Återhämtning av muskler efter Omega-3-tillskott

Forskningsfråga Minskar tillskott med höga doser omega-3 under åtta veckor muskelskador orsakade av en session med högintensiv excentrisk träning hos unga män? Är svaret på excentrisk träning relaterat till en ökning av oxylipiner härledda från omega-3-fettsyror? Hypotes Långtidsbehandling (8 veckor) med höga doser omega-3 (3 g/dag) kommer att öka koncentrationen av oxylipiner i blodet, vilket kommer att associeras med mindre muskelskador efter ett excentriskt träningsprotokoll hos unga män.

Allmänt mål Att bestämma effekten av åtta veckors behandling med högdos omega-3-fettsyror på blodnivåer av oxylipiner och indirekta markörer för muskelskador efter högintensiv excentrisk träning hos unga män.

Specifika mål

1. Att bestämma effekten av åtta veckors behandling med högdos omega-3-fettsyror på blodnivåer av oxylipiner efter högintensiv excentrisk träning hos unga män.
2. Att bestämma effekten av åtta veckors behandling med högdos omega-3-fettsyror på muskelns funktion och markörer för muskelskador efter högintensiv excentrisk träning hos unga män.
3. Associera blodnivåer av oxylipiner med förändringar i muskelns funktion och markörer för muskelskader orsakade av en session med excentrisk träning, före och efter behandling med högdos omega-3-fettsyror hos unga män.

Metodologi Denna studie har en experimentell, prospektiv, dubbelblind design. Urvalsstorlek: Beräkningen av urvalsstorlek fastställer minst 12 försökspersoner per grupp baserat på en α-nivå på 0,05 och en styrka (1-β) på 0,8, med antagande om en beräknad maximal skillnad i styrkeförlust på 22% efter excentrisk träning (effektstorlek = 1,06) mellan omega-3-gruppen och kontrollgruppen, baserat på en tidigare studie (1). Emellertid kommer 15 deltagare att rekryteras per grupp för att kompensera för en 20% bortfallsfrekvens.

Metod: Trettio unga män kommer att rekryteras genom affischer och annonser i sociala medier. Deltagarna kommer att slumpmässigt fördelas på ett dubbelblindat sätt till två behandlingsgrupper: (a) placebo (gul maltodextrin) eller (b) omega-3 (EPA och DHA). Innan behandlingsperioden börjar kommer deltagarna att genomgå venös blodprovstagning, tester för indirekta markörer för muskelskador, syreupptagningsprov och det excentriska träningsprotokollet på ett ben (6 set om 10 repetitioner vid 80% av 1 repetitionsmaximum). Omedelbart efter, samt 1, 2, 24, 48, 72 och 96 timmar efter den excentriska träningssessionen, kommer muskelskador att utvärderas och venösa blodprover kommer att tas. Dagen efter kommer deltagarna att påbörja sin 8-veckors behandlingsperiod med omega-3 eller placebo. Efter behandlingsperioden kommer deltagarna att utföra samma tester som i början och kommer att genomföra den excentriska träningssessionen på det motsatta benet.

Exklusionskriterier: Deltagarna får inte ha utfört regelbunden styrketräning under de 6 månader som föregick studiens start. Deltagarna får heller inte ta läkemedel som påverkar inflammation eller kardiovaskulära svar på träning och måste ha ett BMI under 30 kg/m2. Slutligen får deltagarna inte äta fisk mer än två gånger i veckan och får inte ha tagit några omega-3-tillskott under tre månader före studien eller vara allergiska mot fisk. Deltagarna kommer att ombes att ha Covid-19-vaccinet. Deltagarna kommer att bli fullt informerade om arten och de möjliga riskerna med de experimentella procedurerna innan de lämnar sitt skriftliga informerade samtycke godkänt av etikprövningsnämnden.

Behandling: Deltagarna kommer att behandlas med 5 kapslar per dag (5 g/dag) av Omega Up OMEGA 3 (2,5 g/dag DHA och 0,5 g/dag EPA) eller placebo. Doseringen som används är i enlighet med rekommendationen från EFSA (Europeiska livsmedelssäkerhetsmyndigheten), har visat sig vara säker, inkorporeras i cellmembran och ger signifikanta förbättringar i den allmänna hälsan (2,3).

Excentriskt träningsprotokoll: Det excentriska träningsprotokollet kommer att bestå av 6 set om 10 repetitioner av 45º benpress utförda vid 80% av 1RM endast i dess excentriska fas, med 90 sekunders vila mellan set utförda på ett ben (4). Den koncentriska fasen av rörelsen kommer att utföras av en av forskarna.

Enkäter: Två enkäter kommer att genomföras, den första om livsmedelskonsumtionsfrekvens, inriktad på att kvantifiera det genomsnittliga intaget av omega-3-fettsyror från kosten. För det andra kommer den validerade IPAQ-enkäten att användas för att kvantifiera fysisk aktivitet hos deltagarna (5).

Syreupptagningsprov: Deltagarna kommer att utföra ett inkrementellt prov på en cykelergometer (Lifecycle 9500HR; LifeFitness, Rosemont, IL, USA). Maximal effekt och VO2peak-värden kommer att erhållas. Provet kommer att börja med 4 minuter vid 50 W och kommer att öka med 25 W varje minut till utmattning (6).

Maximal isometrisk styrka (MVC): MVC för knästräckarna på båda benen kommer att mätas vid 90º knäböjning på en kvadricepsstol utrustad med en lastcell (Reverse S, USA). Från denna bedömning kommer kraftutvecklingshastigheten (RFD) att beräknas som en mer känslig markör för muskelstelhet och funktion.

Muskelsmärta: Lårsmärta vid sittande och uppstående från en stol 3 gånger kommer att bedömas med en visuell analog skala (100 cm), där 0 är ingen smärta och 100 är maximal smärta.

Låromfång: Det tränade benet kommer att mätas i mittområdet. Mätningar kommer att utföras tre gånger av samma undersökare, och medelvärdet av dessa tre mätningar kommer att användas för statistisk analys. Ett icke-töjbart måttband kommer att användas. (Lufkin Executive Thinline, Maryland, USA)(7) Kreatinkinas (CK) aktivitet: 35uL kommer att extraheras från blodprovet (nedan) och analyseras för CK-aktivitet i blod (Reflotron, Roche).

Blodprover: Venösa blodprover kommer att erhållas och omedelbart centrifugeras för att erhålla plasma (1000 g i 10 minuter vid 4ºC) och erytrocytfraktion (3000 × g i 10 minuter vid 20ºC). Båda fraktionerna kommer att frysas vid -80ºC.

Fosfolipidfettsyrasammansättning (analys av fettsyror i blod och GR): Kvantitativ extraktion av totala lipider från erytrocyter och plasma kommer att utföras enligt Bligh och Dyer (8) med tillsats av BHT. Fettsyrametylester (FAME) från erytrocyter och plasma kommer att prepareras enligt Morrison och Smith (9). FAME kommer att extraheras med 0,5 mL hexan. FAME kommer att identifieras och kvantifieras genom gas-vätske-kromatografi på Agilent-utrustning (modell 7890B, Santa Clara, CA, USA) utrustad med en kapillärkolonn (Agilent HP-88, 100 m × 0,250 mm; ID 0,25 µm) och en flamjonisationsdetektor (FID). Identifiering och kvantifiering av FAME kommer att uppnås genom att jämföra retentionstider och topparea procentvärden för okända prover med de för den kommersiella lipidstandarden (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, USA). C23:0 kommer att användas som intern standard (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, USA). Data kommer att bearbetas med Hewlett-Packard Chemstation mjukvarusystem.

SPM-analys av plasmalipidmediatorer: Plasmaprover (400 µL) kommer att analyseras i duplikat för oxylipiner genom HPLC/MS/MS som beskrivits tidigare (10). Kortfattat kommer deuterierade interna standarder (Cayman Chemicals) att tillsättas till plasmaprover och justeras till pH <3,0 före fastfas extraktion med Strata-X-SPE-kolonner (Phenomenex) förkonditionerade med metanol, följt av vatten vid pH 3,0. Prover kommer att laddas på kolonnerna, sköljas och fria SPM kommer att elueras med 100% metanol. Eluatet kommer sedan att torkas och återupplösas i lösningsmedel A (vatten/acetonitril/mättiksyra, 70/30/0,02 v/v/v) för oxylipinanalys genom HPLC/MS/MS, med en Luna 5-µm C18-kolonn (100 Å, 250 × 2,0 mm, Phenomenex) på en Shimadzu Nexera XR HPLC, kopplad till en ABSciex QTRAP 6500 MS som arbetar i negativt läge med elektrosprutjonisation. Oxylipiner kommer att elueras med följande gradient: 100% lösningsmedel A mellan 0 och 1 min, och sedan ökas lösningsmedel B (acetonitril/isopropylalkohol, 50/50, v/v) linjärt till 25% vid 3 min, 45% vid 11 min, 60% vid 13 min, 75% vid 18 min och 90% vid 18,5 min. Lösningsmedel B hålls sedan vid 90% till 20 min, minskas till 0% vid 21 min och hålls till 25 min. Oxylipiner kommer att kvantifieras med stabil isotopspädningsmetod.

Statistisk analys: Resultat kommer att uttryckas som medelvärde ± standardavvikelse. Skillnader kommer att utvärderas med en tvåvägs variansanalys (ANOVA) med Fischers post hoc-test (LSD) för multipla jämförelser mellan grupper och utvärderingstidpunkter. Ett p-värde <0,05 kommer att anses statistiskt signifikant.