补充Omega-3后的肌肉恢复

研究问题 补充高剂量omega-3八周是否能减少年轻男性高强度离心运动引起的肌肉损伤？ 对离心运动的反应是否与omega-3脂肪酸衍生的氧脂素增加有关？ 假设 长期补充（8周）高剂量omega-3（3克/天）将增加血液中氧脂素的浓度，这与年轻男性在离心运动方案后较少的肌肉损伤相关。

总体目标 确定八周高剂量omega-3脂肪酸补充对年轻男性高强度离心运动后血液氧脂素水平和肌肉损伤间接标志物的影响。

具体目标

1. 确定八周高剂量omega-3脂肪酸补充对年轻男性高强度离心运动后血液氧脂素水平的影响。
2. 确定八周高剂量omega-3脂肪酸补充对年轻男性高强度离心运动后肌肉功能和肌肉损伤标志物的影响。
3. 在年轻男性中，将血液氧脂素水平与高剂量omega-3脂肪酸补充前后单次离心运动引起的肌肉功能和肌肉损伤标志物变化相关联。

方法学 本研究采用实验性、前瞻性、双盲设计。 样本量：基于α水平0.05和检验效能（1-β）0.8，样本量计算确定每组至少12名受试者，假设离心运动后omega-3组和对照组之间最大力量损失差异估计为22%（效应量=1.06），基于先前研究（1）。 然而，每组将招募15名参与者以考虑20%的退出率。

方法：将通过海报和社交媒体广告招募30名年轻男性。 参与者将被随机双盲分配到两个补充组：（a）安慰剂（黄色麦芽糊精）或（b）omega-3（EPA和DHA）。 在补充期开始前，参与者将接受静脉采血、肌肉损伤间接标志物测试、摄氧量测试以及单腿离心运动方案（6组10次重复，强度为1次重复最大值的80%）。 离心运动后立即、1、2、24、48、72和96小时，将评估肌肉损伤并获取静脉血样。 次日，参与者将开始为期8周的omega-3或安慰剂补充方案。 补充期结束后，参与者将进行与开始时相同的测试，并在对侧腿部进行离心运动。

排除标准：参与者在研究开始前6个月内不得进行规律的力量训练。 参与者还不得服用影响炎症或心血管运动反应的药物，且必须体重指数低于30公斤/平方米。 最后，参与者每周食用鱼类不得超过两次，且在研究前三个月内不得服用任何omega-3补充剂或对鱼类过敏。 参与者将被要求接种新冠疫苗。 参与者在提供伦理委员会批准的书面知情同意书之前，将充分了解实验程序的性质和可能风险。

补充：参与者将每天补充5粒胶囊（5克/天）Omega Up OMEGA 3（2.5克/天DHA和0.5克/天EPA）或安慰剂。 所用剂量符合欧洲食品安全局（EFSA）的建议，已被证明安全，能融入细胞膜，并对整体健康产生显著改善（2,3）。

离心运动方案：离心运动方案包括6组10次45度腿举，仅在离心阶段以1RM的80%强度进行，组间休息90秒，单腿执行（4）。 运动的向心阶段将由一名研究人员完成。

调查：将进行两项调查，第一项是食物消费频率调查，侧重于量化饮食中omega-3脂肪酸的平均摄入量。 第二项将使用经过验证的IPAQ问卷来量化参与者的身体活动（5）。

摄氧量测试：参与者将在自行车测功计（Lifecycle 9500HR；LifeFitness，美国伊利诺伊州罗斯蒙特）上进行递增测试。 将获得最大功率和峰值摄氧量值。 测试将从50瓦开始4分钟，每分钟增加25瓦直至力竭（6）。

最大等长力量（MVC）：将在配备测力传感器的股四头肌训练椅（Reverse S，美国）上以膝关节屈曲90度测量双腿膝伸肌的MVC。 基于此评估，将计算力量发展率（RFD）作为肌肉僵硬度和功能的更敏感标志物。

肌肉疼痛：将使用视觉模拟量表（100厘米）评估坐姿和从椅子上站立3次时的大腿疼痛，其中0表示无疼痛，100表示最大疼痛。

大腿围：将测量运动腿的中部区域。 由同一检查者测量三次，这三测量的平均值将用于统计分析。 将使用无弹性卷尺（Lufkin Executive Thinline，美国马里兰州）（7）肌酸激酶（CK）活性：将从血样（下方）中提取35微升，并分析血液中的CK活性（Reflotron，罗氏）。

血样：将获取静脉血样并立即离心以获得血浆（1000g，10分钟，4°C）和红细胞部分（3000×g，10分钟，20°C）。 两部分将在-80°C冷冻。

磷脂脂肪酸组成（血液和红细胞脂肪酸分析）：将根据Bligh和Dyer（8）的方法，添加BHT，从红细胞和血浆中定量提取总脂质。 将根据Morrison和Smith（9）的方法制备红细胞和血浆的脂肪酸甲酯（FAME）。 FAME将用0.5毫升己烷提取。 FAME将通过气相液相色谱在安捷伦设备（型号7890B，美国加利福尼亚州圣克拉拉）上进行鉴定和定量，该设备配备毛细管柱（安捷伦HP-88，100米×0.250毫米；内径0.25微米）和火焰离子化检测器（FID）。 通过比较未知样品的保留时间和峰面积百分比值与商业脂质标准品（Nu-Chek Prep Inc.，美国明尼苏达州伊莱西安）来实现FAME的鉴定和定量。 C23:0将用作内标（Nu-Chek Prep Inc.，美国明尼苏达州伊莱西安）。 数据将使用惠普Chemstation软件系统处理。

血浆脂质介质的SPM分析：血浆样品（400微升）将按先前描述（10）通过HPLC/MS/MS对氧脂素进行重复分析。 简言之，氘代内标（Cayman Chemicals）将添加到血浆样品中，并在使用Strata-X-SPE柱（Phenomenex）进行固相萃取前调节pH值<3.0，柱子先用甲醇预处理，然后用pH 3.0的水预处理。 样品将加载到柱上，洗涤，游离SPM用100%甲醇洗脱。 洗脱液随后将干燥并重新溶解在溶剂A（水/乙腈/甲酸，70/30/0.02 v/v/v）中，用于通过HPLC/MS/MS进行氧脂素分析，使用Luna 5微米C18柱（100 Å，250×2.0毫米，Phenomenex）在岛津Nexera XR HPLC上，耦合到ABSciex QTRAP 6500 MS，在负模式下运行电喷雾电离。 氧脂素将使用以下梯度洗脱：0至1分钟为100%溶剂A，然后溶剂B（乙腈/异丙醇，50/50，v/v）在3分钟时线性增加至25%，11分钟时45%，13分钟时60%，18分钟时75%，18.5分钟时90%。 随后溶剂B保持在90%直到20分钟，21分钟时降至0%，并保持直到25分钟。 氧脂素将使用稳定同位素稀释法定量。

统计分析：结果将以平均值±标准差表示。 差异将使用双向方差分析（ANOVA）与Fisher事后检验（LSD）进行评估，用于组间和评估时间点的多重比较。 p值<0.05将被认为具有统计学意义。