A gyulladásgátló citokinek és az antimikrobiális LL-37 peptid biomarkerek szerepe a parodontális betegségek kezelésében.

„A gyulladásgátló citokinek és az antimikrobiális peptid LL-37 biomarkerek szerepe a parodontális betegségek kezelésében.

1. Bevezetés

   A parodontális betegség egy fertőző folyamat, amely a fog támasztó anatómiai struktúráinak pusztulásából áll, a szubgingivális bakteriális plakk periopatogén aktivitására adott gyulladásos válasz következtében, amely veleszületett, gyulladásos és adaptív immunválaszhoz vezet.

   A betegség klinikai megnyilvánulása a gazdaszervezettől és a környezeti tényezőktől, valamint az érintett mikrobiológiai ágenstől függ. A baktériumok közötti kölcsönhatás és a gazdaszervezet immunvédelmi mechanizmusai képezik a betegséghez vezető immunpatológiai mechanizmusok alapját. Egészséges körülmények között egyensúly van a periodontális mikrobiota aktivitása és a gazdaszervezet immunválasza között.

   A szájüreg veleszületett védekező rendszerében számos antimikrobiális peptid vesz részt, ezek egyike a humán cathelicidin LL-37.

   Az antimikrobiális peptidek, mint például az LL-37 aktivitása a gingivasulcusban a periodontum egyik legnagyobb védekező mechanizmusának tekinthető. A fogínyhám nemcsak fizikai akadályt jelent a bakteriális invázió elkerülésében. A neutrofilek a junkcionális hámba vándorolnak, és gátat hoznak létre a bakteriális plakk és az alatta lévő epitélium között. Antimikrobiális peptideket is termelnek, ezek egyike a 18 kDa (hCAP18). Amint a neutrofilek a bakteriális agresszió hatására aktiválódnak, LL-37 szabadul fel, amely hasonló aktivitással rendelkezik, mint egy széles spektrumú antibiotikum.

   Ennek a peptidnek (LL-37) a teljes hiánya agresszív parodontitishez kapcsolódik, különösen a neutrofil hiányban szenvedő betegeknél, például Morfan Kosmann szindrómában szenvedőknél.

   E kutatás célja az LL-37 fogágybetegségben betöltött szerepének tisztázása egy nem invazív technikák, például a crevicularis folyadék minták alkalmazásának összehasonlításával olyan betegeknél, akik periodontális betegségben szenvednek, az alapvető parodontális kezelés (gyökér) elvégzése előtt és után. méretezés és gyalulás). A fentieken túlmenően a pro és antiinflammatorikus citokinek (különösen az IL-6, IL-4, IL-10) hatását a parodontális kezelés előtt és után is értékeljük. A kapott mintákat immunhisztokémiai elemzéssel (ELISA) elemzik. Az LL-37 mennyiségi meghatározása a periodontális kezelés előtt és után a megfigyelt klinikai leletekkel összefüggésben a parodontális betegségben rejlő immunpatológiai válasz diagnosztikus biomarkereként szolgálhat.

2. A kutatási kérdés indoklása. Jelenlegi állapot

   Az elmúlt években a tudományos közösség nagy erőfeszítéseket tett annak érdekében, hogy megpróbálja megérteni a parodontális betegségekkel kapcsolatos összetett immunpatológiai folyamatokat, valamint a parodontális mikrobiota aktivitása és a gazdaszervezet védekező mechanizmusai közötti kapcsolatot.

   A kutatás relevanciája arra szolgálhat, hogy részletesebben megértsük az LL-37 antimikrobiális peptid szerepét a fogágybetegségben nemcsak baktericid hatásuk miatt, hanem a gazdaszervezet immunválaszának és aktivitásának modulálásában a parodontális kezelés előtt és után. . Az ezzel kapcsolatos tanulmányok hiánya a témával kapcsolatos további kutatások szükségességét tükrözi.

   Végső soron e kutatás eredményei egy új terápiás megközelítés alapját képezhetik, amely az LL-37 alkalmazásán alapul, hogy segítse a gazdaszervezet immunológiai válaszának modulálását a hagyományos parodontális kezeléssel kombinálva. Ez különösen fontos lehet azoknál a betegeknél, akik hajlamosak parodontális vagy periimplantális betegségek kialakulására, vagy bizonyos esetekben, amelyek ellenállnak a hagyományos kezelési alternatíváknak.

3. A tervezett kutatás összefoglalása

A tanulmány fő célja az LL-37 szerepének vizsgálata a periodontum immunpatológiai válaszában. A későbbiek célja annak vizsgálata, hogy ez a mikrobiális peptid diagnosztikai, prognosztikai és terápiás szerként szolgálhat a fogágybetegségek kezelésében.

Kutatási hipotézis: Jelentős kvantitatív különbségek vannak az LL-37 szintjében a parodontális kezelés előtt és után, az LL-37 szignifikáns csökkenése az újraértékeléskor (4-6 héttel a periodontális alapkezelés - gyökér pikkelysömör és gyalulás után) ).

Null hipotézis: Nincs jelentős mennyiségi különbség az LL-37 szintjében a parodontális kezelés előtt és után

Jelen tanulmány céljai a következők:

1. Határozza meg, hogy az egészséges és a parodontális betegségben szenvedő betegeknél eltérő az LL-37, IL-6, IL-4 és IL-10 szintje a hasnyálmirigy-folyadékban a kiinduláskor, és ez összefügg-e a parodontális betegség stádiumával/súlyosságával.
2. Értékelje, hogy az alapvető parodontális kezelés után ezek az LL-37, IL-6, IL-4 és IL-10 szintek a kiinduláskor hasonlóak-e az egészséges betegek kiindulási szintjeihez.
3. A hasnyálmirigy-folyadékminták tekintetében értékelje, hogy a parodontális betegség által érintett fogak LL-37, IL-6, IL-4 és IL-10 szintje eltér-e ugyanazon egyed egészséges helyeitől, vagy nincs-e szignifikáns különbség a fentiekben periodontális kezelés előtt és után.
4. Állítson be egy non-invazív protokollt a páciens immunológiai állapotának értékelésére a parodontális kezelés előtt és után, mint prognosztikai tényezőt.

4. Anyag és módszer

A madridi Rey Juan Carlos Egyetem Etikai Bizottsága (URJC) etikai jóváhagyást kapott. Az FCU-URJC „Master in Advanced Implantology, Tissue Regeneration and Implantated protézis” osztályának azon páciensei közül kiválasztottak, akik teljesítik a felvételi kritériumokat, és beleegyeznek, hogy részt vegyenek a vizsgálatban.

A beutazás kritériumai a következők voltak: 18 éves vagy idősebb, aki korábban nem részesült parodontális kezelésben az elmúlt hat hónapban, és nincs olyan orvosi vagy fogászati ​​előzmény, amely ellenjavallta volna a parodontális kezelést. A kizárási kritériumok közé tartozott a jelenlegi terhesség vagy szoptatás, immunológiai rendellenességek, parodontális kezelés az elmúlt 6 hónapban, orális fogamzásgátlás és antibiotikum-használat az elmúlt 3 hónapban, fertőzések (például HIV, hepatitis és tuberkulózis). Ezenkívül a harmadik őrlőfogakat kizárták a GCF-mintavételből, mert gyakran megütötték vagy kihúzták őket

A dohányzó betegeket nem zárják ki, és enyhén dohányzók (kevesebb, mint 10 cigaretta/nap) vagy erős dohányosok (több mint 10 cigaretta/nap) osztályozásra kerülnek.

A cukorbetegeket sem zárják ki, de azonosítják és számon tartják őket.

A vizsgálatba bevont összes beteg a következő szakaszokon megy keresztül:

1. Teljes parodontológiai vizsgálat (szondázási mélység (PD), klinikai kötődési szint (CAL), plakk index (PI), vér szondázáskor (BOP)).

2. A betegeket két csoportra osztják:

   • 30 egészséges beteg (kontroll)
   • 30 parodontális beteg (teszt- parodontitis I-II stádium (15 beteg), parodontitis III-IV stádium (15 beteg).

Az in vivo vizsgálatok hiánya miatt egyszerű mintaméret-számítást végeztünk konzervatív teljesítményanalízissel (G*Power 3.1.9.4 program, 2009). Az egyszerű méret (27 alany) egy kétoldali teszten alapult, amelynek effektív mérete 0,05, alfabetikus hiba valószínűsége 0,05, az átlagérték 50%-os eltérése, a szórások az átlagértékek maximum 80%-a és a teljesítmény 0,90.

Ezeket a paramétereket figyelembe véve egy egyszerű mintanagyságot 21-30 betegre becsülnek csoportonként.

A hasnyálmirigy-folyadék-mintákat a gyártó előírásai szerint perio papírok (Periopaper, Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA) alkalmazásával is veszik. A vizsgálandó fogakat pamuttekercsekkel izoláljuk és levegőn szárítjuk. A papírcsíkok körülbelül 30 másodpercig kerülnek az ínysulcusba. A vizsgálati csoport betegeinek mintáját periodontális patogén helyekről és egészséges helyekről veszik. A nyállal vagy vérrel erősen szennyezett mintákat el kell dobni.

A mintákat -80 C-on tárolják a Departamento de Ciencias Básicas de la Salud, Edificio Departamental I, Fundación Clínica Universitaria, URJC (Alcorcon) laboratóriumában. Az összes minta beszerzése után az összes minta ELISA-analízisét elvégzik egy speciális ELISA-készlettel, amely kereskedelmi forgalomban van a humán LL-37-hez (HyCult Biotechnology, Uden, Hollandia) és a kereskedelemben kapható készletekkel az IL-4, IL-4, IL számára. -6 és IL-10 ((Diaclone SAS; Besançon, Franciaország; 850.890, 950.035 és 850.880).

A tesztcsoportba tartozó páciensek az első mintavételt követően kapnak egy alapvető parodontális kezelést (gyökér pikkelyezés és gyalulás), valamint szájhigiénés utasításokat.

A 4-6. héten egy újraértékelési időpontra kerül sor, ahol mindkét csoportból új hasadékmintákat vesznek (teszt és kontroll), hogy értékelni lehessen az LL-37 mennyiségének statisztikailag szignifikáns különbségét az alapvonalhoz képest. méréseket rögzítettek. Ezt követően a mintákat újra megvizsgálják ELISA vizsgálatokkal a fent leírt protokoll szerint.

Az összes eredmény megszerzése után elvégzik a minták statisztikai elemzését.