Role TSH receptoru, PPAR-r, IGF-1R, IGF a cytokinů v různých stádiích Gravesovy oftalmopatie

Přesný mechanismus patogeneze Gravesovy oftalmopatie (GO) stále není znám. Histopatologicky jsou dvě výrazné změny zánět extraokulárního svalu v důsledku lymfoidní infiltrace, edém a intersticiální fibróza a zvýšená depozice glykosaminoglykanů a zánět orbitálního tuku. Existují různé projevy včetně zánětu očních adnexálních tkání, proptózy, retrakce víčka, omezení extraokulárního pohybu a kompresivní neuropatie zrakového nervu. V minulém roce jsme zkoumali morfologické rysy Müllerova svalu u pacientů s retrakci víčka štítné žlázy pomocí speciálního barvení a imunohistochemie na řezech zalitých ve formalínu fixovaných v parafínu (FFPE). V našich zjištěních byly buňky hladkého svalstva ve skupině nemocných nahrazeny variabilními tukovými a fibrózními tkáněmi. Pro další výzkum se zdají být pozoruhodné dva odlišné rysy ve skupině onemocnění.

V posledních letech bylo ověřeno, že TSHR, domnělý autoantigen, exprimuje v orbitální pojivové tkáni a extraokulárním svalu. Kromě toho bylo dále prokázáno, že exprimují na povrchu kultivovaných orbitálních fibroblastů a orbitální tukové tkáně u pacientů s GO v několika laboratořích. Z funkčních studií a zvýšení adipogeneze v kultivovaných fibroblastech s expresí proteinu TSHR byla ověřena úloha nejen cílových, ale i efektorových buněk v orbitálních fibroblastech7. Imunohistochemicky jsme ověřili existenci TSHR na fibroblastech v Müllerově svalu a pozitivní barvení se projevuje pouze u 18 % pacientů. Může to být způsobeno menším rozsahem exprese v konečné fázi. Jsme velmi zvědaví, zda existuje nějaký rozdíl v expresi TSHR mezi orbitálními vzorky od pacientů v akutním a stabilním stádiu. Kvantitativní RT-PCR může pomoci rozlišit, zda se má detekovat menší rozsah exprese v konečné fázi nebo nízké množství proteinu.

V posledních letech byly z několika studií hlášeny různé fenotypy orbitálních fibroblastů, pokud jde o expresi proteinu Thy-1 nebo ne, výzkumníci se domnívali, že heterogenita v orbitálních fibroblastech může určovat klinickou prezentaci Gravesovy oftalmopatie. Jsme také zvědaví, zda fenotypová heterogenita fibroblastů v očních adnexálních a orbitálních tkáních koreluje s odlišnými morfologickými rysy adipogeneze a fibrózy. Kromě toho mohou systémové nebo lokální prozánětlivé cytokiny přispívat k zapnutí a vypnutí exprese různých rolí fibroblastů.

Navíc byla u pacientů se systémovou sklerózou zaznamenána zvýšená exprese CD40 v kožních fibroblastech. Exprese IGF-I a IGF-IR se zdála být up-regulována v procesech několika fibrotických onemocnění. Bylo ověřeno, že jaderný transkripční faktor, PPAR-γ, má úzký vztah s adipogenezí. V naší předchozí studii byly buňky hladkého svalstva v nemocném Mullersově svalu nahrazeny variabilními tukovými a fibrózními tkáněmi. Zvýšená tuková a fibrózní tkáň ex vivo Müllerova svalu může být důsledkem nadměrného působení některých biochemických markerů ve fibroblastech infiltrujících kolem svalových buněk. Předpokládáme, že některé imunologické procesy zahrnují oční adnexální a orbitální tkáně, což má za následek různé oftalmologické projevy.

Účelem této studie je prozkoumat různá stádia (akutní nebo stabilní stádium) očních adnexálních a orbitálních tkání (včetně orbitálního tuku, extraokulárních svalů, orbicularis svalů a tuku očních víček) k identifikaci a validaci patogeneze Gravesovy oftalmopatie pomocí zmrazených řezů očních adnexálních a orbitálních tkání pomocí imunohistochemie (IHA) (Thy-1 a PPARγ), mRNA exprese TSH receptoru, PPAR-γ, IGF-1R a IGF-1 a různých cytokinů (IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8) pomocí kvantitativní RT-PCR a průtokové cytometrie v akutním a stabilním stádiu u GO.