Vyhodnocení testů na protilátky na COVID-19

Pozadí

Molekulární (RT-PCR) testy jsou v současnosti zlatým standardem pro diagnostiku COVID-19. Detekují virovou RNA a jsou dobrým markerem současné infekce a infekčnosti. Tyto testy jsou však drahé a nedostatkové. V pokročilých případech COVID-19 je koncentrace viru v horních cestách dýchacích často nízká, protože infekce se rozšířila do plic a virová RNA je někdy nedetekovatelná pomocí RT-PCR pomocí nosních swapů. Testy protilátek zjišťují lidské protilátky proti virovým proteinům v krvi nebo jiných tělesných tekutinách. Mohou být užitečné pro diagnostiku současných infekcí (o něco méně citlivé než testy RT-PCR) a zůstávají pozitivní i poté, co se osoby z infekce zotaví. Očekává se tedy, že testy protilátek budou užitečné pro diagnostiku současných infekcí, pro ověření nedávných infekcí u osob, které nebyly testovány pomocí RT-PCR, když byly nemocné, a pro dokumentaci možné imunity vůči viru. Testy protilátek mohou být zvláště cenné pro použití v zemích s nízkými a středními příjmy, které nemají zdroje pro rozsáhlé molekulární testování infekce SARS-CoV-2.

Předpokládaná citlivost a specificita testu. Údaje výrobců pro několik testů na protilátky tvrdí, že více než 90 % osob s COVID-19 (klinické příznaky a pozitivní molekulární testy) má pozitivní výsledky testů na protilátky na IgM a/nebo IgG. Uvádějí také specificitu v rozmezí 93–95 % pro vzorky od osob, které nebyly vystaveny SARS-CoV-2.

Dostupnost testů na protilátky. V posledních měsících bylo vyvinuto a na trh uvedeno mnoho testů na protilátky. Nadace pro inovativní novou diagnostiku (FIND, úzce propojená se Světovou zdravotnickou organizací (WHO) a podpořená velkým grantem vlády Spojeného království) v Ženevě ve Švýcarsku oznámila, že identifikovala více než 70 takových testů a do užšího výběru 27 testů pro další hodnocení. Z nich pouze jeden test vyrobený v USA (vyrobený společností Cellex) získal povolení k nouzovému použití (EUA) od amerického FDA a žádný test nemá formální schválení FDA. Testy na protilátky používají různé diagnostické platformy, ale většina testů používá protein SARS-CoV-2 S1 a několik testů také používá protein SARS-CoV-2 N. V recenzovaných časopisech bylo dosud publikováno několik studií, které nezávisle vyhodnocovaly výkon těchto rychlých testů na protilátky. K vyhodnocení senzitivity, specificity a hodnoty těchto testů je proto zapotřebí více údajů.

Metody

Výzkumná skupina Weil Lab na lékařské fakultě Washingtonské univerzity (WUSM) má rozsáhlé zkušenosti s vývojem a vyhodnocováním rychlých diagnostických testů pro infekční onemocnění. Skupina má zvláštní zájem o diagnostiku infekčních nemocí, která může být použita v zemích s nízkými a středními příjmy a používá se k práci v náročných podmínkách po propuknutí nemoci. V tomto projektu budou vyhodnoceny rychlé testy na protilátky proti SARS-CoV-2 a výsledky testů na protilátky budou porovnány s výsledky RT-PCR a metadaty (věk, pohlaví, klinické příznaky, doba po expozici, pokud je známa).

Vzorky pacientů. Neidentifikované vzorky séra nebo plazmy budou testovány od pacientů, kteří byli hospitalizováni a byli pozitivně testováni na COVID-19. Testovány budou také kontrolní vzorky z naší sérové ​​banky (identifikované vzorky od zdravých lidí a vzorky od osob s parazitárním onemocněním). Počet vzorků séra nebo plazmy, které mají být testovány, zůstane otevřený, ale bude to částečně záviset na počtu dostupných vzorků a dostupnosti testovacích souprav. Předpokládá se, že zpočátku bude testováno přibližně 500 vzorků, ale může být testováno více, pokud je to nutné pro dosažení cílů studie. Testy a výzkum slouží pouze pro výzkum a výsledky testů ze vzorků jednotlivých pacientů nebudeme klinickým lékařům hlásit, abychom podpořili péči o pacienty.

Poznámka: Nebude prováděna žádná dobrovolná registrace do této studie; veškeré testování bude probíhat anonymně.

Testovací soupravy protilátek. Prodávané komerční nebo prototypové soupravy pro detekci protilátek budou získány darem nebo nákupem. Testy, které mají být vyhodnoceny, budou určeny, ale to bude záviset na dostupnosti a ceně. Pozornost bude věnována rychlým testovacím soupravám protilátek v místě péče, které detekují protilátky IgM i IgG proti rekombinantním virovým proteinům. Cílem je otestovat alespoň pět (5) různých sad včetně alespoň dvou (2), které jsou vyrobeny v USA.

Zkušební postupy. Budou dodržovány příbalové informace nebo protokoly výrobců pro provedení testu. Ty se na různých testovacích platformách liší. Osoby, které provádějí testy, nebudou při provádění testů znát výsledky PCR ani jiná metadata spojená s lidskými vzorky. Testy budou čteny dvěma nezávislými čtenáři a zaznamenány. Třetím čtenářem bude rozhodující hlas pro případy s nesouhlasným čtením.

Testovací data. Výsledky testů na protilátky (IgM a IgG) pro každou jinou testovací soupravu budou vloženy do formuláře výsledků testu s jedinečným identifikačním číslem (UI) účastníka. Výsledky budou později sloučeny do databáze, která obsahuje uživatelské rozhraní a metadata, jako je věk, pohlaví, horečka, kašel, datum odběru vzorku, datum nástupu příznaků, historie expozice (cestování, domácnost, práce). Přijatelnost provedení testu bude posouzena podle pracovního cílového profilu produktu (TPP) připojeného na konci tohoto protokolu.

Primární cíl

1. K posouzení citlivosti a specifičnosti testů na protilátky proti SARS-CoV-2, viru, který způsobuje onemocnění COVID-19. K definování citlivosti pro akutní a rekonvalescentní vzorky budou použita samostatná kritéria.

1. Senzitivita pro diagnostiku akutních případů bude definována jako % pozitivity ve vzorcích ze symptomatických případů s pozitivními výsledky RT-PCR. .
2. Citlivost pro detekci protilátek v rekonvalescentních vzorcích vyjádřená jako % bude počet pozitivních testů na protilátky dělený počtem vzorků testovaných od osob s prokázanou prodělanou infekcí (pomocí RT-PCR), které jsou nyní alespoň 2 týdny po vymizení příznaků a v současné době RT-PCR negativní.
3. Citlivost bude také definována jako % souhlasu s výsledky z referenčního testu protilátek, jakmile je takový test identifikován.
4. Specificita bude definována jako % negativních kontrolních vzorků (odebraných před 1. 1. 2020), které mají negativní výsledky testu na protilátky.

Sekundární cíle

1. Stanovit vztahy mezi dobou po infekci nebo nástupem příznaků COVID-19 a přítomností protilátek proti viru, jak je stanoveno pomocí testovacích souprav protilátek.
2. Stanovit dobu trvání protilátkových odpovědí po infekci.
3. Porovnat reaktivitu pozadí (míru falešné pozitivity) pro séra z USA vs. séra z rozvojových zemí v oblastech, kde jsou běžné chronické parazitární infekce a konzumace bushmeat nebo kde lidé žijí v úzkém vztahu s divokou zvěří, která může být rezervoárem zoonotických virů.
4. Posoudit výkonnostní charakteristiky testu (snadné použití).

Výhody pro účastníky. Žádný

Výhody pro společnost. Testy protilátek mohou být užitečné pro diagnostiku infekce a pro dokumentaci minulé infekce. Nezávislé studie validace testů jsou kriticky důležité. Je to proto, že výsledky testů společností mohou být zkreslené. Firmy se navíc často nehlásí k uživatelské přívětivosti rychlé diagnostiky. Testy protilátek mohou být zvláště cenné pro použití v zemích s nízkými a středními příjmy, které nemají zdroje pro rozsáhlé molekulární testování infekce SARS-CoV-2.