Recuperação Muscular Após Suplementação com Ómega-3

Questão de investigação: A suplementação com altas doses de ómega-3 durante oito semanas reduz o dano muscular induzido por uma sessão de exercício excêntrico de alta intensidade em homens jovens? A resposta ao exercício excêntrico está relacionada com um aumento nas oxilipinas derivadas dos ácidos gordos ómega-3? Hipótese: A suplementação a longo prazo (8 semanas) com altas doses de ómega-3 (3 g/d) aumentará a concentração de oxilipinas no sangue, que estará associada a menos dano muscular após um protocolo de exercício excêntrico em homens jovens.

Objetivo geral: Determinar o efeito de oito semanas de suplementação com ácidos gordos ómega-3 em altas doses nos níveis de oxilipinas no sangue e nos marcadores indiretos de dano muscular após exercício excêntrico de alta intensidade em homens jovens.

Objetivos específicos

1. Determinar o efeito de oito semanas de suplementação com ácidos gordos ómega-3 em altas doses nos níveis de oxilipinas no sangue após exercício excêntrico de alta intensidade em homens jovens.
2. Determinar o efeito de oito semanas de suplementação com ácidos gordos ómega-3 em altas doses na função muscular e nos marcadores de dano muscular após exercício excêntrico de alta intensidade em homens jovens.
3. Associar os níveis de oxilipinas no sangue com alterações na função muscular e nos marcadores de dano muscular induzidos por uma sessão de exercício excêntrico, antes e após a suplementação com ácidos gordos ómega-3 em altas doses em homens jovens.

Metodologia: Este estudo tem um desenho experimental, prospetivo e duplamente cego. Tamanho da amostra: O cálculo do tamanho da amostra estabelece um mínimo de 12 sujeitos por grupo com base num nível α de 0,05 e um poder (1-β) de 0,8, assumindo uma diferença estimada de perda máxima de força de 22% após exercício excêntrico (tamanho do efeito = 1,06) entre os grupos ómega-3 e controlo, com base num estudo anterior (1). No entanto, serão recrutados 15 participantes por grupo para contabilizar uma taxa de desistência de 20%.

Metodologia: Trinta homens jovens serão recrutados através de cartazes e anúncios nas redes sociais. Os participantes serão aleatoriamente atribuídos de forma duplamente cega a dois grupos de suplementação: (a) placebo (maltodextrina amarela) ou (b) ómega-3 (EPA e DHA). Antes do início do período de suplementação, os participantes serão submetidos a colheita de sangue venoso, testes de marcadores indiretos de dano muscular, teste de consumo de oxigénio e ao protocolo de exercício excêntrico numa perna (6 séries de 10 repetições a 80% de 1 repetição máxima). Imediatamente após, 1, 2, 24, 48, 72 e 96 horas após a sessão de exercício excêntrico, o dano muscular será avaliado e serão obtidas amostras de sangue venoso. No dia seguinte, os participantes iniciarão o seu protocolo de suplementação de 8 semanas com ómega-3 ou placebo. Após o período de suplementação, os participantes realizarão os mesmos testes do início e realizarão a sessão de exercício excêntrico na perna oposta.

Critérios de exclusão: Os participantes não podem ter realizado treino de força regular durante os 6 meses anteriores ao início do estudo. Os participantes também não podem estar a tomar medicamentos que afetem a inflamação ou as respostas cardiovasculares ao exercício e devem ter um IMC inferior a 30 kg/m2. Finalmente, os participantes não podem consumir peixe mais de duas vezes por semana e não podem ter tomado quaisquer suplementos de ómega-3 durante os três meses anteriores ao estudo ou ser alérgicos a peixe. Será pedido aos participantes que tenham a vacina contra a Covid-19. Os participantes serão totalmente informados sobre a natureza e os possíveis riscos dos procedimentos experimentais antes de fornecerem o seu consentimento informado por escrito aprovado pelo Comité de Ética.

Suplementação: Os participantes serão suplementados com 5 cápsulas por dia (5 g/d) de Omega Up OMEGA 3 (2,5 g/d de DHA e 0,5 g/d de EPA) ou placebo. A dose utilizada está de acordo com a recomendação da EFSA (Autoridade Europeia para a Segurança dos Alimentos), demonstrou ser segura, incorporar-se nas membranas celulares e produzir melhorias significativas na saúde geral (2,3).

Protocolo de exercício excêntrico: O protocolo de exercício excêntrico consistirá em 6 séries de 10 repetições de leg press a 45º realizadas a 80% de 1RM apenas na sua fase excêntrica, com 90 segundos de descanso entre séries realizadas numa perna (4). A fase concêntrica do movimento será realizada por um dos investigadores.

Inquéritos: Serão realizados dois inquéritos, o primeiro sobre frequência de consumo alimentar, focando-se na quantificação da ingestão média de ácidos gordos ómega-3 da dieta. Em segundo lugar, será utilizado o questionário IPAQ validado para quantificar a atividade física nos participantes (5).

Teste de consumo de oxigénio: Os participantes realizarão um teste incremental num ergómetro de ciclo (Lifecycle 9500HR; LifeFitness, Rosemont, IL, EUA). Serão obtidos os valores de potência máxima e VO2pico. O teste começará com 4 minutos a 50 W e aumentará 25 W a cada minuto até à exaustão (6).

Força isométrica máxima (FIM): A FIM dos extensores do joelho de ambas as pernas será medida a 90º de flexão do joelho numa cadeira de quadricípetes equipada com uma célula de carga (Reverse S, EUA). A partir desta avaliação, será calculada a taxa de desenvolvimento de força (TDF) como um marcador mais sensível de rigidez e função muscular.

Dor muscular: A dor na coxa ao sentar e levantar de uma cadeira 3 vezes será avaliada usando uma escala analógica visual (100 cm), onde 0 é nenhuma dor e 100 é dor máxima.

Circunferência da coxa: A perna exercitada será medida na área média. As medições serão realizadas três vezes pelo mesmo examinador, e a média destas três medições será utilizada para análise estatística. Será utilizada uma fita métrica não extensível. (Lufkin Executive Thinline, Maryland, EUA)(7) Atividade da creatina quinase (CK): Serão extraídos 35uL da amostra de sangue (abaixo) e analisados para atividade da CK no sangue (Reflotron, Roche).

Amostras de sangue: Serão obtidas amostras de sangue venoso e imediatamente centrifugadas para obter plasma (1000 g durante 10 minutos a 4°C) e fração eritrocitária (3000 × g durante 10 minutos a 20°C). Ambas as frações serão congeladas a -80°C.

Composição de ácidos gordos fosfolipídicos (análise de ácidos gordos no sangue e GR): A extração quantitativa de lípidos totais dos eritrócitos e plasma será realizada de acordo com Bligh e Dyer (8) com a adição de BHT. Os ésteres metílicos de ácidos gordos (FAME) dos eritrócitos e plasma serão preparados de acordo com Morrison e Smith (9). Os FAMEs serão extraídos com 0,5 mL de hexano. Os FAMEs serão identificados e quantificados por cromatografia gás-líquido em equipamento Agilent (modelo 7890B, Santa Clara, CA, EUA) equipado com uma coluna capilar (Agilent HP-88, 100 m × 0,250 mm; DI 0,25 µm) e um detetor de ionização de chama (FID). A identificação e quantificação dos FAMEs será alcançada comparando os tempos de retenção e os valores percentuais de área de pico de amostras desconhecidas com os do padrão lipídico comercial (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, EUA). C23:0 será utilizado como padrão interno (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, EUA). Os dados serão processados usando o sistema de software Hewlett-Packard Chemstation.

Análise de SPM de mediadores lipídicos plasmáticos: Amostras de plasma (400 µL) serão analisadas em duplicado para oxilipinas por HPLC/MS/MS como descrito anteriormente (10). Resumidamente, padrões internos deuterados (Cayman Chemicals) serão adicionados às amostras de plasma e ajustados para pH <3,0 antes da extração em fase sólida usando colunas Strata-X-SPE (Phenomenex) pré-condicionadas com metanol, seguido de água a pH 3,0. As amostras serão carregadas nas colunas, lavadas, e os SPMs livres serão eluídos com 100% de metanol. O eluato será depois seco e ressuspenso no solvente A (água/acetonitrilo/ácido fórmico, 70/30/0,02 v/v/v) para análise de oxilipinas por HPLC/MS/MS, usando uma coluna Luna 5-µm C18 (100 Å, 250 × 2,0 mm, Phenomenex) num Shimadzu Nexera XR HPLC, acoplado a um ABSciex QTRAP 6500 MS operando em modo negativo com ionização por electrospray. As oxilipinas serão eluídas com o seguinte gradiente: 100% de solvente A entre 0 e 1 min, e depois o solvente B (acetonitrilo/isopropanol, 50/50, v/v) é aumentado linearmente para 25% aos 3 min, 45% aos 11 min, 60% aos 13 min, 75% aos 18 min e 90% aos 18,5 min. O solvente B é depois mantido a 90% até aos 20 min, reduzido para 0% aos 21 min e mantido até aos 25 min. As oxilipinas serão quantificadas usando o método de diluição de isótopo estável.

Análise estatística: Os resultados serão expressos como média ± desvio padrão. As diferenças serão avaliadas usando uma análise de variância de duas vias (ANOVA) com teste post hoc de Fisher (LSD) para comparações múltiplas entre grupos e tempos de avaliação. Um valor de p <0,05 será considerado estatisticamente significativo.