Evaluación de Pruebas de Anticuerpos para COVID-19

Fondo

Las pruebas moleculares (RT-PCR) son actualmente el estándar de oro para el diagnóstico de COVID-19. Detectan el ARN viral y son un buen marcador para la infección actual y la infectividad. Sin embargo, estas pruebas son costosas y escasas. En los casos avanzados de COVID-19, la concentración del virus en el tracto respiratorio superior suele ser baja, ya que la infección se ha propagado a los pulmones y el ARN viral a veces es indetectable mediante RT-PCR utilizando intercambios nasales. Las pruebas de anticuerpos detectan anticuerpos humanos contra proteínas virales en la sangre u otros fluidos corporales. Podrían ser útiles para diagnosticar infecciones actuales (ligeramente menos sensibles que las pruebas de RT-PCR), y siguen siendo positivas después de que las personas se hayan recuperado de la infección. Por lo tanto, se espera que las pruebas de anticuerpos sean útiles para el diagnóstico de infecciones actuales, para verificar infecciones recientes en personas que no se sometieron a la prueba de RT-PCR cuando estaban enfermas y para documentar la posible inmunidad al virus. Las pruebas de anticuerpos pueden ser especialmente valiosas para su uso en países de ingresos bajos y medianos que carecen de recursos para pruebas moleculares generalizadas para la infección por SARS-CoV-2.

Sensibilidad y especificidad previstas de la prueba. Los datos del fabricante para varias pruebas de anticuerpos afirman que más del 90 % de las personas con COVID-19 (síntomas clínicos y pruebas moleculares positivas) tienen resultados positivos en las pruebas de anticuerpos para IgM y/o IgG. También afirman una especificidad en el rango de 93-95 % para muestras de personas que no han estado expuestas al SARS-CoV-2.

Disponibilidad de pruebas de anticuerpos. En los últimos meses, se han desarrollado y comercializado muchas pruebas de anticuerpos. La Fundación para Nuevos Diagnósticos Innovadores (FIND, estrechamente vinculada a la Organización Mundial de la Salud (OMS) y apoyada por una gran subvención del gobierno del Reino Unido) en Ginebra, Suiza, informó que había identificado más de 70 pruebas de este tipo y preseleccionó 27 pruebas para evaluación adicional. De estos, solo una prueba producida en los EE. UU. (producida por Cellex) ha recibido una autorización de uso de emergencia (EUA) de la FDA de los EE. UU., y ninguna prueba tiene la aprobación formal de la FDA. Las pruebas de anticuerpos usan diferentes plataformas de diagnóstico, pero la mayoría de las pruebas usan la proteína S1 del SARS-CoV-2 y algunas pruebas también usan la proteína N del SARS-CoV-2. Pocos estudios que evaluaron de forma independiente el rendimiento de estas pruebas rápidas de anticuerpos se han publicado hasta la fecha en revistas revisadas por pares. Por lo tanto, se necesitan más datos para evaluar la sensibilidad, la especificidad y el valor de estas pruebas.

Métodos

El grupo de investigación Weil Lab de la Facultad de Medicina de la Universidad de Washington (WUSM) tiene una amplia experiencia en el desarrollo y evaluación de pruebas de diagnóstico de formato rápido para enfermedades infecciosas. El grupo tiene un interés especial en el diagnóstico de enfermedades infecciosas que se puede utilizar en países de ingresos bajos y medianos y está acostumbrado a trabajar en condiciones difíciles después de brotes de enfermedades. En este proyecto, se evaluarán las pruebas de anticuerpos de formato rápido para SARS-CoV-2 y los resultados de las pruebas de anticuerpos se compararán con los resultados de RT-PCR y los metadatos (edad, sexo, síntomas clínicos, tiempo después de la exposición cuando se conozca).

Muestras de pacientes. Se analizarán muestras de suero o plasma no identificadas de pacientes que hayan sido hospitalizados y hayan dado positivo por COVID-19. También se analizarán muestras de control de nuestro banco de suero (muestras no identificadas de humanos sanos y muestras de personas con enfermedades parasitarias). La cantidad de muestras de suero o plasma que se analizarán se dejará abierta, pero esto dependerá en parte de la cantidad de muestras disponibles y la disponibilidad de kits de prueba. Se anticipa que se analizarán aproximadamente 500 muestras inicialmente, pero se pueden analizar más si es necesario para lograr los objetivos del estudio. Las pruebas y la investigación son solo para investigación, y no informaremos los resultados de las pruebas de muestras de pacientes individuales a los médicos para respaldar la atención del paciente.

Nota: No se realizará ninguna inscripción voluntaria en este estudio; todas las pruebas deben realizarse de forma anónima.

Kits de prueba de anticuerpos. Los kits de detección de anticuerpos comerciales o prototipos comercializados se obtendrán mediante donación o compra. Las pruebas a evaluar están por determinarse, pero esto dependerá de la disponibilidad y el costo. La atención se centrará en kits de prueba de anticuerpos de formato rápido en el punto de atención que detectan anticuerpos IgM e IgG contra proteínas virales recombinantes. El objetivo es probar al menos cinco (5) kits diferentes, incluidos al menos dos (2) fabricados en los EE. UU.

Procedimientos de prueba. Se seguirán los prospectos o protocolos de los fabricantes para la realización de la prueba. Estos varían según las diferentes plataformas de prueba. Las personas que realicen las pruebas no conocerán los resultados de PCR u otros metadatos asociados con las muestras humanas cuando realicen las pruebas. Las pruebas serán leídas por dos lectores independientes y grabadas. Un tercer lector será el voto decisivo para los casos con lecturas discordantes.

Datos de prueba. Los resultados de la prueba de anticuerpos (IgM e IgG) para cada kit de prueba diferente se ingresarán en un formulario de resultados de la prueba con el número de identificación único (IU) del participante. Los resultados luego se combinarán en una base de datos que contiene la interfaz de usuario y metadatos como la edad, el sexo, la fiebre, la tos, la fecha en que se recolectó la muestra, la fecha de inicio de los síntomas, el historial de exposición (viajes, hogar, trabajo). La aceptabilidad del rendimiento de la prueba se juzgará de acuerdo con un perfil de producto objetivo de trabajo (TPP) adjunto al final de este protocolo.

Objetivo primario

1. Evaluar la sensibilidad y especificidad de las pruebas de anticuerpos contra el SARS-CoV-2, el virus que causa la enfermedad COVID-19. Se utilizarán criterios separados para definir la sensibilidad para muestras agudas y convalecientes.

1. La sensibilidad para el diagnóstico de casos agudos se definirá como el % de positividad en muestras de casos sintomáticos con resultados positivos de RT-PCR. .
2. La sensibilidad para detectar anticuerpos en muestras convalecientes expresada como % será la cantidad de pruebas de anticuerpos positivas dividida por la cantidad de muestras analizadas de personas con infecciones pasadas documentadas (mediante RT-PCR) que ahora tienen al menos 2 semanas de resolución de los síntomas y actualmente RT-PCR negativo.
3. La sensibilidad también se definirá como el % de concordancia con los resultados de una prueba de anticuerpos de referencia tan pronto como se identifique una.
4. La especificidad se definirá como el % de muestras de control negativas (recolectadas antes del 1/1/2020) que tienen resultados negativos en la prueba de anticuerpos.

Objetivos secundarios

1. Determinar las relaciones entre el tiempo después de la infección o el inicio de los síntomas de COVID-19 y la presencia de anticuerpos contra el virus según lo determinado por los kits de prueba de anticuerpos.
2. Para determinar la duración de las respuestas de anticuerpos después de la infección.
3. Comparar la reactividad de fondo (tasas de falsos positivos) para sueros de EE. UU. frente a sueros de países en desarrollo en áreas donde las infecciones parasitarias crónicas y el consumo de carne de animales silvestres son comunes o donde las personas viven en estrecha relación con la vida silvestre que puede ser un reservorio de virus zoonóticos.
4. Para evaluar las características de rendimiento de la prueba (facilidad de uso).

Beneficios para los participantes. Ninguno

Beneficios para la sociedad. Las pruebas de anticuerpos pueden ser útiles para el diagnóstico de infecciones y para la documentación de infecciones pasadas. Los estudios de validación de pruebas independientes son de vital importancia. Esto se debe a que los resultados de las pruebas de las empresas pueden estar sesgados. Además, las empresas a menudo no informan sobre la facilidad de uso de los diagnósticos rápidos. Las pruebas de anticuerpos pueden ser especialmente valiosas para su uso en países de ingresos bajos y medianos que carecen de recursos para pruebas moleculares generalizadas para la infección por SARS-CoV-2.