抗炎细胞因子和抗菌肽 LL-37 生物标志物在牙周病治疗中的作用。

'抗炎细胞因子和抗菌肽 LL-37 生物标志物在牙周病治疗中的作用。

1. 介绍

   牙周病是一种感染过程，由牙齿支撑解剖结构的破坏组成，这是对龈下菌斑的周病原性活动的炎症反应的结果，这会导致先天性炎症和适应性免疫反应。

   该疾病的临床表现取决于宿主和环境因素以及所涉及的特定微生物制剂。 细菌之间的相互关系和宿主的免疫防御机制构成了导致疾病的免疫病理学机制的基础。 在健康条件下，牙周微生物群的活动与宿主免疫反应之间存在平衡。

   在口腔的先天防御系统中，有几种抗菌肽参与其中，人类导管素 LL-37 就是其中之一。

   牙龈沟中 LL-37 等抗菌肽的活性被认为是牙周组织最大的防御机制之一。 牙龈上皮不仅构成了防止细菌侵入的物理屏障。 中性粒细胞迁移到交界上皮细胞，并在细菌斑块和下层上皮细胞之间形成屏障。 他们还生产抗菌肽，其中之一是 18 kDa (hCAP18)。 一旦中性粒细胞响应细菌侵袭而被激活，就会释放 LL-37，其活性与广谱抗生素相似。

   这种肽 (LL-37) 的完全缺失与侵袭性牙周炎有关，特别是在患有中性粒细胞缺乏症的患者中，例如患有 Morfan Kosmann 综合征的患者

   这项研究的性质旨在通过比较牙周病患者在接受基础牙周治疗前后使用非侵入性技术（例如牙缝液样本）来阐明 LL-37 在牙周病中的作用缩放和刨削）。 除上述外，促炎细胞因子和抗炎细胞因子（尤其是 IL-6、IL-4、IL-10）也将在牙周治疗前后进行评估。 获得的样品将通过免疫组织化学分析 (ELISA) 进行分析。 与观察到的临床发现相关的牙周治疗前后 LL-37 的定量可作为牙周病固有的免疫病理学反应的诊断生物标志物。

2. 研究问题的论证。 当前状态

   在过去几年中，科学界做出了巨大努力，试图了解与牙周病相关的复杂免疫病理过程以及牙周微生物群活动与宿主防御机制之间的关系。

   这项研究的相关性可能有助于更详细地了解抗菌肽 LL-37 在牙周病中的作用，不仅是因为它们具有杀菌作用，而且还因为它们在牙周治疗前后调节宿主的免疫反应及其活性. 缺乏对此事的研究表明需要对该主题进行进一步研究。

   最终，这项研究的结果可能会构成一种新的治疗方法的基础，该方法基于使用 LL-37 结合常规牙周治疗来帮助调节宿主的免疫反应。 这可能与易患牙周病或种植体周围疾病的患者特别相关，或者在对传统治疗方案有抗药性的特定情况下尤其相关。

3. 预期研究摘要

该研究的主要目的是研究 LL-37 在牙周组织免疫病理反应中的作用。 随后的目标是研究使用这种微生物肽作为牙周病的诊断、预后和治疗剂的可能性。

研究假设：牙周治疗前后LL-37水平存在显着数量差异，再评估时（牙周基础治疗-根面刮治和刨平后4-6周）LL-37显着降低).

零假设：牙周治疗前后LL-37水平无显着定量差异

本研究的目标是：

1. 确定健康患者和牙周病患者基线时牙槽液中的 LL-37、IL-6、IL-4 和 IL-10 水平是否不同，并将它们与牙周病的阶段/严重程度相关联。
2. 评估经过基本牙周治疗后，基线时 LL-37、IL-6、IL-4 和 IL-10 的这些水平是否与健康患者基线时的量化水平相似。
3. 对于牙槽液样本，评估受牙周病影响的牙齿中的 LL-37、IL-6、IL-4 和 IL-10 水平是否与同一个体的健康部位不同，或者上述指标是否存在显着差异牙周治疗前后。
4. 建立一个非侵入性协议来评估牙周治疗前后患者的免疫状态作为预后因素。

四、材料与方法

马德里国王胡安卡洛斯大学伦理委员会 (URJC) 的伦理批准已获得批准。 FCU-URJC 的“高级种植学、组织再生和种植体支持假体硕士”的选择符合纳入标准并同意参与研究的患者。

入选标准如下：年满 18 岁或以上，过去六个月内没有牙周病治疗史，并且没有可能禁忌牙周病治疗的医疗或牙科病史。 排除标准包括当前怀孕或哺乳、免疫系统疾病、最近 6 个月内的牙周治疗、最近 3 个月内的口服避孕药和抗生素使用情况、感染（如 HIV、肝炎和结核病）。 此外，第三磨牙因经常被阻生或拔除而被排除在 GCF 采样之外

吸烟者患者不会被排除在外，并将被归类为轻度吸烟者（少于 10 支香烟/天）或重度吸烟者（多于 10 支香烟/天）。

糖尿病患者也不会被排除在外，但会被识别并考虑在内。

研究中包括的所有患者将经历以下阶段：

1. 完整的牙周检查（探诊深度 (PD)、临床附着水平 (CAL)、菌斑指数 (PI)、探诊血 (BOP)）。

2. 患者将被分为两组：

   • 30名健康患者（对照）
   • 30名牙周病患者（测试-牙周炎I-II期（15名患者），牙周炎III-IV期（15名患者）。

由于缺乏体内研究，使用保守功效分析（G*Power 3.1.9.4 程序，2009）进行了简单的样本量计算。 简单大小（27 名受试者）基于双尾测试，有效大小为 0.05，字母错误概率为 0.05，平均值差异为 50%，标准偏差最大为平均值的 80%，并且0.90 的功效。

考虑到这些参数，估计每组 21-30 名患者的简单样本量。

还将按照制造商的方案使用 perio 纸（Periopaper，Applied Biosystems，Inc，Foster City，CA）获得缝隙液样品。 将用棉卷隔离要检查的牙齿并风干。 纸条将被引入牙龈沟中约 30 秒。 测试组患者的样本将取自牙周致病部位和健康部位。 被唾液或血液严重污染的样品将被丢弃。

样品将储存在 -80 C 的实验室 Departamento de Ciencias Básicas de la Salud, Edificio Departamental I, Fundación Clínica Universitaria, URJC (Alcorcon)。 获得所有样本后，将使用市售的人 LL-37 特异性 ELISA 试剂盒（HyCult Biotechnology，荷兰乌登）和市售的 IL-4、IL-4、IL 试剂盒对所有样本进行 ELISA 分析-6 和 IL-10（（Diaclone SAS；法国贝桑松；分别为 850.890、950.035 和 850.880）。

测试组的患者在第一次样本采集后将接受基础牙周治疗（牙根刮治和刨平）和口腔卫生指导的疗程。

将在 4-6 周进行重新评估预约，届时将获得两组（测试和对照）的新的沟液样本，以评估 LL-37 的数量与基线相比的任何统计显着差异测量记录。 之后，将按照上述方案通过执行 ELISA 测定再次检查样品。

一旦获得所有结果，将对样品进行统计分析。