Восстановление мышц после приема омега-3

Исследовательский вопрос: Снижает ли прием высоких доз омега-3 в течение восьми недель повреждение мышц, вызванное сессией высокоинтенсивных эксцентрических упражнений у молодых мужчин? Связан ли ответ на эксцентрические упражнения с увеличением оксилипинов, производных от омега-3 жирных кислот? Гипотеза: Длительный прием (8 недель) высоких доз омега-3 (3 г/сут) увеличит концентрацию оксилипинов в крови, что будет ассоциировано с меньшим повреждением мышц после протокола эксцентрических упражнений у молодых мужчин.

Общая цель: Определить эффект восьминедельного приема высоких доз омега-3 жирных кислот на уровни оксилипинов в крови и косвенные маркеры повреждения мышц после высокоинтенсивных эксцентрических упражнений у молодых мужчин.

Конкретные цели:

1. Определить эффект восьминедельного приема высоких доз омега-3 жирных кислот на уровни оксилипинов в крови после высокоинтенсивных эксцентрических упражнений у молодых мужчин.
2. Определить эффект восьминедельного приема высоких доз омега-3 жирных кислот на мышечную функцию и маркеры повреждения мышц после высокоинтенсивных эксцентрических упражнений у молодых мужчин.
3. Связать уровни оксилипинов в крови с изменениями мышечной функции и маркерами повреждения мышц, вызванными сессией эксцентрических упражнений, до и после приема высоких доз омега-3 жирных кислот у молодых мужчин.

Методология: Это экспериментальное проспективное двойное слепое исследование. Размер выборки: Расчет размера выборки устанавливает минимум 12 субъектов на группу на основе уровня α 0.05 и мощности (1-β) 0.8, предполагая оцененную максимальную разницу потери силы 22% после эксцентрических упражнений (размер эффекта = 1.06) между группами омега-3 и контроля, основанную на предыдущем исследовании (1). Однако будет набрано 15 участников на группу для учета 20% отсева.

Методология: Тридцать молодых мужчин будут набраны через плакаты и рекламу в социальных сетях. Участники будут случайным образом распределены двойным слепым методом в две группы добавок: (a) плацебо (желтый мальтодекстрин) или (b) омега-3 (ЭПК и ДГК). До начала периода приема добавок участники пройдут забор венозной крови, тестирование косвенных маркеров повреждения мышц, тестирование потребления кислорода и протокол эксцентрических упражнений на одной ноге (6 подходов по 10 повторений при 80% от 1 повторного максимума). Сразу после, через 1, 2, 24, 48, 72 и 96 часов после сессии эксцентрических упражнений будет оценено повреждение мышц и получены образцы венозной крови. На следующий день участники начнут свой 8-недельный протокол приема омега-3 или плацебо. После периода приема добавок участники выполнят те же тесты, что и в начале, и проведут сессию эксцентрических упражнений на противоположной ноге.

Критерии исключения: Участники не должны были выполнять регулярные силовые тренировки в течение 6 месяцев до начала исследования. Участники также не должны принимать лекарства, влияющие на воспаление или сердечно-сосудистые реакции на упражнения, и должны иметь ИМТ менее 30 кг/м². Наконец, участники не должны потреблять рыбу более двух раз в неделю и не должны принимать какие-либо добавки омега-3 в течение трех месяцев до исследования или иметь аллергию на рыбу. У участников будет запрошена вакцинация от Covid-19. Участники будут полностью проинформированы о природе и возможных рисках экспериментальных процедур перед предоставлением их письменного информированного согласия, утвержденного Комитетом по этике.

Добавки: Участники будут получать 5 капсул в день (5 г/сут) Omega Up OMEGA 3 (2.5 г/сут ДГК и 0.5 г/сут ЭПК) или плацебо. Используемая доза соответствует рекомендации EFSA (Европейское агентство по безопасности пищевых продуктов), показала безопасность, включение в клеточные мембраны и значительные улучшения общего здоровья (2,3).

Протокол эксцентрических упражнений: Протокол эксцентрических упражнений будет состоять из 6 подходов по 10 повторений жима ногами под 45°, выполняемых при 80% от 1ПМ только в эксцентрической фазе, с 90 секундами отдыха между подходами, выполняемыми на одной ноге (4). Концентрическая фаза движения будет выполняться одним из исследователей.

Опросы: Будут проведены два опроса, первый о частоте потребления пищи, сфокусированный на количественной оценке среднего потребления омега-3 жирных кислот из рациона. Второй, валидированный опросник IPAQ будет использован для количественной оценки физической активности участников (5).

Тест потребления кислорода: Участники выполнят инкрементный тест на велоэргометре (Lifecycle 9500HR; LifeFitness, Розмонт, Иллинойс, США). Будут получены значения максимальной мощности и VO2peak. Тест начнется с 4 минут при 50 Вт и будет увеличиваться на 25 Вт каждую минуту до изнеможения (6).

Максимальная изометрическая сила (MVC): MVC разгибателей колена обеих ног будет измерена при 90° сгибания колена на тренажере для квадрицепсов, оснащенном тензодатчиком (Reverse S, США). Из этой оценки будет рассчитана скорость развития силы (RFD) как более чувствительный маркер мышечной жесткости и функции.

Мышечная боль: Боль в бедре при сидении и вставании со стула 3 раза будет оценена с использованием визуальной аналоговой шкалы (100 см), где 0 - отсутствие боли, а 100 - максимальная боль.

Окружность бедра: Тренируемая нога будет измерена в средней области. Измерения будут проведены три раза одним и тем же экзаменатором, и среднее этих трех измерений будет использовано для статистического анализа. Будет использована нерастяжимая измерительная лента. (Lufkin Executive Thinline, Мэриленд, США)(7) Активность креатинкиназы (КК): 35 мкл будет извлечено из образца крови (ниже) и проанализировано на активность КК в крови (Reflotron, Roche).

Образцы крови: Будут получены образцы венозной крови и немедленно центрифугированы для получения плазмы (1000 g в течение 10 минут при 4°C) и фракции эритроцитов (3000 × g в течение 10 минут при 20°C). Обе фракции будут заморожены при -80°C.

Состав жирных кислот фосфолипидов (анализ жирных кислот в крови и Эр): Количественная экстракция общих липидов из эритроцитов и плазмы будет выполнена согласно Блайгу и Дайеру (8) с добавлением БГТ. Метиловые эфиры жирных кислот (FAME) из эритроцитов и плазмы будут приготовлены согласно Моррисону и Смиту (9). FAME будут экстрагированы 0.5 мл гексана. FAME будут идентифицированы и количественно определены методом газо-жидкостной хроматографии на оборудовании Agilent (модель 7890B, Санта-Клара, Калифорния, США) с капиллярной колонкой (Agilent HP-88, 100 м × 0.250 мм; ВД 0.25 мкм) и детектором с пламенной ионизацией (FID). Идентификация и количественное определение FAME будет достигнуто сравнением времен удерживания и процентных значений площади пиков неизвестных образцов с коммерческим липидным стандартом (Nu-Chek Prep Inc., Элизиан, Миннесота, США). C23:0 будет использован как внутренний стандарт (Nu-Chek Prep Inc., Элизиан, Миннесота, США). Данные будут обработаны с использованием программной системы Hewlett-Packard Chemstation.

Анализ SPM липидных медиаторов плазмы: Образцы плазмы (400 мкл) будут проанализированы в дубликатах на оксилипины методом ВЭЖХ/МС/МС, как описано ранее (10). Кратко, дейтерированные внутренние стандарты (Cayman Chemicals) будут добавлены к образцам плазмы и доведены до pH <3.0 до твердофазной экстракции с использованием колонок Strata-X-SPE (Phenomenex), кондиционированных метанолом, затем водой при pH 3.0. Образцы будут загружены на колонки, промыты, и свободные SPM будут элюированы 100% метанолом. Элюат затем будет высушен и ресуспендирован в растворителе A (вода/ацетонитрил/муравьиная кислота, 70/30/0.02 об/об/об) для анализа оксилипинов методом ВЭЖХ/МС/МС с использованием колонки Luna 5-мкм C18 (100 Å, 250 × 2.0 мм, Phenomenex) на ВЭЖХ Shimadzu Nexera XR, связанной с ABSciex QTRAP 6500 МС, работающей в отрицательном режиме с электрораспылительной ионизацией. Оксилипины будут элюированы следующим градиентом: 100% растворитель A между 0 и 1 мин, затем растворитель B (ацетонитрил/изопропиловый спирт, 50/50, об/об) линейно увеличивается до 25% на 3 мин, 45% на 11 мин, 60% на 13 мин, 75% на 18 мин и 90% на 18.5 мин. Растворитель B затем удерживается на 90% до 20 мин, снижается до 0% на 21 мин и удерживается до 25 мин. Оксилипины будут количественно определены методом стабильного изотопного разведения.

Статистический анализ: Результаты будут выражены как среднее ± стандартное отклонение. Различия будут оценены с использованием двухфакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с пост-хок тестом Фишера (LSD) для множественных сравнений между группами и временами оценки. p-значение <0.05 будет считаться статистически значимым.