Påvisning af Mycobacterium Tuberculosis i blod fra TB-patienter og deres kontakter i Uganda (MICRO-LTBI_UG)

I mange år blev udviklingen af ​​en sådan test ikke anset for realistisk på grund af den paucibacillære karakter af LTBI og usikkerhed med hensyn til den cellulære placering af Mtb-baciller i LTBI. Men vi og andre har for nylig rapporteret, at Mtb-DNA kan påvises i det perifere blod fra latent inficerede TB-kontakter i både høj- og lavbelastningsindstillinger. I vores undersøgelser, som brugte digital polymerasekædereaktion (dPCR) til at detektere Mtb-DNA i perifere blodmononukleære celler (PBMC) undergrupper af TB-kontakter i Etiopien, blev signalet detekteret hyppigere i ekstrakter af CD34+ PBMC (hæmatopoietiske stamceller [HSC] og deres forfædre) vs. CD34-PBMC, men det var ikke begrænset til dem. Administration af isoniazid-forebyggende terapi (IPT) reducerede andelen af ​​deltagere, hvor Mtb-DNA kunne påvises i PBMC, hvilket viser, at dette signal er dynamisk og antyder, at tilstedeværelsen af ​​Mtb-DNA kan afspejle tilstedeværelsen af ​​levedygtige baciller. Vi sekventerede også Mtb-DNA i PBMC-ekstrakter ved hjælp af målrettet næste generations sekventering (tNGS) for at afsløre mutationer, der giver antimikrobiel lægemiddelresistens.

Disse spændende resultater demonstrerer potentialet for udvikling af en NAAT til påvisning og genomisk lægemiddelresistenstest af LTBI i perifert blod. Der er dog stadig spørgsmål om, hvorvidt påvisning af Mtb-DNA i blodet hos symptomatiske individer associerer med evnen til at visualisere eller dyrke baciller i blod, hvilket er blevet gjort hos patienter med aktiv TB. Desuden er vores eksisterende metode til påvisning af Mtb-DNA i CD34+ PBMC ved hjælp af dPCR i øjeblikket ikke egnet til feltbrug, da prøver kræver langvarig laboratoriebehandling. GeneXpert-platformen, som kan give resultater på mindre end 2 timer, er tidligere blevet brugt til at påvise Mtb-DNA i fuldblod fra HIV-smittede patienter med aktiv TB. Følsomhed af Xpert® MTB/RIF Ultra-analysen (Xpert Ultra, som har en detektionsgrænse [LOD] på 15,6 kolonidannende enheder [CFU]/ml mod 112,6 CFU/ml for den originale Xpert® MTB/RIF [assay) er tilstrækkelig til at påvise Mtb-DNA i det område, der er påvist i blod fra latent inficerede TB-kontakter i Etiopien og Uganda (20 til 1000 kopier af rpoB i størstedelen af ​​Mtb DNA-positive individer). Påvisning af Mtb i blod fra latent inficerede individer er dog ikke tidligere blevet forsøgt ved hjælp af denne platform. Endelig ønsker vi at udvide viden ved at sammenligne påvisning af Mtb-DNA i nyere vs. historiske TB-kontakter og ved at inkludere patienter med aktiv TB som en positiv kontrolgruppe.

Vi foreslår derfor at udføre en undersøgelse for at sammenligne følsomheden af ​​forskellige metoder til påvisning af Mtb og genomisk lægemiddelresistens i perifert blod fra TB-patienter og for nylig vs. fjernudsatte asymptomatiske TB-kontakter i Kampala, Uganda.

Studiemål Primært mål

Det primære formål med denne undersøgelse er at bestemme, om Mycobacterium tuberculosis (Mtb) kan påvises i blodet fra nylige TB-kontakter, rekrutteret i Kampala, Uganda, ved hjælp af en af ​​følgende metoder:

• Digital PCR
• GeneXpert® MTB/RIF Ultra (Cepheid)
• Fluorescensmikroskopi
• Blodkultur
• Målrettet næste generations sekvensering

Sekundære mål

Sekundære mål for denne undersøgelse er:

1. For at afgøre, om Mtb forbliver i blodet af fjernudsatte (historiske) TB-kontakter, rekrutteret i samme omgivelser og ved hjælp af de samme metoder.
2. At afgøre, om Mtb kan påvises i blodet hos patienter med nyligt diagnosticeret aktiv TB, rekrutteret i samme omgivelser og ved hjælp af de samme metoder.

3. For at fastslå, om påvisning af Mtb i blod ved hjælp af metoderne ovenfor associerer med nogen af ​​følgende biomarkører for værtens immunrespons:

   • QFT-Plus
   • Blod-RNA-signaturer for begyndende tuberkulose
   • Antistofprofiler
4. For at bestemme, om Mtb-stammer isoleret fra sputum/blod fra indekstilfælde med pulmonal TB er genetisk identiske med dem, der er påvist i blodet fra deres seneste kontakter.

Primært endepunkt Andel af TB-patienter og deres kontakter, hvor Mtb-DNA kan påvises i perifert blod ved hjælp af digital PCR.

Sekundære endepunkter

1. Andel af TB-patienter og deres kontakter, hvor Mtb-DNA kan påvises i perifert blod ved hjælp af følgende metoder:

   • GeneXpert® MTB/RIF Ultra (Cepheid)
   • Fluorescensmikroskopi
   • Blodkultur
   • Målrettet næste generations sekvensering

2. Andel af TB-patienter og deres kontakter med positive resultater for en af ​​følgende analyser:

   • QFT-Plus
   • Blod-RNA-signaturer for begyndende tuberkulose
   • Antistofprofiler
3. Genetiske sekvenser af Mtb-stammer isoleret fra sputum/blod fra indekstilfælde med pulmonal TB og blod fra disse deltagere og deres asymptomatiske husstandskontakter.