-genotípus korrelációs vizsgálatok elvégzésére.

A TTN génben azonosított variánsok funkcionális vizsgálatának erős hatást kell gyakorolnia a betegek diagnosztizálására, ami fontos a kezelés és a családi genetikai tanácsadás szempontjából. A végrehajtott tesztek elérhetőek lesznek a francia titinopátiák hálózata számára. Ennek meg kell oldania nagyszámú beteg diagnózisát egyértelmű diagnózis nélkül, és meg kell határoznia a titinopátiák myopathiákban való érintettségének gyakoriságát. A titinopátiák diagnózisának javítása jelentős társadalmi-gazdasági hatással jár, mivel csökkenti az iteratív diagnosztikai tesztek költségeit.

A fenotípus-genotípus korrelációs vizsgálatok lehetővé teszik a titinopátiák mutációs és klinikai spektrumának bővítését, valamint a titinopátiák molekuláris alapjainak megértésére irányuló nemzetközi erőfeszítésben való részvételt, ami a terápiás megközelítések kidolgozásának kötelező első lépése. Ezenkívül a genetikai megerősítés megnyitja az utat a titinopátia sejtmodelljeihez, amelyek a betegek szöveteiből származnak. Ezek a modellek képezik majd a proteomikai és egyéb funkcionális vizsgálatok alapját a titinopátiák mechanizmusának megfejtésére, és olyan metabolikus útvonalakra való rámutatására, amelyek a farmakológiai terápia célpontjai lehetnek.

Ezen okok miatt a jelen bejelentés jelentős, eredeti és innovatív fejlesztést jelent, amely hozzájárul a titinopátiák diagnózisához és molekuláris alapjainak megismeréséhez.