Izomregeneráció omega-3 kiegészítés után

Kutatási kérdés: Csökkenti-e a nyolc hétig tartó, magas dózisú omega-3-kiegészítés az izomkárosodást, amelyet egy intenzív excentrikus edzés előidéz fiatal férfiakban? Összefügg-e az excentrikus edzésre adott válasz az omega-3 zsírsavakból származó oxilipinek szintjének növekedésével? Hipotézis: A magas dózisú omega-3 (3 g/nap) nyolchétes szedése megnöveli az oxilipinek koncentrációját a vérben, amely kevesebb izomkárosodással fog együtt járni az excentrikus edzés protokoll után fiatal férfiaknál.

Általános cél: Meghatározni a nyolchétes, magas dózisú omega-3 zsírsav-kiegészítés hatását a vér oxilipin szintjére és az izomkárosodás közvetett markereire intenzív excentrikus edzés után fiatal férfiaknál.

Specifikus célok

1. Meghatározni a nyolchétes, magas dózisú omega-3 zsírsav-kiegészítés hatását a vér oxilipin szintjére intenzív excentrikus edzés után fiatal férfiaknál.
2. Meghatározni a nyolchétes, magas dózisú omega-3 zsírsav-kiegészítés hatását az izomfunkcióra és az izomkárosodás markereire intenzív excentrikus edzés után fiatal férfiaknál.
3. Összefüggésbe hozni a vér oxilipin szintjeit az izomfunkció és az izomkárosodás markereinek változásaival, amelyeket egy excentrikus edzési session idézett elő a magas dózisú omega-3 zsírsav-kiegészítés előtt és után fiatal férfiaknál.

Módszertan: Ez a tanulmány kísérleti, prospektív, kettős vak tervezésű. Mintanagyság: A mintanagyság számítása legalább 12 alanyt határoz meg csoportonként, 0,05-ös α-szinten és 0,8-as erővel (1-β), feltételezve 22%-os becsült maximális erővesztés különbséget az excentrikus edzés után (hatásméret = 1,06) az omega-3 és a kontroll csoportok között, egy korábbi tanulmány alapján (1). Azonban csoportonként 15 résztvevőt toboroznak, hogy számoljanak a 20%-os lemorzsolódási aránnyal.

Módszertan: Harminc fiatal férfit toboroznak poszterek és közösségi média hirdetések útján. A résztvevőket kettős vak módon véletlenszerűen beosztják két kiegészítő csoportba: (a) placebo (sárga maltodextrin) vagy (b) omega-3 (EPA és DHA). A kiegészítési időszak megkezdése előtt a résztvevők vénás vérvételen, izomkárosodás közvetett markereinek tesztelésén, oxigénfogyasztás mérésén és az excentrikus edzés protokollon vesznek részt egy lábukon (6 sorozat 10 ismétlésből, 1 ismétlésmaximum 80%-án). Közvetlenül után, 1, 2, 24, 48, 72 és 96 órával az excentrikus edzés session után értékelik az izomkárosodást és vénás vérvételt végeznek. A következő napon a résztvevők elkezdik nyolchetes kiegészítési protokolljukat omega-3-mal vagy placebóval. A kiegészítési időszak után a résztvevők ugyanazokat a teszteket végzik el, mint a kezdetekor, és az excentrikus edzés sessiont a szemközti lábon hajtják végre.

Kizárási kritériumok: A résztvevők nem végezhettek rendszeres erőnléti edzést a tanulmány megkezdése előtti 6 hónapban. A résztvevők továbbá nem szedhetnek olyan gyógyszereket, amelyek befolyásolják a gyulladást vagy a kardiovaszkuláris válaszokat a testedzésre, és testtömegindexüknek 30 kg/m² alattinak kell lennie. Végül, a résztvevők nem fogyaszthatnak halat heti kétszernél gyakrabban, és nem szedhettek omega-3 kiegészítőket a tanulmány előtti három hónapban, valamint nem lehetnek allergiásak a halra. A résztvevőket megkérjük, hogy legyenek oltva Covid-19 ellen. A résztvevőket teljes mértékben tájékoztatják a kísérleti eljárások természetéről és lehetséges kockázatairól, mielőtt aláírják az Etikai Bizottság által jóváhagyott tájékoztatott hozzájárulásukat.

Kiegészítés: A résztvevők napi 5 kapszulát (5 g/nap) kapnak Omega Up OMEGA 3-ból (2,5 g/nap DHA és 0,5 g/nap EPA) vagy placebót. Az alkalmazott dózis megfelel az EFSA (Európai Élelmiszerbiztonsági Hatóság) ajánlásának, bizonyítottan biztonságos, beépül a sejtmembránokba, és jelentős javulást eredményez az általános egészségben (2,3).

Excentrikus edzés protokoll: Az excentrikus edzés protokoll 6 sorozatból áll, egyenként 10 ismétlésből, 45°-os lábtolást végezve 1RM 80%-án kizárólag excentrikus fázisban, 90 másodperc pihenővel a sorozatok között, egy lábon végrehajtva (4). A mozgás koncentrikus fázisát az egyik kutató végzi.

Kérdőívek: Két kérdőívet végeznek, az első az élelmiszer-fogyasztás gyakoriságáról, az omega-3 zsírsavak átlagos bevitelének megállapítására fókuszálva. Másodszor, az érvényesített IPAQ kérdőívet használják a résztvevők fizikai aktivitásának számszerűsítésére (5).

Oxigénfogyasztás teszt: A résztvevők egy növekvő terheléses tesztet végeznek kerékpár ergométeren (Lifecycle 9500HR; LifeFitness, Rosemont, IL, USA). A maximális teljesítmény és VO2peak értékeket kapják meg. A teszt 4 perccel 50 W-nál kezdődik, és percenként 25 W-tal nő a kimerültségig (6).

Maximális izometriás erő (MVC): Mindkét láb térdhajlítóinak MVC-jét 90°-os térdhajlításnál mérik kvadricepsz székben, terhelőcellával felszerelve (Reverse S, USA). Ebből az értékelésből számítják ki az erőfejlődési rátát (RFD), mint az izom merevség és funkció érzékenyebb markerét.

Izomfájdalom: A combfájdalmat ülés közben és felálláskor egy székből 3 alkalommal vizuális analóg skálával (100 cm) értékelik, ahol 0 a fájdalom hiánya és 100 a maximális fájdalom.

Comb kerülete: Az edzett lábat a középső részén mérik. A méréseket háromszor végzi ugyanaz a vizsgáló, és a három mérés átlagát használják statisztikai elemzésre. Nyújthatatlan mérőszalagot használnak. (Lufkin Executive Thinline, Maryland, USA)(7) Kreatin-kináz (CK) aktivitás: 35uL-t vesznek ki a vérből (lentebb), és elemzik a CK aktivitást a vérben (Reflotron, Roche).

Vérvétel: Vénás vérvételt végeznek, és azonnal centrifugálják plazma (1000 g, 10 perc, 4°C) és vörösvértest frakció (3000 × g, 10 perc, 20°C) előállítására. Mindkét frakciót -80°C-on lefagyasztják.

Foszfolipid zsírsav összetétel (zsírsavak elemzése vérben és GR-ben): A teljes lipidek kvantitatív extrakcióját a vörösvértestekből és plazmából Bligh és Dyer (8) szerint végeznek BHT hozzáadásával. A vörösvértestekből és plazmából származó zsírsav-metil-észtereket (FAME) Morrison és Smith (9) szerint készítik elő. A FAME-okat 0,5 mL hexánnal extrahálják. A FAME-okat gáz-folyadék kromatográfiával azonosítják és számszerűsítik Agilent berendezésen (model 7890B, Santa Clara, CA, USA), amely kapilláris oszloppal (Agilent HP-88, 100 m × 0,250 mm; ID 0,25 µm) és lángionizációs detektorral (FID) van felszerelve. A FAME-ok azonosítását és számszerűsítését az ismeretlen minták retenció idejének és csúcsterület százalékos értékeinek összehasonlításával érik el a kereskedelmi lipid standarddal (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, USA). C23:0-t használnak belső standardként (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, USA). Az adatokat a Hewlett-Packard Chemstation szoftverrendszerrel dolgozzák fel.

SPM elemzés plazma lipid mediatorokra: Plazma mintákat (400 µL) duplikátumban elemeznek oxilipinekre HPLC/MS/MS segítségével, ahogyan azt korábban leírták (10). Röviden, deutériummal jelzett belső standardokat (Cayman Chemicals) adnak a plazma mintákhoz, és pH <3,0-ra állítják be, mielőtt szilárd fázisú extrakciót végeznének Strata-X-SPE oszlopokkal (Phenomenex), metanollal, majd pH 3,0-as vízzel előfeltételezve. A mintákat az oszlopokra töltik, mossák, és a szabad SPM-eket 100%-os metanollal eluálják. Az eluátumot ezután szárítják és A oldatban (víz/acetonitril/folsav, 70/30/0,02 v/v/v) újrafeloldják oxilipin analízisre HPLC/MS/MS segítségével, Luna 5-µm C18 oszlopot (100 Å, 250 × 2,0 mm, Phenomenex) használva Shimadzu Nexera XR HPLC-n, összekapcsolva egy ABSciex QTRAP 6500 MS-sel, amely negatív módban működik elektrospray ionizációval. Az oxilipineket a következő gradiense eluálják: 100% A oldat 0 és 1 perc között, majd B oldat (acetonitril/izopropil-alkohol, 50/50, v/v) lineárisan növelik 25%-ra 3 percnél, 45%-ra 11 percnél, 60%-ra 13 percnél, 75%-ra 18 percnél és 90%-ra 18,5 percnél. Ezután a B oldat 90%-on tartják 20 percig, 0%-ra csökkentik 21 percnél, és 25 percig tartják. Az oxilipineket stabil izotóp hígítási módszerrel számszerűsítik.

Statisztikai elemzés: Az eredményeket átlag ± szórás formájában fejezik ki. A különbségeket kétirányú varianciaanalízissel (ANOVA) értékelik Fisher poszthoc teszttel (LSD) a csoportok és értékelési időpontok közötti többszörös összehasonlításokhoz. Egy p-érték <0,05 statisztikailag szignifikánsnak tekintendő.