Recuperación Muscular Tras la Suplementación con Omega-3

Pregunta de investigación ¿La suplementación con altas dosis de omega-3 durante ocho semanas reduce el daño muscular inducido por una sesión de ejercicio excéntrico de alta intensidad en hombres jóvenes? ¿Está la respuesta al ejercicio excéntrico relacionada con un aumento de oxilipinas derivadas de ácidos grasos omega-3? Hipótesis La suplementación a largo plazo (8 semanas) con altas dosis de omega-3 (3 g/d) aumentará la concentración de oxilipinas en la sangre, lo que se asociará con menos daño muscular después de un protocolo de ejercicio excéntrico en hombres jóvenes.

Objetivo general Determinar el efecto de ocho semanas de suplementación con altas dosis de ácidos grasos omega-3 sobre los niveles de oxilipinas en sangre y los marcadores indirectos de daño muscular después de ejercicio excéntrico de alta intensidad en hombres jóvenes.

Objetivos específicos

1. Determinar el efecto de ocho semanas de suplementación con altas dosis de ácidos grasos omega-3 sobre los niveles de oxilipinas en sangre después de ejercicio excéntrico de alta intensidad en hombres jóvenes.
2. Determinar el efecto de ocho semanas de suplementación con altas dosis de ácidos grasos omega-3 sobre la función muscular y los marcadores de daño muscular después de ejercicio excéntrico de alta intensidad en hombres jóvenes.
3. Asociar los niveles de oxilipinas en sangre con los cambios en la función muscular y los marcadores de daño muscular inducidos por una sesión de ejercicio excéntrico, antes y después de la suplementación con altas dosis de ácidos grasos omega-3 en hombres jóvenes.

Metodología Este estudio es un diseño experimental, prospectivo y doble ciego. Tamaño muestral: El cálculo del tamaño muestral establece un mínimo de 12 sujetos por grupo basado en un nivel α de 0,05 y una potencia (1-β) de 0,8, asumiendo una diferencia estimada de pérdida de fuerza máxima del 22% después del ejercicio excéntrico (tamaño del efecto = 1,06) entre los grupos omega-3 y control, basado en un estudio previo (1). Sin embargo, se reclutarán 15 participantes por grupo para considerar una tasa de abandono del 20%.

Metodología: Se reclutarán treinta hombres jóvenes mediante carteles y anuncios en redes sociales. Los participantes serán asignados aleatoriamente de forma doble ciego a dos grupos de suplementación: (a) placebo (maltodextrina amarilla) o (b) omega-3 (EPA y DHA). Antes del inicio del período de suplementación, los participantes se someterán a extracción de sangre venosa, pruebas de marcadores indirectos de daño muscular, prueba de consumo de oxígeno y el protocolo de ejercicio excéntrico en una pierna (6 series de 10 repeticiones al 80% de 1 repetición máxima). Inmediatamente después, 1, 2, 24, 48, 72 y 96 horas después de la sesión de ejercicio excéntrico, se evaluará el daño muscular y se obtendrán muestras de sangre venosa. Al día siguiente, los participantes comenzarán su protocolo de suplementación de 8 semanas con omega-3 o placebo. Después del período de suplementación, los participantes realizarán las mismas pruebas que al principio y realizarán la sesión de ejercicio excéntrico en la pierna opuesta.

Criterios de exclusión: Los participantes no deben haber realizado entrenamiento de fuerza regular durante los 6 meses previos al inicio del estudio. Los participantes tampoco deben estar tomando medicamentos que afecten la inflamación o las respuestas cardiovasculares al ejercicio y deben tener un IMC inferior a 30 kg/m2. Finalmente, los participantes no deben consumir pescado más de dos veces por semana y no deben haber tomado suplementos de omega-3 durante los tres meses previos al estudio ni ser alérgicos al pescado. Se pedirá a los participantes que tengan la vacuna Covid-19. Los participantes serán informados completamente sobre la naturaleza y los posibles riesgos de los procedimientos experimentales antes de proporcionar su consentimiento informado por escrito aprobado por el Comité de Ética.

Suplementación: Los participantes serán suplementados con 5 cápsulas por día (5 g/d) de Omega Up OMEGA 3 (2,5 g/d de DHA y 0,5 g/d de EPA) o placebo. La dosis utilizada está de acuerdo con la recomendación de la EFSA (Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria), ha demostrado ser segura, incorporarse a las membranas celulares y producir mejoras significativas en la salud general (2,3).

Protocolo de ejercicio excéntrico: El protocolo de ejercicio excéntrico consistirá en 6 series de 10 repeticiones de prensa de piernas a 45º realizadas al 80% de 1RM solo en su fase excéntrica, con 90 segundos de descanso entre series realizadas en una pierna (4). La fase concéntrica del movimiento será realizada por uno de los investigadores.

Encuestas: Se realizarán dos encuestas, la primera sobre frecuencia de consumo de alimentos, centrada en cuantificar la ingesta media de ácidos grasos omega-3 de la dieta. En segundo lugar, se utilizará el cuestionario IPAQ validado para cuantificar la actividad física en los participantes (5).

Prueba de consumo de oxígeno: Los participantes realizarán una prueba incremental en un ergómetro de ciclo (Lifecycle 9500HR; LifeFitness, Rosemont, IL, EE. UU.). Se obtendrán los valores de potencia máxima y VO2pico. La prueba comenzará con 4 minutos a 50 W y aumentará 25 W cada minuto hasta el agotamiento (6).

Fuerza isométrica máxima (MVC): La MVC de los extensores de rodilla de ambas piernas se medirá a 90º de flexión de rodilla en una silla de cuádriceps equipada con una célula de carga (Reverse S, EE. UU.). A partir de esta evaluación, se calculará la tasa de desarrollo de fuerza (RFD) como un marcador más sensible de rigidez y función muscular.

Dolor muscular: Se evaluará el dolor en el muslo al sentarse y levantarse de una silla 3 veces utilizando una escala analógica visual (100 cm), donde 0 es sin dolor y 100 es dolor máximo.

Circunferencia del muslo: La pierna ejercitada se medirá en la zona media. Las mediciones se realizarán tres veces por el mismo examinador, y el promedio de estas tres mediciones se utilizará para el análisis estadístico. Se utilizará una cinta métrica no extensible. (Lufkin Executive Thinline, Maryland, EE. UU.)(7) Actividad de creatina quinasa (CK): Se extraerán 35uL de la muestra de sangre (a continuación) y se analizará la actividad de CK en sangre (Reflotron, Roche).

Muestras de sangre: Se obtendrán muestras de sangre venosa y se centrifugarán inmediatamente para obtener plasma (1000 g durante 10 minutos a 4°C) y fracción eritrocitaria (3000 × g durante 10 minutos a 20°C). Ambas fracciones se congelarán a -80°C.

Composición de ácidos grasos fosfolípidos (análisis de ácidos grasos en sangre y GR): La extracción cuantitativa de lípidos totales de eritrocitos y plasma se realizará según Bligh y Dyer (8) con la adición de BHT. Los ésteres metílicos de ácidos grasos (FAME) de eritrocitos y plasma se prepararán según Morrison y Smith (9). Los FAME se extraerán con 0,5 mL de hexano. Los FAME se identificarán y cuantificarán por cromatografía gas-líquido en equipo Agilent (modelo 7890B, Santa Clara, CA, EE. UU.) equipado con una columna capilar (Agilent HP-88, 100 m × 0,250 mm; DI 0,25 µm) y un detector de ionización de llama (FID). La identificación y cuantificación de FAME se logrará comparando los tiempos de retención y los valores de porcentaje de área de pico de muestras desconocidas con los del estándar lipídico comercial (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, EE. UU.). Se utilizará C23:0 como estándar interno (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, EE. UU.). Los datos se procesarán utilizando el sistema de software Hewlett-Packard Chemstation.

Análisis de SPM de mediadores lipídicos plasmáticos: Las muestras de plasma (400 µL) se analizarán por duplicado para oxilipinas mediante HPLC/MS/MS como se describió anteriormente (10). Brevemente, se añadirán estándares internos deuterados (Cayman Chemicals) a las muestras de plasma y se ajustarán a pH <3,0 antes de la extracción en fase sólida utilizando columnas Strata-X-SPE (Phenomenex) precondicionadas con metanol, seguidas de agua a pH 3,0. Las muestras se cargarán en las columnas, se lavarán y los SPM libres se eluirán con 100% de metanol. El eluato se secará y se resuspenderá en disolvente A (agua/acetonitrilo/ácido fórmico, 70/30/0,02 v/v/v) para el análisis de oxilipinas mediante HPLC/MS/MS, utilizando una columna Luna 5-µm C18 (100 Å, 250 × 2,0 mm, Phenomenex) en un HPLC Shimadzu Nexera XR, acoplado a un ABSciex QTRAP 6500 MS operando en modo negativo con ionización por electrospray. Las oxilipinas se eluirán con el siguiente gradiente: 100% de disolvente A entre 0 y 1 min, y luego el disolvente B (acetonitrilo/alcohol isopropílico, 50/50, v/v) aumenta linealmente al 25% a los 3 min, 45% a los 11 min, 60% a los 13 min, 75% a los 18 min y 90% a los 18,5 min. Luego, el disolvente B se mantiene al 90% hasta los 20 min, se reduce al 0% a los 21 min y se mantiene hasta los 25 min. Las oxilipinas se cuantificarán utilizando el método de dilución de isótopos estables.

Análisis estadístico: Los resultados se expresarán como media ± desviación estándar. Las diferencias se evaluarán mediante un análisis de varianza de dos vías (ANOVA) con prueba post hoc de Fisher (LSD) para comparaciones múltiples entre grupos y tiempos de evaluación. Un valor de p <0,05 se considerará estadísticamente significativo.