Detección de Mycobacterium tuberculosis en la sangre de pacientes con tuberculosis y sus contactos en Uganda (MICRO-LTBI_UG)

Durante muchos años, el desarrollo de una prueba de este tipo no se consideró realista debido a la naturaleza paucibacilar de la LTBI y a la incertidumbre respecto de la ubicación celular de los bacilos de Mtb en la LTBI. Sin embargo, nosotros y otros hemos informado recientemente que el ADN de Mtb se puede detectar en la sangre periférica de contactos con tuberculosis latente, tanto en entornos de alta como de baja carga. En nuestros estudios, que utilizaron la reacción en cadena de la polimerasa digital (dPCR) para detectar ADN de Mtb en subconjuntos de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de contactos de tuberculosis en Etiopía, la señal se detectó con mayor frecuencia en extractos de PBMC CD34+ (células madre hematopoyéticas [HSC] y sus progenitores) vs. CD34-PBMC, pero no se limitó a ellos. La administración de terapia preventiva con isoniazida (IPT) redujo la proporción de participantes en quienes se pudo detectar ADN de Mtb en PBMC, lo que demuestra que esta señal es dinámica y sugiere que la presencia de ADN de Mtb puede reflejar la presencia de bacilos viables. También secuenciamos el ADN de Mtb en extractos de PBMC mediante secuenciación dirigida de próxima generación (tNGS) para revelar mutaciones que confieren resistencia a los medicamentos antimicrobianos.

Estos interesantes resultados demuestran el potencial para el desarrollo de una NAAT para la detección y pruebas genómicas de resistencia a fármacos de LTBI en sangre periférica. Sin embargo, quedan dudas sobre si la detección de ADN de Mtb en la sangre de individuos sintomáticos se asocia con la capacidad de visualizar o cultivar bacilos en la sangre, lo que se ha hecho en pacientes con tuberculosis activa. Además, nuestro método existente para la detección de ADN de Mtb en PBMC CD34+ mediante dPCR no es actualmente adecuado para uso en el campo, ya que las muestras requieren un procesamiento de laboratorio prolongado. La plataforma GeneXpert, que puede dar resultados en menos de dos horas, se ha utilizado anteriormente para detectar ADN de Mtb en sangre total de pacientes infectados por el VIH con tuberculosis activa. Sensibilidad del ensayo Xpert® MTB/RIF Ultra (Xpert Ultra, que tiene un límite de detección [LOD] de 15,6 unidades formadoras de colonias [UFC]/ml versus 112,6 UFC/ml para el [ensayo] Xpert® MTB/RIF original es suficiente para detectar ADN de Mtb en el rango demostrado en la sangre de contactos con tuberculosis latente en Etiopía y Uganda (20 a 1000 copias de rpoB en la mayoría de las personas con ADN positivo para Mtb). Sin embargo, hasta ahora no se había intentado detectar Mtb en sangre de personas con infección latente utilizando esta plataforma. Finalmente, deseamos ampliar el conocimiento comparando la detección de ADN de Mtb en contactos recientes con tuberculosis histórica, e incluyendo pacientes con tuberculosis activa como grupo de control positivo.

Por lo tanto, proponemos realizar un estudio para comparar la sensibilidad de diferentes metodologías para la detección de Mtb y resistencia a medicamentos genómicos en sangre periférica de pacientes con tuberculosis y contactos asintomáticos con tuberculosis recientemente expuestos versus expuestos de forma remota en Kampala, Uganda.

Objetivos del estudio Objetivo principal

El objetivo principal de este estudio es determinar si Mycobacterium tuberculosis (Mtb) se puede detectar en la sangre de contactos recientes con tuberculosis, reclutados en Kampala, Uganda, utilizando cualquiera de los siguientes métodos:

• PCR digitales
• GeneXpert® MTB/RIF Ultra (Cefeida)
• Microscopía de fluorescencia
• hemocultivo
• Secuenciación dirigida de próxima generación

Objetivos secundarios

Los objetivos secundarios de este estudio son:

1. Determinar si Mtb persiste en la sangre de contactos (históricos) de tuberculosis remotamente expuestos, reclutados en el mismo entorno y utilizando los mismos métodos.
2. Determinar si Mtb se puede detectar en la sangre de pacientes con tuberculosis activa recién diagnosticada, reclutados en el mismo entorno y utilizando los mismos métodos.

3. Establecer si la detección de Mtb en sangre utilizando los métodos anteriores se asocia con alguno de los siguientes biomarcadores de la respuesta inmune del huésped:

   • QFT-Plus
   • Firmas de ARN sanguíneo para tuberculosis incipiente
   • Perfiles de anticuerpos
4. Determinar si las cepas de Mtb aisladas del esputo/sangre de casos índice con tuberculosis pulmonar son genéticamente idénticas a las detectadas en la sangre de sus contactos recientes.

Criterio de valoración principal Proporción de pacientes con tuberculosis y sus contactos en quienes se puede detectar ADN de Mtb en sangre periférica mediante PCR digital.

Criterios de valoración secundarios

1. Proporción de pacientes con tuberculosis y sus contactos en quienes se puede detectar ADN de tuberculosis en sangre periférica mediante los siguientes métodos:

   • GeneXpert® MTB/RIF Ultra (Cefeida)
   • Microscopía de fluorescencia
   • hemocultivo
   • Secuenciación dirigida de próxima generación

2. Proporción de pacientes con tuberculosis y sus contactos con resultados positivos en cualquiera de las siguientes pruebas:

   • QFT-Plus
   • Firmas de ARN sanguíneo para tuberculosis incipiente
   • Perfiles de anticuerpos
3. Secuencias genéticas de cepas de Mtb aisladas del esputo/sangre de casos índice con tuberculosis pulmonar y de la sangre de estos participantes y sus contactos domésticos asintomáticos.