乌干达结核病患者及其接触者血液中结核分枝杆菌的检测 (MICRO-LTBI_UG)

多年来，由于 LTBI 缺乏杆菌性质以及 LTBI 中结核杆菌细胞位置的不确定性，这种测试的开发被认为是不现实的。 然而，我们和其他人最近报告说，在高负担和低负担环境中的潜伏感染结核病接触者的外周血中都可以检测到 Mtb DNA。 在我们的研究中，利用数字聚合酶链反应 (dPCR) 检测埃塞俄比亚结核病接触者的外周血单核细胞 (PBMC) 亚群中的 Mtb DNA，在 CD34+ PBMC（造血干细胞 [HSC] 和他们的祖细胞）与CD34-PBMC，但并不限于他们。 异烟肼预防性治疗 (IPT) 降低了在 PBMC 中检测到 Mtb DNA 的参与者比例，表明该信号是动态的，并表明 Mtb DNA 的存在可能反映了活杆菌的存在。 我们还使用靶向下一代测序 (tNGS) 对 PBMC 提取物中的 Mtb DNA 进行了测序，以揭示导致抗菌药物耐药性的突变。

这些令人兴奋的结果证明了开发 NAAT 用于外周血 LTBI 检测和基因组耐药性测试的潜力。 然而，关于有症状个体血液中 Mtb DNA 的检测是否与血液中杆菌的可视化或培养能力相关仍然存在疑问，这已经在活动性结核病患者中进行了。 此外，我们现有的使用 dPCR 检测 CD34+ PBMC 中 Mtb DNA 的方法目前不适合现场使用，因为样品需要漫长的实验室处理。 GeneXpert 平台可以在不到 2 小时内给出结果，此前曾用于检测 HIV 感染的活动性结核病患者全血中的 Mtb DNA。 Xpert® MTB/RIF Ultra 检测的灵敏度（Xpert Ultra 的检测限 [LOD] 为 15.6 集落形成单位 [CFU]/ml，而原始 Xpert® MTB/RIF [检测的检测限 [LOD] 为 112.6 CFU/ml）足以检测埃塞俄比亚和乌干达潜伏感染结核病接触者血液中的结核分枝杆菌 DNA（20 至 1000 个拷贝）大多数 Mtb DNA 阳性个体中存在 rpoB）。 然而，此前尚未尝试使用该平台检测潜伏感染者血液中的结核分枝杆菌。 最后，我们希望通过比较最近与历史结核病接触者中 Mtb DNA 的检测结果，以及将活动性结核病患者作为阳性对照组，来扩展知识。

因此，我们建议开展一项研究，比较不同方法检测结核病患者外周血中结核分枝杆菌和基因组耐药性的敏感性，以及乌干达坎帕拉最近与远程暴露的无症状结核病接触者的敏感性。

研究目标 主要目标

本研究的主要目的是确定在乌干达坎帕拉招募的近期结核病接触者的血液中是否可以检测到结核分枝杆菌 (Mtb)，使用以下方法之一：

• 数字PCR
• GeneXpert® MTB/RIF Ultra (Cepheid)
• 荧光显微镜
• 血培养
• 靶向下一代测序

次要目标

这项研究的次要目标是：

1. 确定在相同环境下使用相同方法招募的远程暴露（历史）结核病接触者的血液中是否存在结核分枝杆菌。
2. 确定在相同环境下使用相同方法招募的新诊断活动性结核病患者的血液中是否可以检测到 Mtb。

3. 确定使用上述方法检测血液中的结核分枝杆菌是否与宿主免疫反应的以下任何生物标志物相关：

   • QFT-Plus
   • 早期结核病的血液 RNA 特征
   • 抗体谱
4. 确定从肺结核指示病例的痰/血液中分离出的结核分枝杆菌菌株在基因上是否与其最近接触者的血液中检测到的菌株相同。

主要终点 使用数字 PCR 在外周血中检测到 Mtb DNA 的结核病患者及其接触者的比例。

次要终点

1. 可以使用以下方法在外周血中检测到 Mtb DNA 的结核病患者及其接触者的比例：

   • GeneXpert® MTB/RIF Ultra (Cepheid)
   • 荧光显微镜
   • 血培养
   • 靶向下一代测序

2. 以下任一检测结果呈阳性的结核病患者及其接触者的比例：

   • QFT-Plus
   • 早期结核病的血液 RNA 特征
   • 抗体谱
3. 从肺结核指示病例的痰/血液中分离出的结核分枝杆菌菌株的基因序列以及这些参与者及其无症状家庭接触者的血液。