Valutazione dei test anticorpali per COVID-19

Sfondo

I test molecolari (RT-PCR) sono attualmente il gold standard per la diagnosi di COVID-19. Rilevano l'RNA virale e sono un buon marker per l'infezione e l'infettività in corso. Tuttavia, questi test sono costosi e scarseggiano. Nei casi avanzati di COVID-19, la concentrazione del virus nel tratto respiratorio superiore è spesso bassa, poiché l'infezione si è diffusa ai polmoni e l'RNA virale a volte non è rilevabile dalla RT-PCR utilizzando scambi nasali. I test anticorpali rilevano gli anticorpi umani contro le proteine ​​virali nel sangue o in altri fluidi corporei. Potrebbero essere utili per diagnosticare infezioni in corso (leggermente meno sensibili dei test RT-PCR) e rimangono positivi dopo che le persone si sono riprese dall'infezione. Pertanto, i test anticorpali dovrebbero essere utili per la diagnosi di infezioni in corso, per verificare infezioni recenti in persone che non sono state testate con RT-PCR quando erano malate e per documentare la possibile immunità al virus. I test anticorpali possono essere particolarmente preziosi per l'uso nei paesi a basso e medio reddito che non dispongono di risorse per test molecolari diffusi per l'infezione da SARS-CoV-2.

Sensibilità e specificità previste del test. I dati del produttore per diversi test anticorpali affermano che oltre il 90% delle persone con COVID-19 (sintomi clinici e test molecolari positivi) ha risultati positivi ai test anticorpali per IgM e/o IgG. Rivendicano inoltre una specificità compresa tra il 93 e il 95% per i campioni di persone che non sono state esposte a SARS-CoV-2.

Disponibilità di test anticorpali. Negli ultimi mesi sono stati sviluppati e commercializzati molti test anticorpali. La Foundation for Innovative New Diagnostics (FIND, strettamente collegata all'Organizzazione mondiale della sanità (OMS) e sostenuta da un'ampia sovvenzione del governo del Regno Unito) a Ginevra, in Svizzera, ha riferito di aver identificato più di 70 test di questo tipo e di aver selezionato 27 test per ulteriore valutazione. Di questi, solo un test prodotto negli Stati Uniti (prodotto da Cellex) ha ricevuto un'autorizzazione all'uso di emergenza (EUA) dalla FDA statunitense e nessun test ha un'approvazione formale della FDA. I test sugli anticorpi utilizzano diverse piattaforme diagnostiche, ma la maggior parte dei test utilizza la proteina SARS-CoV-2 S1 e alcuni test utilizzano anche la proteina SARS-CoV-2 N. Pochi studi che hanno valutato in modo indipendente le prestazioni di questi test rapidi sugli anticorpi sono stati pubblicati fino ad oggi su riviste sottoposte a revisione paritaria. Pertanto, sono necessari più dati per valutare la sensibilità, la specificità e il valore di questi test.

Metodi

Il gruppo di ricerca Weil Lab presso la Washington University School of Medicine (WUSM) ha una vasta esperienza nello sviluppo e nella valutazione di test diagnostici in formato rapido per le malattie infettive. Il gruppo ha un interesse speciale per la diagnostica delle malattie infettive che può essere utilizzata nei paesi a basso e medio reddito ed è abituato a lavorare in condizioni difficili dopo l'insorgenza di malattie. In questo progetto, verranno valutati test anticorpali in formato rapido per SARS-CoV-2 e i risultati dei test anticorpali saranno confrontati con i risultati di RT-PCR e metadati (età, sesso, sintomi clinici, tempo dopo l'esposizione se noto).

Campioni pazienti. Campioni di siero o plasma non identificati verranno testati da pazienti che sono stati ricoverati in ospedale e sono risultati positivi al COVID-19. Verranno testati anche campioni di controllo della nostra banca del siero (campioni non identificati di persone sane e campioni di persone con malattie parassitarie). Il numero di campioni di siero o plasma da testare sarà lasciato aperto, ma ciò dipenderà in parte dal numero di campioni disponibili e dalla disponibilità dei kit di analisi. Si prevede che inizialmente verranno testati circa 500 campioni, ma se necessario per raggiungere gli obiettivi dello studio potrebbero essere testati altri campioni. I test e la ricerca sono solo per la ricerca e non riporteremo i risultati dei test da singoli campioni di pazienti ai medici per supportare la cura del paziente.

Nota: non sarà condotta alcuna iscrizione volontaria a questo studio; tutti i test devono essere condotti in modo anonimo.

Kit per test anticorpali. I kit commercializzati per il rilevamento di anticorpi commerciali o prototipo saranno ottenuti tramite donazione o acquisto. I test da valutare devono essere determinati, ma ciò dipenderà dalla disponibilità e dal costo. L'attenzione si concentrerà sui kit di test degli anticorpi point-of-care in formato rapido che rilevano sia gli anticorpi IgM che IgG contro le proteine ​​virali ricombinanti. L'obiettivo è testare almeno cinque (5) kit diversi, inclusi almeno due (2) fabbricati negli Stati Uniti.

Procedure di prova. Saranno seguiti i foglietti illustrativi o i protocolli dei produttori per le prestazioni dei test. Questi variano tra diverse piattaforme di test. Le persone che eseguono i test non conosceranno i risultati della PCR o altri metadati associati ai campioni umani quando eseguono i test. Le prove saranno lette da due lettori indipendenti e registrate. Un terzo lettore sarà il voto decisivo per i casi con letture discordanti.

Dati di test. I risultati del test anticorpale (IgM e IgG) per ogni diverso kit di test verranno inseriti in un modulo dei risultati del test con il numero identificativo univoco (UI) del partecipante. I risultati verranno successivamente uniti in un database che contiene l'interfaccia utente e metadati come età, sesso, febbre, tosse, data di raccolta del campione, data di insorgenza dei sintomi, cronologia dell'esposizione (viaggio, famiglia, lavoro). L'accettabilità delle prestazioni del test sarà giudicata in base a un profilo del prodotto target di lavoro (TPP) allegato alla fine di questo protocollo.

Obiettivo primario

1. Valutare la sensibilità e la specificità dei test per gli anticorpi contro SARS-CoV-2, il virus che causa la malattia COVID-19. Saranno utilizzati criteri separati per definire la sensibilità per campioni acuti e convalescenti.

1. La sensibilità per la diagnosi di casi acuti sarà definita come % di positività nei campioni di casi sintomatici con risultati RT-PCR positivi. .
2. La sensibilità per la rilevazione di anticorpi in campioni convalescenti espressa in % sarà il numero di test anticorpali positivi diviso per il numero di campioni testati da persone con infezioni pregresse documentate (mediante RT-PCR) che hanno superato la risoluzione dei sintomi da almeno 2 settimane e attualmente RT-PCR negativo.
3. La sensibilità sarà definita anche come percentuale di concordanza con i risultati di un test anticorpale di riferimento non appena ne viene identificato uno.
4. La specificità sarà definita come la % di campioni di controllo negativi (raccolti prima del 1/1/2020) che hanno risultati negativi al test anticorpale.

Obiettivi secondari

1. Determinare le relazioni tra il tempo dopo l'infezione o l'insorgenza dei sintomi di COVID-19 e la presenza di anticorpi contro il virus come determinato dai kit di test degli anticorpi.
2. Per determinare la durata delle risposte anticorpali dopo l'infezione.
3. Confrontare la reattività di fondo (percentuali di falsi positivi) per i sieri degli Stati Uniti rispetto ai sieri dei paesi in via di sviluppo in aree in cui le infezioni parassitarie croniche e il consumo di selvaggina sono comuni o dove le persone vivono in stretta relazione con la fauna selvatica che potrebbe essere un serbatoio di virus zoonotici.
4. Per valutare le caratteristiche delle prestazioni del test (facilità d'uso).

Vantaggi per i partecipanti. Nessuno

Vantaggi per la società. I test anticorpali possono essere utili per la diagnosi di infezione e per la documentazione di un'infezione pregressa. Gli studi di convalida dei test indipendenti sono di fondamentale importanza. Questo perché i risultati dei test delle aziende possono essere distorti. Inoltre, le aziende spesso non segnalano la facilità d'uso della diagnostica rapida. I test anticorpali possono essere particolarmente preziosi per l'uso nei paesi a basso e medio reddito che non dispongono di risorse per test molecolari diffusi per l'infezione da SARS-CoV-2.